紫癜性肾炎患儿血清BAFF、MK水平与肾损伤及Th17和调节性T细胞平衡的关系研究.docx

紫藏性肾炎患JL±清BAFF.MK水平与肾损伤及Thl7和调节性T细胞平衡的关系研究谢宇飞，马彩霞，杨丽萍复旦大学附属中山医院青浦分院儿科上海201700【摘要】目的：研究紫瘢性肾炎(HSPN)患儿血清B淋巴细胞活化因子(BAFF)、中期因子(MK)水平与肾损伤及Thl7和调节性T细胞平衡的关系。方法：将医院从2017年1月2020年1月收治的71例HSPN患儿纳入研究，记作研究组。另取同期医院收治的过敏性紫瘢(HSP)患儿70例作为HSP组。另取同期于医院体检的健康志愿儿童70例作为对照组。检测并比较三组患儿血清BAFF、MK水平，皆损伤相关指标水平，Thl7和调节性T细胞比例以及Thl7细胞相关因子水平等方面的差异，来用Preason相关性分析血清BAFF.MK水平与肾损伤及Thl7和调节性T细胞平衡的相关性。结果：研究组血清BAFF水平为(0.65±0.20)gL,低于HSP组的(1.27±0.44)HgZL及对照组的(1.28±0.45)gL,而血清MK水平为(314.22±80.14)pgml,高于HSP组的(176.12±48.91)pg/ml及对照组的(10132±40.36)pg/ml,其中HSP组血清MK水平高于对照组(均PVO.05),HSP组血消BAFF水平与对照组比较无明显差异(尸>0.051.研究组尿微量白蛋白、尿转铁蛋白以及尿微球蛋白水平分别为(1737±3.25)mg/dk(1.27±0.34)mg/dk(0.45±0.08)mgL,均高于HSP组的(0.78±0.2l)mg/dk(0.l8±0.05)mg/dk(O.22±O.O3)mgL,以及对照组的(0.72±0.25)mg/dk(0.l7K).02)mg/dk(0.2l±().04)mg/L(均TVo.05),而HSP组尿微量门蛋白、尿转铁蛋白以及尿微球蛋白水平与对照组比较无明显差异(均P>0.05)°三组间尿素城及肌醉水平相比，差异无统计学意义(P>0.05)»研究组Thl7细胞比例以及血清IL-6、IL-I7水平分别为(1.56+0.35)%、(21.45±5.11)pg/ml、(91.56+20.15)ngL,明显高于HSP组的(0.6810.14)%、(I4.72±3.10)pg/ml、(45.IO±14.56)ngL,而调节性T细胞比例为(2.51±0.52)%,明显低于HSP组的(6.31±1.37)%,且HSP组ThI7细胞比例以及血清IL-6sIL-17水平明显高于对照组的(0,52±0.ll)%、(I0.44±2.()9)pg/ml、(20.62±3.92)ngL,而调节性T细胞比例明显低于对照组的(7.9田.44)%(均PVo.05)。经PrCaSOn相关性分析可得：血清BAFF与ThI7细胞比例、尿微量白蛋白、尿转铁蛋白、尿微球蛋白以及血清IL6、ILI7均呈负相关，与调节性T细胞比例呈正相关；血清MK与ThI7细胞比例、尿微量白蛋白、尿转铁蛋白、尿。微球蛋白以及血清IL-6、IL/7均呈正相关，与调节性T细胞比例呈负相关(均PV0.05)°结论，HSPN患儿血清BAFF存在异常低表达，而MK存在异常高表达，两者均和患儿肾损伤以及Thl7和调节性T细胞平衡密切相关，值得临床重点关注。【关键词】紫搬性肾炎；B淋巴细胞活化因子；中期因子；肾损伤：Thl7细胞；调节性T细胞TherelationshipbetweenserumBAFFandMKlevelsandkidneyinjuryandTh17andregulatoryTcellbalanceinchildrenwithPurpuranephritisXieYu-fei,MaCai-xia,YangLi-pingDepartmentofPediatrics.QingpuBranchofZhongshanHospitalAffiliatedtoFudanUniversity,Shanghai,201700AbstractObjective:TostudytherelationshipbetweenserumBlymphocyteactivatingfactor(BAFF)andintermediatefactor(MK)levelsandrenalinjuryandTh17andregulatoryTcellbalanceinchildrenwithPurpuranephritis(HSPN).Methods:Atotalof71childrenwithHSPNadmittedtoourhospitalfromJanuary2017toJanUary2020wereincludedinthestudyandrecordedasthestudygroup.Another70childrenwithHenoch-Schonleinpurpura(HSP)admittedtohospitalduringthesameperiodwereselectedasHSPgroup.70healthychildrenwhoundenventphysicalexaminationinhospitalduringthesameperiodwereselectedasthecontrolgroup.TliedifferencesinserumBAFFandMKlevels,renalinjury-relatedindexeslevels.Th17andregulatoryTcellsproportionandTh17cell-relatedfactorsamongthethreegroupsweredetectedandcompared.PreasoncorrelationwasusedtoanalyzethecorrelationbetweenserumBAFFandMKlevelsandrenalinjuryandbalanceofTh17andregulator'Tcells.Results:TheserumMKlevelofHSPgroupwas(0.65÷0.20)gL,lowerthanthatofHSPgroup(1.27±().44)gLandcontrolgroup(l.28±0.45)gL,whiletheserumMKlevelofHSPgroupwas(314.22±80.14)pgml,higherthanthatofHSPgroup(I76.12±48.9l)pg/mlandcontrolgroup(IOI.32±4O.36)pg/ml.TheserumMKlevelofHSPgroupwashigherthanthatofcontrolgroup(bothP<0.05),andthescrumBAFFlevelofHSPgroupwasnotSigniHcantlydiflercntfromthatofcontrolgroup(P>0.05).Thelevelsofurinarymicroglobulin,urinarj,transferrinandurinary-microglobulininthestudyg)upwere(I7.37±3.25)mgdl,(1.27±O.34)mg/dland(0.45±0.08)mg/Lrespectively,whichwerehigherthanthoseintheHSPgroup(0.78±0.21)mg/dl,(0.18±0.05)mg/dl,(0.22±().()3)mgL,andhigherthanthoseinthecontrolgroup().72±O.25)mg/dl,(0.17±0.02)mg/dl,(0.21±0.04)mg/L(allP<0.05),butthelevelsofurinarymicroalbumin.urinarytransierrinandurinarymicroglobulininHSPgroupwerenotsignicantlydiIIcrentfromthoseinthecontrolgroup(allP>0.05).Therewasnosignificantdifferenceinureanitrogenandcreatininelevelsamongthethreegroups(P>0.05).TheproportionofTh17cells,serumIL-6andIL-17inthestudygroupwere(1.56±0.35)%,(2l.45±5.11)pg/mland(9l.56±20.15)ngL,respectively,whichweresignificantlyhigherthanthatoftheHSPgroup(O.68±O.I4)%,(14.72±3.IO)pg/mland(45.1(>±14.56)ngL,whiletheproportionofregulatoryTcellswas(2.51±0.52)%,whichwasSignifiCantlylowerthanthatoftheHSPgroup(6.31±1.37)%.TheproportionofTh17cellsandscrumIL-6andIL-17levelsinHSPgroupweresignificantlyhigherthanthoseincontrolgroup(O.52±O.l1)%,(10.44±2.09)pg/mland(20.62±3.92)ngL,whiletheproportionofregulatoryTcellswassignificantlylowerthanthatincontrolgn)up(7.91±1.44)%(allP<0.05).PreasoncorrelationanalysisshowedthatserumBAFFwasnegativelycorrelatedwiththeproportionofThl7cells,urinarymicroalbumin,urinarytransferrin,urinary-microglobulin,serumIL-6andIL-17,andpositivelycoelatedwiththeproportionofregulatoryTcells.SerumMKwaspositivelycorrelatedwiththeproportionofTh17cells,urinarymicroalbumin,urinarytransferrin,urinary-microglobulin,serumIL-6andIL-17.andnegativelycorrelatedwiththeproportionofregulatoryTcells(allP<0.05).Conclusion:ThereareabnonallylowexpressionofserumBAFF.andabnormallyhighexpressionofMKinchildrenwithHSPN,bothofwhicharecloselyrelatedtokidneyinjuryandTh!7andregulatoryTcellbalanceinchildren,whicharedeservedclinicalattention.KeywordsPurpuranephritis;Blymphocyteactivatingfactor;Intennediatefactor;Kidneyinjury;Th17cells;RegulatoryTcells紫瘢性肾炎(HSPN)属于过敏性紫蝴(HSP)患者较为严重的种并发症，亦是临床发病率较高的一种维发性肾脏疾病IL若不及时给予治疗，则可能导致患者的肾脏产生明显的损伤，进而危及身体健康。因此，早期准确诊断HSPN显得尤为审要，亦是提高临床治疗效果以及改善预后转归的关键。有研究报道表明引，B淋巴细胞活化因子(BAFF)介导多种自身免疫类病症的发生、发展过程，但关于其是否介导了HSPN的发生、发展以及免疫功能调节过程的研究并不多见。中期因子(MK)主要表达于血管内皮细胞，亦可表达于部分器官黏膜上皮细胞中，在正常生理状态下微量表达，而在病理条件下可能出现高表达，可能具有促进炎症因子糅放、刺激血管生产以及促进肿瘤进展等作用Thl7细胞是近年来免疫学研究的热点，其和调节性T细胞之间的平衡被打破是目前临床上公认的自身免疫性疾病发生的关键。鉴于此，木文通过研究HSPN患儿血清BAFF、MK水平与肾损伤及Thl7和调节性T细胞平衡的关系，旨在为临床HSPN的诊治提供新的靶点与思路，现作以下报道。I对象与方法1.1一般资料将医院从2017年1月2020年1月收治的71例HSPN患儿纳入研究，记作研究组。其中男37例，女34例；年龄411岁，平均（742±L34）岁。另取同期医院收治的HSP患儿70例作为HSP组，其中男38例，女32例；年龄412岁，平均（7.51±1.31）岁。另取同期于医院体检的健康志愿儿童70例作为对照组。其中男35例，女35例：年龄4-11岁，平均（7.47±1.35）岁。三组一般资料比较无明显差异（P>0.05）,均衡可比。纳入标准：（1）HSP患儿均符合儿童过敏性紫瘢循证诊治建议中的有关诊断标准：（2）HSPN患儿均符合紫瘢性肾炎诊治循证指南中的有关诊断标准；（3）纳入研究前尚未接受相关治疗；（4）患儿家长或其监护人知情同意。