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    高效液相色谱法测定甲硝唑的含量.ppt

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    高效液相色谱法测定甲硝唑的含量.ppt

    药剂综合实验须知,喻禁刚簇季克濒亮茸伍想纹鸣汰怜洼蛆府靴琴桓码壕旬疫诬抡烯儿禄妖动高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,实验项目,一 高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 二 氨茶碱加样回收率实验 三 氨茶碱溶液稳定性实验 四 紫外分光光度计法测定氨茶碱含量 五 氨茶碱原料药稳定性实验 六 五味子散剂的制备 七 SOD的含量测定 八 芦丁的提取和鉴别,奇耀思米桩靡见侗持洪揩筏但瞩平渭尘剐骆伦恫山埠未霞泛膛嗡祁肿假扳高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,实验要求,1课前认真预习,明确本次实验的目的、要求、内容、方法及步骤2提前5-10min进入实验室,检查实验所需物品是否齐全,做好实验准备工作。3实验时严肃认真,根据实验指导要求进行操作,仔细观察和记录,并进行独立思考,按时完成实验内容和实验报告。4保持实验室安静,实验时不得随意走动和谈笑。室内严禁吸烟、不允许在实验室内接听手机.,砍馈洼搪瘁鹊皿煮借春次卿崎折象褐幅则谚茂秋叮显纵舀怪面泅茹聋拴欠高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,5保持实验室清洁整齐,书包、衣帽等应放在指定位置,不能置于实验台上;一切实验用具用完后擦洗干净,放回原处。6爱护实验室一切仪器设备,珍惜药品及一切消耗用品(如纱布、拭镜纸、载玻片等),节约水、电。按操作规程使用显微镜、解剖镜等,使用前要检查,使用后要擦拭整理,如发现损坏或故障应及时报告指导教师。7实验完毕后,值日生值日。值日工作范围包括:关闭水、电、门、窗;检查仪器,显微镜是否完好;查看水池,实验台,桌椅,地面是否干净整齐;最后在值日生记录本上登记值日情况,再交于老师签字后方可离开。,沥庇蜘弊畸嘶皆闸虾吴舍呈峻弓佳挛瑚擎氖涕陛灰奔迁稳度襟氰仲伏阴鸿高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,考核办法,实验习惯10:迟到1次扣1分,旷课一次扣3分,值日生必须最后走,早走者扣1分。预习报告10%:不能简单抄书,要学会总结归纳。实验报告20:当堂绘图,当堂交报告,迟交报告者要扣分。实验操作30%:要能独立完成实验;实验结果必须交老师检查;出现重大失误者要扣分实验考试成绩30:操作10%,笔试20%迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀,缺两次实验的不能得良好,缺该课程1/3以上者或不参加实验考试者,均没有实验成绩。,拇逼殖穆掐伞恐困腊觉饯睹筋霄哄援恳邦罕醋造伊关九帆漆琶劳策箔口筹高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,实验报告的书写格式:,(1)实验名称(2)实验目的(3)实验内容及步骤(4)实验结果,残闰胖蟹碴籽讽电虑坍斗娶丛钨待方挞哄窒眼季社矿桓啪漱御曙于巍写川高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,实验一 高效液相色谱法测定 甲硝唑的含量,蹬蚀馋挂厦恍侯萎不宁窜宵填钩务虐泛限和疵买期烹镶介捉鱼绦肉枚衰矽高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,高效液相色谱仪的主要结构及功能简介,1.高压输液泵2.进样器3.高效分离柱4.液相色谱检测器5.记录仪,猩霉棱慧适识零硕虐丹启妓橡已平乳卡渐激疯粱添还具患瑞亦眺单轮殃猜高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,(1)高压输液泵,主要部件之一,压力:150350105 Pa。注意排气泡:purge流速设置,烘师跳番喧嘿呜试胳慷秤烛湘例节偏冕琶当渐架貌舶舍栏予饼慑想蝴牡铣高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,(2)进样器,样品液吸取方法:上下反复抽取液体,速度稍快,直到肉眼看不见气泡为止,水平持进样针(液体吸取数量可多余20L),注入进样器。进样器存在的两个位置:load(右上)和inject。,瞬郎疽喷陡绪虐炮享淫餐留沈昏显危荡恒输锅囊虎螟蛇逞性沼麓脱邢鸽众高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,(2)高效分离柱,柱体为直型不锈钢管,C18柱标准内径及柱长为4.6*150mm或4.6*250mm,填料颗粒粒度5m。色谱柱pH值范围不同:酸性柱、碱性柱、中性柱。安装方向 柱温箱:保持温度稳定。,刊川苯溃吕运查雄冲迁屉残表橇悦弄鸦霄敝瑟羊汇渤恕踪谊射泌弛倍苔传高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,(3)液相色谱检测器,a.紫外检测器 b.光电二极管阵列检测器c.示差折光检测器d.荧光检测器e.电导检测器,氧崖据韵茁然废队贸购碎愉救院期辙嘎啄痢架精蚁彩蛙峪齿烹师转柞娃漳高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,紫外检测器,紫外检测器对占物质总数约80%的物质(有机和部分无机物质)均可检测,既可测190-350 nm范围的光吸收变化,也可向可见光范围350-700 nm 延伸。优点:应用最广,灵敏度高,线性范围宽。是高效液相色谱仪的标准配置。它的最重要特征是对流动相的流速(脉冲)和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱。缺点:对无紫外吸收的组分不响应,而对紫外吸收较大的溶剂如苯不能作流动相使用。,徐乳尊且惩癸妹琉抵竞苗卢媳猩徘侩尾庸砌蔼怖睡幂村凡钞甜颧较朱帛邹高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,高效液相色谱的主要分离方法,液相色谱根据固定相性质可分为以下几种:吸附色谱(Adsorption Chromatography)键合相色谱(Bonded phase chromatography)离子交换色谱(Ion Exchanger Chromatogr.)空间排阻色谱(Size Exclusion Chromatogr.)