胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中锌指蛋白13血管内皮生长因子的表达及临床意义修改见批注！.docx

批注A1J:修改见批注I胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中锌指蛋白139、血管内皮生长因子的表达及临床意义薛孝斌，刘刚2,任冬莉3西安市长安区医院普通外科工肿痛科工麻醉科3,陕西西安710100【通讯作者】刘刚，邮箱:【基金项目】陕西省卫生事金项目(2018D126)摘要：目的：研究锌指蛋白139(ZNFl39)、血管内皮生长因子(VEGF)在胃瘟原发灶和区域淋巴结转移灶中的表达差异及其临床意义方法，选择2019年2月至2020年8月在西安市长安区医院就诊的78例胃癌患者,共分离出78份癌组织和42份转移淋巴结组织，记录患者临床病理学特征。通过免疫组化法检测患者原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNFl39、VEGF表达率，采用X原发灶中ZNFI39、VEGF表达与临床病理学特征的关系.结果S胃W；区域淋巴结转移让ZNFI39和VEGF表达率分别为78.57%、73.81%,明显高于其原发灶表达率隹L53.85%、50.00%,差异均有统计学意义(PVO.05)；胃癌患者原发灶中ZNFl39、VEGF表达率在不同肿瘤分化度、不同TNM分期、有无淋巴结转移患者间比次差异均有统计学意义(P<0.05):经Spearman相关性分析结果显示，胃癌患或原发灶中ZNFI39、VEGF表达阳性率与肿瘤低分化、TNM高分期、淋巴结转移发生呈正相关(P<0.05)结论：ZNFl39、VEGF在区域淋巴结转移灶表达水平较原发灶高，二者表达好精况与胃癌病情进展密切相关。关键词：胃癌；原发灶；区域淋巴结转移灶；锌指蛋白139：血管内皮生长因子；临床意义EXDrCSSiOllandClilIiCalSienifiCallCCOfZinCfinderprotein139andVaSCUlarendothelialgrowthfactorinDrimarVastricCallCerandregionallmphII。CkXiaobin.LiuGang.RenDongliChang,anDistrictHospitalofXi,anCityIGeneralSurgery:2.OncologyDepartment;3.AnesthesiologyDepartment,Xi'an710100,ShanxiCorrespondingauthorLiuGang.E-mailx：Obicciivc:T(>UlUdVthCc'D【c、i“ndifference3、zincfingerprotein139(ZNFI39)andVascularentiothelialrowthfactor(VEGF)inprimaryRaStriCCanCerandregionallymphnodemetastasisanditsCIiniCalsignificance.Methods:FrOrnFebrUarV2019IoAUgUSl2020.78PaliCnlSWilhgaslricCUnCCrWCrCSCICCICdfromChang'anDiStriClHKSPilalOfXi'an.AIOIalOf78CanCerIiSSUeSand42metasialicIYmDhnode【i&suesWereisolated,and【heCliniCoPathologiCalfealurcsOfIhCPaliCnlSWCrCrecorded.ImmUnohiSIOChCmiSIrYWaSUSCdIodeteciIheexpressionralesOfZNFI39andVEGFinDalienis'DrimarYfocusandregionalIVmDhnodemetastasis,andehi-quaretetIhCrdalionshipbetweenIhCexpressionOfZNFl39andVEGFinprimaryfccuUndCliniccrMihNcizicaIfe;MUrc、WaSanalyzedlhrouahSDeSrmanCOlTelationanalysi',Results:theexpressionratesofZN-139an<lI(iiregionalI；nphiuhIcmetastasisofgastricCanCerWere78.57%and73.81%,restectivelv,WhiChWereSianifkanHVhigherIhanIhOSeinPrimaryRkus(53.85%and5().(X)%.respectively).WilhSignifiCanldifference(P<0.