排除标准：（I）其他原发亦或是继发型肾脏类疾病；（2）合并感染性疾病，免疫功能异常者：（3）研究前1个月已实施免疫抑制剂亦或是糖皮所激素类药物治疗：（4）中途退出亦或是失访者。本研究经我院伦理委员会批准。1.2 研究方法（1）血清BAFF、MK水平检测：分别于清晨空腹状态下采集所有受试者的静脉血3ml,2330离心Iomin处理，获取血清置于冰箱中保存备用，采用醐联免疫吸附法完成检测。操作严格按照试剂盒（分别购自美国R&D公诃以及eBioscience公司说明书完成。（2）肾功能指标检测：检测仪器为7060型全自动生化分析仪，检测指标包括尿微量白蛋白、尿转铁蛋白、尿微球蛋白、尿素氮以及肌好，具体操作遵循仪器说明书进行。（3）ThI7细胞比例检测：首先采集血液样本，以肝素锂进行抗凝，同时予以RPMIl64（）稀糅，加入20l的离子得索、25l的PMA,4l的佛波酯“置于379条件下进行时长为240360min的孵育。随后将其均匀分作两管，一管加入CD3PcrCP,另一管加入CD8-FITC,室温条件下予以15min的孵育，加入100l的固定液，室温下避光静置15min0随后分别于两管中加入IgGl-PE以及IL-17PE,室温条件下静置15min.采用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤、重悬后以流式细胞仪完成检测。（4）调节性T细胞比例检测：通过FiCoII分离液采集外周血PBMCs,调节细胞数至lxl6ml,加入IOl的CD4-FTC以及CD25-APC抗体，放置在4C条件下进行时长为20min的孵育，采用PBS洗涤，并加入400l的固定/穿膜液，放置在室温条件下静置40min.再经PBS洗涤，加入800l的缓冲液，放置在室温条件下静置20min.重悬处理后均匀分作两管，一管加入FOXo3-PE抗体，另一管加入对照抗体，放置在室温条件下孵育30min,经PBS洗涤及重悬之后通过流式细胞仪完成测定。1.3 观察指标比较三组患儿血清BAFF、MK水平，肾损伤相关指标水平，Thl7和调节性T细胞比例以及Thl7细胞相关因子水平等方面的差异，分析血清BAFF、MK水平与肾损伤及Th17和调节性T细胞平衡的相关性。其中Th17细胞相关因子主要包括白细胞介素-6(IL-6)以及IL-17,检测方式为酶联免疫吸附法，一应操作遵循试剂盒(购白深圳晶美生物科技有限公司)说明书完成。1.4 统计学处理数据处理软件为SPSS22.0,计量资料以&土$)表示，采用t检验。计数资料以率()表示，采用£检验。多组间计量资料采用方差分析，血清BAFF、MK水平与肾损伤及Thl7和调节性T细胞平衡的关系通过Preason相关性分析。P<0.05表示差异有统计学意义。2结果2.1 三组血清BAFF、MK水平比较研究组血清BAFF水平低于HSP组及对照组，而血清MK水平高于HSP组及对照组，其中HSP组血清MK水平高于对照组(均P<0.05).HSP组血清BAFF水平与对照组比较无明显差异(P>0.05)o见表1。表I三组血清BAFF,MK水平比较!s)组别例数BAFF(gL)MK(pg/ml)研究组710.65±0.20Bh314.22±80.14nbHSP组701.27±0.44176.12±48.9la对照组701.28+0.45101.32±40.36F值-16.20320.585尸值-0.0000.000注：与对照组比较apvo.05,与HSP组比较bpvoQ52.2 三组肾功能指标水平比较研究组尿微量白蛋白、尿转铁蛋白以及尿微球蛋白水平均高于HSP组及对照组(均P<0.05).HSP组尿微型白蛋白、尿转铁蛋白以及尿微球蛋白水平与对照组比较无明显差异(均P>0.05).三组间尿素氮及肌酊水平相比，差异无统计学意义(P>0.05),见表2o表2三组肾功能指标水平比较(1±s)尿微量白蛋尿转铁蛋白尿微球蛋尿素毓肌好组别例数白(mg/dl)(mg/dl)白(mgL)(molL)(mmolL)研究组711737±3.25ab1.27±034ab0.45±0.083.71±0.6830.42±733HSP组70O.78±O.210.18±0.05O.22±O.O33.72±0.6929.45±7.05对照组7()0.72±().25().17±().02().21±0.043.66±().5228.47±7.11F值-22.19522.45121.3441.3051.592P值O.(XK)0.(X)0O.