影响原生质体融合的因素.ppt

影响原生质体融合的因素,细胞工程,植物体细胞杂交过程中，有许多因子可以影响最后的结果，其中包括前面提到的原生质体分离和培养的所有影响因子，融合双亲缘关系远近及品种组合，融合方法和参数等。,融合方法,电融合,PEG融合,1.PEG诱导融合法PEG诱导融合的特点：优点是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。缺点是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害。PEG作用机理：Kao等认为，由于PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在原生质体之间形成分子桥，其结果使原生质体发生粘连进而促进原生质体融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动性，也使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能。,2电融合法 Electrofusion,Electrically induced fusion 与PEG融合相比，电融合有三大优点：不存在对细胞的毒害问题；融合效率高；融合技术操作简便。,电融合仪的结构特点：交变电场部分高频直流电击部分,电融合的基本过程：细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶液中时，电场通电后，电流即通过原生质体而不是通过溶液，其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶极子，从而使原生质体紧密接触排列成串；膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给予高频直流脉冲就可以使原生质膜击穿，从而导致两个紧密接触的细胞融合在一起并圆球化。,关于融合参数：交流电压 交变电场的振幅频率 交变电场的处理时间 直流高频电压 脉冲宽度 脉冲次数,Thank you,