鸡卵黄免疫球蛋白IgY酶联免疫分析试剂盒使用说明书.docx

鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T30ng/L-900ngL使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中卵黄免疫球蛋白（IgY）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）水平。用纯化的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入卵黄免疫球蛋白（IgY）,再与HRP标记的卵黄免疫球蛋白（IgY）抗体结合，形成抗体-抗原-酎标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP的的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的卵黄免疫球蛋白（IgY）呈正相关。用酶标仪在45Onm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlXl瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6mlXl瓶8标准品(1600ngL)0.5mlXl瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlXl瓶4样品稀释液6mlXl瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×l三11封板膜2张6显色剂B液6mlXl/瓶12密封袋1个标本要求1 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20°C保存，但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1 .标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。800ngL5号标准品I5l的原倍标准品加入1501标准品稀释液400ngL4号标准品150l的5号标准品加入150l标准品稀释液200ngL3号标准品150l的4号标准品加入150l标准品稀释液100ngZL2号标准品150l的3号标准品加入150l标准品稀释液50ngL1号标准品150l的2号标准品加入150l标准品稀释液2 .加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50I,待测样品孔中先加样品稀释液40h然后再加待测样品10l（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酷标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3 .温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用5 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。7 .温育：操作同3o8洗涤：操作同5o9 .显色：每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟.10 .终止：每孔加终止液50I,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11 .测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品1加入准备好的样品和标准品，37C反应30分钟:J:洗板5次，加入酶标试剂，37C反应30分钟洗板5次，加入显色液A、B,37C显色10分钟计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。5 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 .本试剂不同批号组分不得混用。10 .如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1 .试剂盒保存：2-8。2 .有效期：6个月