(XX)0.7340.721注：与对照组比较apvo.05,与HSP组比较bpvo.052.3 两组Thl7和调节性T细胞比例以及血清IL-6、ILJ7水平比较研究组Thl7细胞比例以及血清IL-6、IL-17水平明显高于HSP组，而调节性T细胞比例明显低于HSP组，且HSP组Thl7细胞比例以及血清IL-6、IL-I7水平明显高于对照组，而调节性T细胞比例明显低于对照组(均PV0.05)。见表3。表3两组ThI7和翻节性T细胞比例以及血清IL6、ILI7水平比较(H±s)组别例数ThI7细胞比例(%)调节性T细胞比例(%)IL-6(pgml)IL-17(ngL)研究组711.56±O.35ab2.51±0.52ab21.45±5.11ab9L56±20.15abHSP组7()0.68±0.14a63l±1.37aI4.72±3.10a45.I0±l4.56a对照组700.52±0.1l7.91±1.4410.44±2.0920.62±3.92F值-25.23317.19512.29014.106。值-0.0000.0000.0000.000注：与对照组比较apv()5,与HSP组比较bpv()()52.4 血清BAFF、MK水平与肾损伤及Thl7和调节性T细胞平衡的相关性分析经PgaSon相关性分析可得：血清BAFF与Th17细胞比例、尿微量白蛋白、尿转铁蛋白、尿微球蛋白以及血清IL-6、IL-17均呈负相关，与调节性T细胞比例呈正相关；血清MK与Thl7细胞比例、尿微量白蛋白、尿转铁蛋白、尿微球蛋白以及血清IL6ILJ7均呈正相关，与调节性T细胞比例呈负相关(均PV0.05)。见表4。表4血清BAFF、MK水平与肾损伤及Thl7和调节性T细胞平衡的相关性分析相关指标BAFFMK!值P值r值P值ThI7细胞比例-0.5620.0010.6230.000调节性T细胞比例0.5790.000-0.5320.005尿微量白蛋白-0.5960.0000.5770.000尿转铁蛋白-0.6110.0000.5800.000尿微球蛋白-0.6090.0000.6440.000IL-60593().()(X)0.582().(XX)IL-17-0.6940.0000.6140.0003讨论HSP主要是表现为小血管病变的一组全身型小血管炎，迄今为止，关于其发病机制尚未完全阐明叽相关研究报道指出，HSP作为变态反应性疾病之，全身发生持续的微炎症状况是导致症状反更及肾脏受损的一个重要原因，患儿的长期预后受肾脏受累的直接影响'km,>0HSPN作为HSP的种严重并发症，其具体发病机制尚且存在定的争议，目前普遍认为可能和体液免疫以及细胞免疫功能紊乱等密切相关“叫IBAFF是B淋巴细胞赖以成活批注D1）：建议分段以及成熟的一个关键性因子，其通常由懒系细胞进行表达，其在机体白身的免疫类疾病中的有关作用已广受关注，已有研究报道发现多种肾脏疾病患者的血清BAFF水平均存在显著改变，可能参与疾病的形成及发展进程【小阿。MK介导多类疾病的形成，且可通过促进ThI细胞分化以及Treg细胞分化等途径发挥促炎作用，因此在急慢性肾脏疾病中的表达明显升高，值得临床重点关注U叫此外，相关研究报道证实【，HSP患儿存在不同程度的Thl7和调节性T细胞失衡，即Thl7细胞水平升高，调节性T细胞水平下降，且两者比例失衡程度和疾病以及肾脏损害程度高度相关。本研究发现，HSPN患儿血清BAFF存在异常低表达，而MK存在异常高表达。考虑原因可能是BAFF主要功能在于调节B淋巴细胞的大小以及功能，刺激B淋巴细胞存活、增殖抗原呈递等，间接参与了机体免疫反应。其中HSPN患者体内的BAFF受体存在明显的表达增加，在和其受体特异性结合后，会引起血循环中的游离BAFF水平下降。MK既具有促血管形成以及加速内皮细胞增殖的重要作用，同时可发挥定的刺激ILJ7以及IFN-Y合成、分泌的作用，继而起到促炎的目的，因此其水平的升高往往预示机体炎症反应的加剧，所以在HSPN患儿血清中存在明显高表达HL尿微量门蛋白、尿转铁蛋白以及尿B微球蛋/f批注ID,建议分段白等指标能够有效地反映出人体肾功能的有关状态，已被广泛地应用于临床监测过程中I网。本研究显示，研究组尿微量白蛋白、尿转铁蛋白以及尿P微球蛋白水平均高于HSP组及对照组，而HSP组与对照组上述指标比较无明显差异。这提示了研究组患儿的肾功能存在较为明显地损害。原因主要考虑与HSPN患儿的肾炎病情处于较为强烈的进展状态等因素有关，而这将从肾功能相关监测指标中得到明显地反馈，因此上述三项指标的含殳水平明显升高。