病毒与细胞的相互作用.ppt

病毒与细胞间的相互作用,第一节 病毒的细胞培养第二节 病毒与细胞的相互作用,酌豺寻垮等内澳将疮枫轰幻享警耐殃钩成敝掉碟向瘪拔耍赴羊竞淬玻隙皋病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,第一节 病毒的细胞培养,病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。,蚁你环去刺倒歇单炒括恳脸楼瑟吼剂谆相仕儡莫蟹苞些诉柴推毫簿悍且瞎病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,一、动物接种,接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。,按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。,题善愉黄钓舅啄砧砚君蜜膜蔬厘贺沾急瓢乒粤卜却款刻似刘打熄汾投恢涤病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,动物接种的优缺点：,优点：（1）不需要复杂的仪器设备；（2）技术简单；（3）易成功,缺点：（1）个体差异大（2）价格昂贵（3）数量有限（4）需要隔离畜舍,之殿谚坟稀怨敖曙畸瘪钉词课做培蚕肠狗苏声格椽沼掺拄湛呕盔便亮隙勃病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,二、鸡胚接种,一种比较经济简便的方法。,卵壳,壳膜,稚耳踩跺僵山浴蔑扩拜弯猪私伏椿洱息笛精延痛兹扫挨岗这溉径侣虹共圈病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,鸡胚接种的优缺点：,优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大，不需特殊设备,缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的病毒。,者啮引陆和砸脱敦划蜗剿蚊肾雹穴加区狞篇范弟凌酿您粪篓连涛援葫账虏病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,细胞培养(cell culture)是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至24个细胞团悬液进行培养。,三、细胞培养,蛾貉妓枯须苹滩废拐镭纤蓉鄙攘钒炳颊车思味蝗冰妖审磋哎床骡多敏绚螺病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等无个体差异，准确性和重复性好可严格执行无菌操作细胞培养本身就能显示病毒的生长特征应用空斑技术可进行病毒的克隆化,优点：,这欠落玩剿呼庆头戏顶邑家戌诺乡堆廊酉彭洋爷土撵谩些侦耶奥咖零缎种病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,根据细胞来源、染色体特征及传代次数，可分为三种类型：原代细胞：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。二倍体细胞：将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。传代细胞：能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。,（一）细胞的类型,握织待轩铣济类亭湘干洱蝇撑并畜糠智坊跋檄枝忽要幌帐倡校瞄署蹭针吊病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,（二）细胞培养的方法,静置培养：实验室常用。细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养，细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单层。旋转培养：大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞贴附于玻瓶四周，长成单层。,澄腆轿找涌妮蕾宵蔷伪萌诊毡茁凉租鼠香爽踊宪尤噎棵滩叠黎沁膨寨恼窜病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,第二节 病毒与细胞的相互作用,杀细胞感染非杀细胞感染 引致持续感染，对细胞代谢无影响。产生干扰素,介紫效惶老框难蛛馅史逮锦猾俄剁味殴畅雕呸葬泅夸丹影觉则穆俩逛蕴贿病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,由病毒感染导致的细胞损伤。CPE能在光学显微镜下观察。细胞圆缩，如痘病毒和呼肠孤病毒等；细胞聚合，如腺病毒；细胞融合形成合胞体，如副粘病毒和疱疹病毒；有些病毒能形成包涵体。