()5).ThKexpressionratesOfZNF139andVEGFinIheDrimarVfocusOfgaslricCanCerDatienISWereSignifiCanHVdifferentamongDatientSWithdifferenttumordifferentiation,differentTNMStageSandIymPhnodemelasasis(<0.05).TheresuksOfSDearmanCorre山IiOnanalysisShoWedIhal【hePOSiIiVCraleOfZNF139andVEGFCXDrCSSioninDrimarYfocusOfHaSlriCCaIICerPaIiCntSWaSPoSiIiVelyCorrelaledWilhIoWdiffereniaionOfIUnK)r.highTNMSUIgeandIymPhnodemcaslasis(P<0.05).ConCIUSion:theeDressionIeVelOfZNFl39andVEGFinregionalIymPhnoden】e【asiasi$ishigher【hanIhalinPrilnaryIymPhnodemeaslasis.WhiChisCIOSelyrelaledoIheProgreSSiOnOfqastriccancer.Keywords:gastriccancer;primaryfocus;regionallymphnodemetastasis;zincfingerprotein139;vascularendothelialgrowthfactor;CliniCalrignificance1资料与方法1.1一般资料怅"2019年2月至2020年8间八医院治疗且符合以下纳入和排除标准的78例胃癌手术患者，所行患者均经术后病理学检杳为腺癌，其中42例伴区城淋巴结转移患者均取得相应转移淋巴结组织。78例患者中男性44例，女性34例：年龄3875岁，平均(5725±9.26)岁；肿瘤分化程度：低分化30例、高分化48例；据美国癌症联合会(AmcricanJoinlCommiUcconCancr,AJcC)对胃癌的TNM分期标准分为I-III期，其中1期16例，H期23例，Hl期39例：肿描直径3Cm者45例、直径>5cm者33例；伴淋巴结转移者42例。L28曜纳入标准：患者为初次发病，1消确诊为胃腺痛：均行手术治疗H愿意配合术中病理组织留样：术前无抗肿瘤治疗既往史:研究与患者知悉同意，,排除标准：病情危肃者：伴其它部位恶性肿掩者：伴先天性疾病及心、肺、肝、肾等严重器质性障碍者：伴严重免疫系统疾病者，1.3方法1.3.1 _ZNF139、VEGF检测将分离组织的石蜡切片切为厚4.0m片的薄片，脱蜡后通过免疫组织化学染色法招标本染色。首先用0.50%高锌酸钾浸泡水洗520分钟，再用1.0%草酸浸泡25分钟实现脱色（通过癌组织大小和镜下观察脱色度具体判定），脱色后对抗原热修复25分钟，招薄片至于30%H2?室温下孵育12分钟，柠檬酸钠伴高温促进抗原的修复，随后冷却IO分钟并清洗，使用小牛血封闭液封闭胃癌组织和转移淋巴结组织20分钟后清洗3次，每次两分钟。随后用兔抗人ZNF139单克隆抗体（美国Sigma公司提供）、鼠抗人VEGF单克隆抗体（上海长岛抗体诊断试剂有限公司）：均按说明书配比稀释，稀释后在4C环境下孵化一夜。清洗后37C环境下孵化二抗半小时。再用链霉亲和素-生物素复合物免疫组化剂孵育半小时，复温50分钟后用链赛亲和素-生物素复合物免疫组化剂孵育0.50小时，二氨基联苯胺显色10分钟，苏木素再染色5分钟后清洗、脱水、固定封片即可镜下观察。1.3.2 染色观察结果判定标准细胞质或细胞核在镜下可见棕揭色颗粒物为ZNF139和VEGF表达阳性表现，其中YEGF主要集中在细胞质，打阳性细胞占比和染色强度用，J分级计分，及后综合判定表达是否是阳性。ZNF139和VEGF染色强度评价标准：无色、淡黄、棕黄、棕褐依次对应。分、1分、2分、3分.ZNF139表达阳性显色细胞所占比例计分标准：WI居、15%V占比W55%、55%占比W75%、75%依次记为1分、2分、3分、4分。VEGF表达阳性显色细胞所占比例计分标准：10%、10占比W25%、26%5050依次记为O分、1分、2分、3分。ZWI39阳性判定标准：阳性细胞占比和染色强度评分相加为1分计为阴性，1分计为阳性。VEGF阳性判定标准：阳性细胞占比和染色强度评分和乘，。为阴性，21为阳性。1.54统计学方法应用SPSSl8.O统计学软件进行数据分析,计量资料以均数土标准差（2±s/4W巳更改表示，计数塔料比较采用X检验；两变量不满足直线相关性分析条件空用Spesrman相关性分析，以P005为差异有统计学意义。2结果2.1日癌原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNFl39和VEGF表达率比较胃癌区域淋巴结转移灶ZNFI39和VEGF表达率明显高于其在原发灶表达率，差异均有统计学意义（V。05）,见表1,其中ZNFl39、VEGF免疫组化染色结果见图1和图2。表I胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNFI39和VEGF表达率比较I例（）J组别例数ZNF139VEGF阳性阴性阳性阴性原发灯7842(53.85)36(46.15)39(5().