绵羊补体片段3b受体C3bRelisa试剂盒说明书.docx

绵羊补体片段3b受体（C3bR）elisa试剂盒说明书elisa试剂盒常见组成部分：1）酶和底物:在ELISA中ZUi常用的酶为HRP和ALP.2）抗体：在EIJSA中应用的抗体可分为多克隆抗体（多抗）和单克隆抗体（单抗）。3）抗原：在ELISA中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。主要有三类，即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。4包被：将免疫活性物质（抗原或抗体）结合于固相载体上的过程称为包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等；常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素生物素间接包被法5）固相载体：固相载体是ELISA中用以分离结合标记物和游离标记物的主要手段，应与各种免疫活性物质有良好的结合性能并且不改变其免疫活性。常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。样本实验前准备：ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。（1）血清室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。（2）血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。（3）尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）.仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。（4）细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）.仔细收集上清。（5）培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反匏冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（20003000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。（6）组织标本切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4o用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持28的温度。加入一定量的PBS（PH7.4）,或组织蛋白萃取试剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化.离心20分钟左右（2000.3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50,混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50I,混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50I弃掉，再各取50分别取50分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50,混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀；混匀后从第五、第六孔中各分别取50I加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50,混匀后从第九第十孔中各取50I弃掉。（稀释后各孔加样量都为50I,浓度分别为180ngL,120ng/L,60ngL,30ng,15ngL）。2 .加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40,然后再加待测样品10I（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3 .温育：用封板膜封板后置37°C温育30分钟。4 .配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馆水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶标试剂50,空白孔除外。7 .温育：操作同3。8 .洗涤：操作同5。9 .显色：每孔先加入显色剂A50,再加入显色剂B5OU,轻轻震荡混匀，379避光显色15分钟.10 .终止：每孔加终止液50Ul,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11 .测定：以空白空调零，45Onm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡1530分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5 .底物请避光保存。6 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.7 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。8 .本试剂不同批号组分不得混用。9 .如需代测或者样本暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间避免反复冻融，-20°C以下可保存三个月70°C以下可保存六个月。10 .试剂使用须知：11. （1）请参照相关法规、文献、MSDS等信息，理解并掌握好试剂的特性，再进行安全操作。12. （2）通常购买试剂时一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，更加注意其他保管和管理。13. (3)万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。对于使用后的废弃物，不要或者旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。14. (4)购买后，请务必确认标签上的注意事项；做好预防颠倒，摔坏的措施和管理体制；在使用前再次确认标签上的注意事项，做好必要的安全对策；对没有标明其危害特性、有害特性的，也要慎重地进行操作；必须带好防护用具，小心翼翼进行操作。