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    血清肌酐(Creatine)苦味酸法测定方法介绍.docx

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    血清肌酐(Creatine)苦味酸法测定方法介绍.docx

    血清肌酊(Creatine)苦味酸法测定1 .实验原理不去除蛋白的Jaffe碱性苦味酸连续监测比色法。肌酢与苦味酸在碱性条件下形成橙红色复合物,在固定的时间内吸光度增加速率与样品中肌酊浓度呈正比。肌酊+苦味酸.:肌肝苦味酸复合物2 .标本采集2 .1病人准备:早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。2.2类型:血清,肝素血浆,尿液。3 .标本存放:血清、血浆的稳定性:425保存可稳定7天;-20。C保存至少可稳定3个月。尿液的稳定性:2025保存可稳定2天;48保存可稳定6天;-20°C保存可稳定6个月对尿液用蒸馅水作1:49稀释后检测,结果乘50后报告。4 .标本运输:常温条件下运输5 .标本拒收的标准:细菌污染的标本不能作测定。6 .实验材料6.1上海申能肌酊检测试剂盒(14217171701试剂1:6×64ml+试剂2:6×16ml)o6.1.1试剂组成:试剂I(R1):氢氧化钠0.16molL试剂2(R2):苦味酸4.0mmolL6.1.2试剂准备:试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存:试剂保存于225,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。6.1.5注意事项:试剂1中含氢氧化钠。请按以下条例处理:R36/38:刺激眼睛和皮肤。S26:如与眼睛接触应立即用大量水冲洗并请医生诊视。S37/39:戴上手套并采取合适的眼/脸的防护。S45:如发生事故或感觉不适立即请医生诊视。试剂2中含苦味酸。吸入、接触皮肤、吞咽将会中毒。戴上手套并采取合适的眼/脸的防护。如与皮肤接触应立即用聚乙二醇400(DAB8)或大量水冲洗。如情况严重,立即请医生诊视。使用实验室试剂应采取必要的预防。6.2校准品:使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器:奥林巴斯AUlooO生化分析仪8 .操作步骤8 .1项目基本参数:参见生化检验奥林巴斯AInoOO生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤:参见生化检验奥林巴斯AU100O生化分析仪操作规程.SOP文件9 .结果的判断与分析10 .质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与11质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法:以TrUCaIU复合校准品肌酎校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠检测结果,以mmol/L报告。12 .参考值范围血清/血浆女性5397mmolL男性80115mmolL尿液女性97177mmolL男性12423OmmoI/L肌酎清除率女性95z160mlminl.73m2男性98-156ml/min/1.73m213 .临床意义:肌酊是通过肾脏经由肾小球滤过作用排泄的废物。健康人血浆中肌酊的浓度相当稳定,与每天水的摄取量、活动和生成尿量无关。因此血浆肌酢水平升高常指示排泄量的降低,即肾功能受损。肌肝清除率能较好地评估肾小球滤过率(GFR),通过它能较好地检出肾病和监视肾功能。为此,在规定的时间内同时收集血清和尿液,进行肌酎检测。肌酊经肾小球滤过后不被肾小管重吸收,通过肾小管排泄。在肾脏疾病初期,血清肌好值通常不升高,直至肾脏实质性损害,血清肌好值才增高。在正常肾血流条件下,肌醉值如升高至176353umolL,提示为中度至严重的肾损害。所以,血肌Sf测定对晚期肾脏病临床意义较大。14 .操作性能14.1线性范围:18-1330mol/L14.2精密度:精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法,AUlOOO批内不精密度小于3%,总不精密度小于5%O用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(mol/L)S(mol/L)CV(%)批间精密度n=20X(mol/L)S(mol/L)CV(%)样品171.62.63.63样品169.84.56.45样品2141.41.20.87样品2137.93.32.38样品3506.54.30.85样品3507.44.20.8314.3方法学比较:本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对68个样品进行Crea检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:y-l.01-2.65mol/L;r=1.000。14.4灵敏度:本试剂的检测限为18mol/Loo14.5病人结果可报告范围:18-1330mol/L15.超出范围结果处理:本法对肌酢的检测范围为181330olLo当样品测定值超过上限时,应将样品用9gL的氯化钠溶液作1+1稀释,重新测定,结果乘以2o16 .病危报警值的处理:当肌好测定值352mol/L时,在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。17 .方法局限性17 .1本法对肌酢的检测范围为181330molL0当样品测定值超过上限时,应将样品用9gL的氯化钠溶液作1÷1稀释,重新测定,结果乘以2°18 .2干扰物质:当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L,血红蛋白浓度5.00gL,甘油三酯浓度22.6mmolL时没有观察到干扰。胆红素浓度68.8mol/L起有干扰18 .补救措施:当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。19 .参考文献1. NewmanDJ,PriceCP.Renalfunctionandnitrogenmetabolites.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.p.1204-.2. ThomasL.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.366-74.20.其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。血清尿酸TBHBA法测定1 .