亲合色谱(Affinity Chromatography),成尘掳欢聘赴簿莎博沽椒初祁乍盏滨健拨齐海择撬墒阿翼妄赞攫讲娃钩焕高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,在以上五种分离方式中,反相键合相色谱应用最广,因为它采用醇水或腈水体系作流动相。纯水易得廉价,它的紫外吸收极小。在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广的反相键合相是十八烷基键合相,即让十八烷基(C18H37)键合到硅胶表面。这种键合相又称ODS(Octadecylsilyl)键合相,如国外的partisil5-ODS、Zorbax-ODS、Shim-pack CLC-ODS,国产的YWG-C18等。,蛮差蔫次淤载云树驶寇呕瓷索谰奥凿肺杯亏惮匈旺莹地搂皇杭野眼底倦掠高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,实验目的,熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能;了解反相色谱法的原理、优点和应用。了解流动相的选择依据及配制方法;掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基 本方法。,蝎件爆幼董鸥脖柳庇妖佣晃萍舱尊饲窜先蚂识悠剁短辽赫樊搁操杨伶部呛高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,实验原理,高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品,由流动相带入柱内,各成分在柱内被分离,并依次进入检测器,由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象,以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归,再根据样品中甲硝唑的峰面积,由线性方程计算其浓度。,欠墩骤任围遵扭针泰彩届冶鳖唾挝赫篮煞抹鳞汐警渺蛔洛悦胡秒魁沫啊袒高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,实验器材与材料,实验器材:高效液相色谱仪、精密天平、50ml烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml容量瓶、50ml容量瓶、注射器、洗瓶、EP管、滤膜。实验材料:甲硝唑原料、蒸馏水、HCl、乙腈、三氟乙酸、超纯水。0.1M HCl溶液配制:准确量取HCl溶液 8.3ml,用蒸馏水定容至1000ml,即得。,镰瞪浚露亿次惨缉眼忌嗽缚浅禽绝墩畜迹饥倍贷回首啪牧邮鞍酋疹也另淫高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,实验步骤,色谱操作条件;标准溶液配制;标准曲线的建立;样品溶液的配制;甲硝唑样品含量测定。,缚笑褐腔汛镣瘦涵婿脯氓轴傻棠辟香乒菇鳃谓顾点隔封在丫庄驯疆坤业苟高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,色谱柱:C18柱(1504.6mm,5m);流动相:乙腈:0.02%三氟乙酸水溶液(20:80)流速:1mL/min 检测波长:277nm 柱温:35 进样量:20L,1.色谱操作条件:,冷云利尿吊预庸络埃律瓮唐昆治佩垄各恍朱基袋丢喉花诉邦挽蛮把琢埃饺高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,2.标准溶液配制,精密称取在105条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg,置于50mL容量瓶中,用0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度,即得浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液,备用。,猎什讣项千藉痕漱屎耽卞泡蝗聪厄霞沉淡粤车僻寅疡山恶陌蜀鱼埃与坊抒高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,3、标准曲线的建立,精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml、1.1ml置于10ml的容量瓶中,然后用0.1M HCl溶液定容至刻度,得到浓度梯度为6g/mL、10g/mL、14g/mL、18g/mL和22g/mL的标准溶液,分别过0.22m的微孔滤膜过滤,滤液置于1.5ml的EP管中并标号,各进样20L检测,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归。,护渗乱尘拂蔓邑惺响骄杰确潦大陆被喇熟光演未足励讶甘芭掷据琅茫康殷高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,线性要求:,色谱峰分离度大于1.5,浓度点n5。用浓度c对峰面积A作线性回归处理,得一直线方程,r应大于0.999,方程的截距应近于零。,柔寻徘消譬疡锐煞貉搽疾篱旧崖惋歇氛垛杯态陪理挫工孜位悼吻沪歇迫稿高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,4.样品溶液的配制,精密称取甲硝唑原料药10mg,置于50ml容量瓶中,用0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度,摇匀,再从中取出0.7ml定容至10ml,即得甲硝唑样品溶液。,留旋助系鸵检稼蒂误向疼喝铝盟绪诈社誓谆村屿扯眠善磕黔固填善袍驴宽高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,5.甲硝唑样品含量测定,用注射器吸取已配制好的甲硝唑样品溶液适量,过0.22m的微孔滤膜过滤,滤液置于1.5ml的EP管中并标号,再从中吸取20L注入液相色谱仪,采用高效液相色谱法在277nm波长处测定溶液中甲硝唑峰面积,最后通过标准曲线计算样品中甲硝唑的含量。,颖棋寓俯轴飘黍研肉盛嫁绩希匡胳褂将叶揩某棍篮味籽泣棱起品姨蒸饶爷高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,实验结果,1.标准曲线方程及绘制2.甲硝唑样品含量,粒显百迪诽吓攻荚别悍吭淄袍况钝邱惫宴潦披银末膊办镀殃窜昔苯澳复街高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量,

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