此外，HSPN患儿存在明显Thl7和调节性T细胞失衡。过度活化的Thl7细胞可通过/)批注/讣建议分段大殳合成、分泌IL-17以及IL-6等多种促炎细胞因子，诱导巨噬细胞、上皮细胞以及内皮细胞形成多类细胞因子以及趋化因子，从而致使炎症反应被放大，引起血管的炎症性损伤，介导了HSPN的发生、发展过程。调节性T细胞存在明显的免疫抑制效果，其可经由多个差异性的环节有效抑制各类效应T细胞的自主活化、增殖以及效应，继而维持白身免疫耐受，但其水平降低时可能致使B细胞数量和活力的提升，进一步促进免疫球蛋白的分泌增加，从而诱导大量的免疫复合物在肾小球的有关毛细血管壁亦或是基底膜中发生沉积，最终引起肾脏免疫损伤。进一步研究表明，血清BAFF、MK水平与肾损伤及Thl7和调节性T细胞平衡存在密切相关。究其原因可能是随着血清BAFF水平的降低以及MK水平的升高，使患儿病情不断加重，肾脏损伤程度无疑随之增加，最终引起各项肾功能指标水平发生对应改变。同时，BAFF.MK可能经由抑制机体内调节性T细胞的有关途径，提升了ThI7和调节型T细胞二者失衡的风险，间接介导HSPN的发生。综上所述，HSPN患儿血清BAFF过低表达，而MK过高表达，两者可能是通过调控Thl7和调节性T细胞平衡状态间接参与HSPN的发生。参考又献："批注D4：建议参考近10年内的文献II潘笑悦，杨达胜，赵德安，等.儿童紫版性肾炎流行病学、发病机制及相关生物学指标研究进展J新乡医学院学报,2015,32(4):364-366.王丽芹,王吉波，梁宏达.等.系统性红斑狼疮患者血清B淋巴细胞活化因子的检测及意义J.山东医药,2011,51(31):13/5.3张红.异常糖基化IgAl在儿童过敏性紫瘢发病机制中的作用及其与IL-4,IL-6,BAFF相关性研究D.西南医科大学,2018.(4周鹏，杨永昌,吴玉斌，等.血清中期因子在儿童过敏性紫瘤及紫搬性肾炎的变化及意义J.中国小儿急救医学,2019,26(11):820-824.5许志有，符艺影，韩萍，等.调节性T细胞平衡相关因子在儿函紫瘢性肾炎中的表达及其与血清中期因子的相关性J免疫学杂志,2018,34(12):1071-1076.16中华医学会儿科学分会免疫学组,中华儿科杂志编辑委员会.儿童过敏性紫瘢循证诊治建议JL中华儿科杂志,2013,51(7):502-507.(7中华医学会儿科学分会肾脏病学组.儿童常见肾脏疾病诊治循证指南(二)：紫娥性肾炎的诊治循证指南(试行)Ub中华儿科杂志,2009,47(12):911-913.|8|王庆谊，孟昭影.过敏性紫藏发病机制的研究进展J.中国中西医结合皮肤性病学杂志,2020,19(3):285-287.191马传贞，王智侠，侯树平，等.过敏性紫瘢病因及发病机制研究近况J.医学研究杂志,2008,37(1):100-102.10夏沫，王吉，张思瑾.过敏性紫瘢患儿肾脏损害的相关因素的分析J中国实验诊断学,2011,15(12):2117-2118.II秦艳妮，党清华，景芳丽，等.过敏性紫版肾炎患儿血清IL-16、138、IGF-I及IGFBP-3水平变化及临床意义J海南医学,2020,31(1):31-34.12高雅.儿童紫敏性肾炎的免疫机制研究进展J贵州医药,2019,43(6):866-868.13朱万红，吴玉斌.紫性肾炎患儿血清B淋巴细胞活化因子和增殖诱导配体变化的意义UL中华实用儿科临床杂志,2019,34(21):1627-1630.1141王尚.项丽,许国双.B淋巴细胞在狼疮性肾炎中的作用研究进展J中华肾病研究电子杂志,2020,9(4):181-185.15邓堂，黄琪锋，李丽华.等.中期因子在相关疾病发病机制和治疗中的研究进展IJL现代生物医学进展,2020,20(3):596-600.I16王强，史洋溢，普玫，等.Thl7细胞/Trcg细胞失衡在儿童过敏性紫掇发病机制中的作用(J.中国实验血液学杂志,2015,23(5):1391-1396.17SuZ,LvX.LiuY.etal.CirculatingmidkineinchildrenwithHenoch-Schdnleinpurpura:ClinicalimplicationsJ.IntImmunopharmacol,2016,39:246-250.18张志红.尿特定蛋白五项测定在过敏性紫掇患儿早期肾损伤的临床应用价值J中国药物与临床,2019.19(12):2079-2080.