(X)39(50.00)区域淋巴结转移灶4233(78.57)9(21.43)31(73.81)11(26.19)图IZNF139免疫组化染色（“PO图2VEGF免疫组化染色（x400）2.2胃癌癌组织ZNF139表达率与临床病理特征的关系一胃癌癌组织ZNFi39表达率与肿瘤分化度、TNM分期、淋巴结转移有关（P<0.05）,与性别、年龄、肿痛大小无关（P>0.05）,见表2。表2胃癌腑组织ZNF139表达率与临床病理特征的关系比较例（）】工ZNFi39/变量例数P阴性（n=36）阳性（n=42）性别男442d（%）24（%）0.0200.888批注依2）:全部补充I3416（%）18(%)年龄50岁3115160.1030.748>50岁472126分化程度高分化3021911.1540.001低分化481533TNM分期I、Il期39261313.206().001III期39IO29肿瘤大小<5cm4523221.0520.305>5cm331320淋巴结转移是42123011.3200.001否3624122.3胃癌癌组织VEGF表达率与临床病理特征的关系胃癌癌组织VEGF表达率与肿瘤分化度、TNM分期、淋巴结转移有关（P<0.05）,与性别、年龄、肿瘤大小无关（P>0.05）,见表3。表3胃癌癌组织VEGF表达率与临床病理特征的关系【例（）】比较-g变量例数VEGF/P阴性(n=39)阳性(n=39)性别男4419(%)J25/%L1.8770.171批注A3）:全部补充1年龄女050岁>50岁34314720(%)15(%)2414(%)16230.054().817分化程度高分化3()2197.800().005低分化481830TNM分期I、H期39271211.5380.001IlI期391227肿瘤大小5cm3115160.0540.817>5cm472423淋巴结转移是42301216.7140.0010否369272.4胃癌癌组织ZNF139与VEGF的表达与临床病理特征的相关性一胃癌症组织ZNFI39与VEGF的表达水平与肿瘤低分化、TNM高分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05),见表4。表4目癌癌组织ZNF139与VEGF的表达与临床病理特征的相关性组别例数ZNF139VEGFrPrP低分化780.3230.0000.3190.000TNMIII期780.3340.0000.3280.000淋巴结转移780.3460.0000.3350.0003讨论M统计，国编发病率和死亡率在恶性肿瘤中排名中均靠前,任命健康和在胃癌发生和进展中，肿瘤细胞凋亡抵抗和莉亡调控逃逸.促进.肿痛细胞发生恶性增殖、转移.进而肿痛细胞迅速蔓延肿痛局部丰富新生血,.肿瘤细胞增殖脱落和转移：:仃口进f，J,影响化疗效果.故促进肿瘤细胞凋亡、抑制血管生成对抑制胃癌淋巴结转移、改善患者预后意义重大I川。既往研究中指出ZNFI39参与肿瘤细胞凋亡调控和增殖信号通路调控、VEGF抑制剂一直作为恶性肿瘤患者抗血管生成化疗方案的主要用药“5/*二者与胃癌发生关系密切，但有关二者在胃癌原发灶及淋巴结转移灶间表达情况差异研究较少，故研究二者表达情况与淋巴结转移发生关系对胃癌淋巴结转移发生患者治疗药物研发有一定启发。本研究结果显示，胃癌患者原发灶中ZNFl39、VEGF表达阳性率低于区域淋巴结转移灶。YaOJU刀在研究中指出ZNFl39与其对应环状RNA可参与激活PBK/AKT信号通路，AKT属于原癌基因，经过磷酸化激活后可促进肿瘤细胞增殖转移和分化：李勇47在研究中指出ZNFi39可通过促进凋亡抑制蛋白表达来调控肿瘤细胞凋亡通路、抑制肿瘤细胞凋亡，故淋巴结转移多属于胃癌进展期，其病变程度较原发灶垂，肿瘤细胞增殖分化程度和凋亡逃避能力较高，故ZNF139表达程度高。VEGF促进血管内皮细胞分裂、增殖进而产生丰富新生血管满足肿瘤细胞营养物质需求、促进肿瘤细胞发生淋巴转移、增加肿瘤细胞侵袭力故淋巴结转移灶多出现于胃癌中晚期，局部血管较原发姓丰富，VEGF表达率较高，与修丽娟I研究结果相似。本研究结果显示L胃癌患者原发灶中ZNFI39、VEGF表达阳性率与肿瘤分化程度、TNM分期、区域淋巴结转移呈正相关，与李勇和王文廉LI结果相似，川一原因是ZNF139高表达通过调控细胞凋亡基因SUrVivin、BcL2来抑制肿瘤细胞凋亡：通过激活原癌基因AKT促进肿癌细胞增殖转移，细胞形态与正常细胞差异大，故ZNFI39表达率与胃癌肿瘤低分化、TNM高分期、淋巴结转移外里呈正相关。VEGF可与相应受体结合激活下游信号通路、靶向作用于血管内皮细胞、破坏血管结构稳定性来促进血管新生进而促进肿瘤细胞增殖分化I此外，VEGF种类较多，其中VEGFC过表达可促进淋巴管生成进而诱发肿瘤细胞通过淋巴管发生淋巴结转移，与肿瘤进展关系密切，故VEGF表达率与胃癌肿瘤低分化、TNM高分期、淋巴结转移发生呈正相关。综上所述，同癌发生区域淋巴结转移后ZNFl39、VEGF表达能力增强，二者表达情况与胃癌病情进展密切相关。叁考文献II李道娟,梁迪.靳晶,等.