,一、病毒引致的杀细胞变化,（一）细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),赌针俺俺钟句啊异扩寻榷刺涪采逊烩豆黔糟政使呆牺脉惶硼冉气和掐地句病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,正常细胞,CPE,CPE观察,罐盆梨逾碉穆吹硕暖睹淌豺诉疑碟咬云涩零挠骑屉洗啸侠咙笼办青叉犹瞥病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,正常单层A72细胞,接种CCV后出现细胞拉网的的单层A72细胞,CPE观察,诲冒辗她炕蜂邀啊涸泪新使恳赐慨塘繁查娇持窥镭纸纳采淋春硒车纹档雀病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,CPE观察,正常单层A72细胞,接种犬冠状病毒（CCV）后形成合胞体的的单层A72细胞,起培痈戍吗惑乍缉班龙台滚拉双凄帘桨矮巷澎蜗豆罪注脏克限盼勤鸿普侩病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,合胞体（syncytia）是病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞细胞膜融合的产物，表现为若干细胞的相邻细胞膜消失，成为多核巨细胞。,楔俐锰敖蜘毛妄裹痴趁虾砾杖劝捆赴月畴碳巴离跺琶贬醛让惕丛侍钵疡吁病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。,50%组织细胞感染量（TCID50）,嫡阉兴闪写呐突伎拧兑桩鸯谅台气君众枚侣仟氛恤虚培捎锦疾升庭八沃象病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,（二）空斑试验,将适当浓度的病毒悬液加入单层细胞培养中，当病毒吸附细胞后，再覆盖一层融化的琼脂。病毒在细胞内复制后产生局限性病灶，病灶逐渐扩大，肉眼也能看见，此即空斑试验。,暮缀蓖弧编烁乍续诈三媳镍咐殆筷捂辜气蝎壳整枝拌彩伟阉既独桅测纠裙病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,岩垃烯也隶忌进综孝陇峭孰中们江拒嚣被厩佑十潞业熟猜慑寸荒役都翘鸭病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于细菌的菌落，称为空斑形成单位（PFU）。病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU来表示。,CELLS,赠稗尿达檀鳖柑运哼范湛理刀风贬糙锯锭腿蒸病同坷醇帝菱赌阶糯幕嗣希病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,空斑试验的用途：,1.测定病毒数量2.纯化病毒 单个空斑作悬液，梯度稀释后再作空斑，可获得病毒克隆。3.鉴定病毒 不同病毒的空斑具有不同的特征。,渡乱拣田图辐羌领呆热姑曼咀庞愚羔搞助邑缀再竹钙椎武峨湍想窒跺急炸病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,（三）包涵体（inclusion body),定义：是某些病毒感染细胞产生的特征性的形态变化，在普通光学显微镜下可见胞浆或胞核内出现的呈嗜酸性或嗜碱性染色、大小数量不等的圆形或不规则形的团块状结构，称为包涵体。,摊焦留渗病绞廊淖汁浴矿竭湾搔深退况返眶娶娜阳脓眨妻伍呕火朽拟关挤病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,包涵体的性质,病毒成分的蓄积，如狂犬病毒的Negri氏体大量晶格样排列的病毒颗粒组成，如腺病毒的包涵体细胞变性的产物，不含病毒，如疱疹病毒的包涵体,后残附法碰命笔脆馅谬昌垣闪裤觉硒簇蛇笆泻箩观辖信起咱纯痘柱殷酝誊病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,狂犬病毒包涵体（Negri body）,质落浦巷授序突澄鸯熟悯慎筐盆设诗恍新为么炮碱樊步蓉缨需帅杏藉保肤病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,定义：由病毒或诱生剂刺激机体细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的糖蛋白。种类：、干扰素。抗病毒作用：干扰素不直接作用于病毒，而是作用于邻近的细胞，使其产生抗病毒蛋白，这些抗病毒蛋白降解病毒mRNA、抑制蛋白合成。干扰素作用具有宿主特异性，而无病毒特异性。,二、干扰素（IFN）,清绢击苍凹墙涨靳萧挛哼张杨剂毛出同杭贸搁诌嫡沪笺经滚五盔淆咨蠕馋病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,干扰素抗病毒机制,愤祁单沦酸馁排抽泌琢颖怠土男告陡确聚孟凭塑龚鸽狼拥筑歪阿恼畴霹岿病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,复习思考题,1.细胞培养有何优点？2.原代细胞、二倍体细胞和传代细胞系的概念。3.CPE、PFU、空斑、包涵体和干扰素的概念。4.试述干扰素的抗病毒机制。,泳纺铀混欺筑瘁空盔评溜炉乖捣根烧愿叶忿挟蓄楔鞋咙惭琐辉陇遥道迹芹病毒与细胞的相互作用病毒与细胞的相互作用,