实验原理使用TBHBA(2,4,6-三嗅-3-羟基苯甲酸)的酶比色测定法。尿酸酶氧化尿酸产生过氧化氢和尿囊素。在过氧化物酶存在下,过氧化氢氧化4-氨基安替比林和TBHBA(2,4,6-三溟-3-羟基苯甲酸),产生红色酉昆亚胺(Trinder反应产物)。尿酸酶尿酸+H2O+O2尿囊素+CO2+H2O2过氧化物酶TBHBA+4-氨基安替比林+2H20k醍亚胺÷3H202 .标本:2. 1病人准备:12小时禁食。2.2类型:血清,肝素或EDTA血浆,尿液。3 .标本存放:血清、血浆的稳定性:2025°C保存可稳定3天;48保存可稳定7天;-20保存可稳定6个月。对尿液用蒸储水作1+10稀释后检测,结果乘11后报告。4 .标本运输:常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准:细菌污染的标本。6 .实验材料6. 1试剂申能尿酸测定试剂盒。货号:14130071701试剂1(6×64ml)试剂2(6X16InI)6.1.1试剂组成试剂1(R1):磷酸盐缓冲液PH7.0100mmolLTBHBA(2,4,6-三澳-3-羟基苯甲酸)lmmolL试剂2(R2):磷酸盐缓冲液pH7. 0100mmolLO.3mmolL10mmolL4-氨基安替比林铁氟化钾过氧化物酶(PoD)22000U/L尿酸酶230U/L6.1.2试剂准备:试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存:试剂保存于28C,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。当546nm处的试剂空白吸光度小于0.5时,试剂可正常使用。6.1.4变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂己变质,不能继续使用。6.1.5注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95gL)为防腐剂。不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂6 .2校准品:使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .3质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。8 .仪器:奥林巴斯AUloOO生化分析仪9 .操作步骤8 .1项目基本参数:参见生化检验奥林巴斯AU100O生化分析仪项目测定参数.SOP文件9 .2仪器操作步骤:参见生化检验奥林巴斯AUlOOO生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程SOP文件。11 .计算方法:以TrUCalU复合校准品尿酸校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠检测结果,以mol/L报告。12 .参考值范围:(molL)血清/血浆女性男性成人137363214488儿童05天113-470113-47014岁101-3031314705-11岁1783811783811214岁1903631904401517岁190381268482尿液4.76mmold(正常饮食)3.57mmold(低喋吟饮食)参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义:尿酸和尿酸盐是喋吟代谢的最终产物。痛风是高尿酸血症最常见的并发症,血清尿酸水平的升高导致在关节处生成尿酸钠晶体。此外导致血液中尿酸升高的原因还有:排泄功能下降的肾脏疾病,饥饿,滥用药物,过度饮酒或某些药物的使用。高尿酸水平也是冠心病的间接危险因子之一。低尿酸血症较少见,其与罕见的遗传代谢紊乱有关。14 .操作性能14. 1线性范围:17.81190molLo14.2精密度:精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法,AUlOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(molL)S(molL)CV(%)批间精密度n=20X(molL)S(molL)CV(%)样品1163.62.51.55样品1159.42.41.52样品2318.24.00.74样品2311.15.11.63样品3600.74.60.77样品3593.66.31.0614.3方法学比较:本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对70个样品进行UA检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:y=l.02-26.2mol/L;0.997。14 .4灵敏度:本试剂的检测限为17.8molL015 .5病人结果可报告范围:17.8-1190molLo16 .超出范围结果处理:本法对尿酸的检测范围为17.8-1190mol/Lo当样品测定值超过上限时,应将样品用9gL氯化钠溶液作1+1稀释,重新测定,结果乘以2。17 .病危报警值的处理,当尿酸测定值720mol/L时,在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。18 .方法局限性17.1本法对尿酸的检测范围为17.8-1190molL0当样品测定值超过上限时,应将样品用9gL氯化钠溶液作1+1稀释,重新测定,结果乘以2o17.2干扰物质:当样品中胆红素浓度171mol/L,血红蛋白浓度1.00gL,甘油三酯浓度22.6mmolL时没有观察到干扰。抗坏血酸会干扰检测结果。如需克服抗坏血酸的干扰,推荐使用DiaSyS公司提供的尿酸液体试剂(TOOS法)。18 .补救措施:当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。19 .参考文献1. ThomasL,editor.Clinicallaboratorydiagnostics.1s,ed.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.208-14.2. NewmanDJ,PriceCP.RenalfunctionandnitrogenmetabolitesIn:BurtisCA,AshwoodER.editors.Tietztextbookofclinicalchemistry.3,ded.Philadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.p.1204-7020.其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。

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