上消化道恶性肿癌流行病学趋势几肿瘤预防与治疗.2018,31:62-68,H12J关晓辉.一胃癌的诊治进展J.匕华大学学报(自然科学版),_2019,_20(5匕670674.国国_高先锋,一武健.一胃癌腹腔镜手术治疗研究进展以_现代医药卫生,_2019,_35-(20):3188-3190.I4WUJM.YANGHT.HOTWWuJinM.Yang.elal.AssociationbetweenInterleukin-6LevelsandPcrioperativeFatigueinGastricAdCnOCareinomaPatientsIJl.JClinMcdKM.2()19,8(4):.543.4I5IABBEHAUSENC.ZinCfingerdomainsastherapeutictargetsformetal-basedcompounds-anUpdateJJJ.Metallomics,.20i9,_11(1):_15-28.j>SHIND,LEEJ,PARKJH,etal.DoublePlantHomeodomainFingers2(DPF2)PromotestheImmuneEscapeOfInfluenzaVirusbySuppressingBetaInterferonProductionJJJ.JVirol.2017-.91(12):.16.鲍效周掘患者化疗前后血清VEGFCA199水平的变化及临床价面Jl.实用癌症杂志.2018.93(4)：2628【81李国胜,王红岩.赵晓丹.等.IGF/、TWiSt2、VEGF在胃麻组织中的表达及临床意义IJI.解放军医药杂志.2019,31(1):9-11.191EDGESB.COMPTONCC.TheAmeriCanJoinlCommineeOnCancerKhe7【hedilionOf【heAJCCCanCerSlagingmanualandthefuiureOfTNMJJLAnnSUrgOncol、2O1O.6):1471-I474.IIOl.国家卫生健康委员会胃癌诊疗规范(2018年版)IJ1中华消化病与影像杂志,2019,9(3):118-144,Im黄莎，戴增，高姐姐,等.胃痛分子流行病学研窕进展山.中国肿瘤临床，2019,46:22-27,H21et-等温PL膜中的衣达及临床,比义山.河北医药,2018.40(11):434，,131原伟伟，黄晋熙，王程虎.胃鹿组织中MiR8d5p表达水平及与血管生成的关系山.热带医学杂志.201919(11):8083.14管福军.方志华.任立群.等.抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和.39：329-334.1W吴宝萍,_刘亚静._王小兰.一锌指蛋白139及基质金属蛋白酷7在子密内膜腺癌中的表达及意义J一中国综合临床,_2017,_33(3):-254258.3_任建林.一祝明洁,陈峰,一等.一胸背磷酸化醇和血管内皮生长因子在大肠癌原发灶和淋巴结转移灶中的表达及意义J中国组织化学与细胞化学杂志,_2019,_28(1):_44-49.4H171YAoJ,OlANK,CHENC,elaLZNF139/CirCZNF139DronlOIeSCeHDroliferaiion,migralionandinvasionViaaclivulionoPI3K，AKTPaIhWayinbladderCanCCrJI.Aging(AlbUnyNY),2020J2(10):9915-9934.1.ISL李勇王力利,一王银洁，等一胃癌原发灶和淋巴结转移灶中锌指蛋白139与肿痛细胞凋亡和生存素及B细胞淋巴瘤/白血病-2的关系及意义研究口._中国全科医学Nol5,_9(3):_250-254.1191田伟峰,郎小梅.CPEB4和VEGF-C在胃娓中的表达及其临床意义Ul.临床与病理杂志.2017,37(9):1833-1839.1201沈源.保丽玲.吴桂霞.等.淋巴管噌度、微血管潸度与VEGF在胃癌中的生.物学意义IJL馁南大学学报自然科学与灰学版D2018,39(3):223-228,1211修丽姐.刘龙.刘炕.等.胃需组织中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3蛋白表达及其临床意义J1.第二军医大学学报,2017.38(11):1458-1461.用1221匕丈廉.万、?新.屈中K.VEGF及具受体Fil、KDR发达与目癌临床病理特征的关系IJI.医学临床研究.2016.33(3):476478.WL23J熊真胃癌组织中-miRNAs-及下游靶基因表达量分析及其与临床病理分期的关系探究|J._海南医学院学报2016.1(8):_732-735.例241赵璐，杜小明.血管内皮生长因子和性别决定区-Y柩蛋白-2在胃痛中的表达及与预后的关系J1.安徽医药,2020,24(4):74&750.作者简介：薛孝斌，男，本科，单位：西安市长安区医院，普通外科，副主任医师，研究方向：普通外科，邮箱：，地址：，邮编:710100通讯作者：刘刚，男，本科，单位：西安市长安区医院，肿瘤科，副主任医帅，研究方向：乳腺、胃肠道肿痛的诊治，邮箱：