血清载脂蛋白A1 血清载脂蛋白B免疫透射比浊法测定法.docx
血清载脂蛋白A1免疫透射比浊法测定法1 .实验原理免疫透射比浊终点测定法。使用抗ApoAl抗体和样品中的ApoAl进行抗原-抗体反应。反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映ApoAI浓度。2 .标本：2. 1病人准备：12小时禁食。2.2类型：血清、肝素或EDTA血浆。3 .标本存放：稳定性：1525C保存可稳定5天；28C保存可稳定2周；-20。C保存可稳定3个月；标本不可反复冻融。4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：标本细菌污染的标本。6 .实验材料6.1试剂申能APOAI测定试剂盒（货号：25171002101试剂15×25ml;试剂2lX25ml）6.1.1试剂组成试剂1（R1）：pH7. 5 100mmolLTris缓冲液聚乙二醇（PEG）表面活性剂，稳定剂适量试剂2（R2）：pH7. 5100mmolL适量Tris缓冲液羊抗人APoAl抗体（含稳定齐IJ）6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存试剂保存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6. 1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95gL）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂6.2校准品：建议使用DiaSys公司提供的TruCalApoAl校准品对自动分析仪进行校准，校准稳定期：4周。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6 .3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AU100O生化分析仪8 .操作步骤8 .1项目基本参数：参见AUlOOo生化分析仪项目测定参数.SOP文件9 .2仪器操作步骤：参见AUlOOO生化分析仪操作规程.SOP文件10 检验结果的判断与分析11 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。12 .计算方法：按照公司配套校准品使用要求，用3个不同水平的校准液，并以9gL氯化钠溶液为空白，经校准测定，仪器自动对校准品响应量通过合适的数学模型如LOgit/Log,拟合成校准曲线。校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。13 .参考值范围tsl女性：1.201.90gL男性：1.10-1.70gL参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。14 .临床意义载脂蛋白Al（APoAD是高密度脂蛋白（HDL）的主要结构蛋白，它可以去除细胞中的胆固醇，因此具有预防动脉粥样硬化的作用。流行病学研究表明以ApoAl表示的HDL水平与冠心病（CHD）的流行率呈负相关。在使用总胆固醇和甘油三酯来过筛冠心病危险时，除检测脂蛋白（a）与载脂蛋白B之外，同时检测载脂蛋白Al能对脂类失调提供更多的信息，也可替代高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）检测。一些研究表明，当ApoB浓度上升（女性ApoB>l.50gL,男性ApoB>1.55gL）,而ApoAl浓度下降（女性ApoAl<l.20gL,男性ApoAKI.10gL）,对于预测CHD危险非常有用。15 .操作性能14.1线性范围：0.01-2.5gL14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AUlOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3%o用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(gL)S(gL)CV(%)批间精密度n=20（每天校准）X(gL)S(gL)CV(%).样品10.3630.00661.81样品10.4390.00701.60样品20.8640.00141.66样品20.8850.02082.35样品31.520.00563.65样品31.460.02801.92批间精密度n=20（一次校准）X(gL)S(gL)CV(%)样品10.4420.00811.84样品20.9170.02292.50样品31.500.03152.1014.3方法学比较：2K公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对53个样品进行APOAl检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=l.15-0.077gL;r=0.994«14.4灵敏度：本试剂的检测限为0002gL°14.5病人结果可报告范围：0.012.50gL.15.超出范围结果处理：本法的检测范围为0.012.50gL.当样品测定值超过上限时，应将样品用9gL氯化钠溶液作1+1稀释后，重新测定，结果乘以2。16.病危报警值的处理：无。17.方法局限性17.1本法的检测范围为O.Ol2.50gL0当样品测定值超过上限时，应将样品用9gL氯化钠溶液作1+1稀释后，重新测定，结果乘以2。17.2干扰物质：DiaSyS公司的APoAl试剂中抗体特异地只与人APOAl发生免疫反应。当样品中抗坏血酸浓度1704molL,胆红素浓度598InOl/L,血红蛋白浓度5.00gL,甘油三酯浓度22.6mmolL时没有观察到干扰。试剂与ApoA2和APoB没有交叉反应。17.3前带限制：血清APOAl值5.00gL时，没有观察到前带效应。18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献1. BhatnagarD,DurringtonPN.MeasurementandclinicalsignificanceofapolipoproteinsA-IandB.In:RifaiN,WarnickGR,DominiczakMH,eds.Handbookof1ipoproteintesting.Washington:AACCPress,1997:p.17798.2. RifaiN,BachorikPS,AlbersJJ.Lipids,lipoproteinsandapolipoproteins.In:BurtisCA,AshwoodER,editors.TietzTextbookofClinicalChemistry,3rded.PhiIadelphia:W.BSaundersCompany;1999.p.809-61.3. JungnerI,MarcovinaSM,WalldiusG,Ho1meI,KolarW,SteinerE.ApolipoproteinBandA-Ivaluesin147576Swedishmalesandfemales,standardizedaccordingtotheWorldHealthOrganization-1nternationalFederationofClinicalChemistryFirstInternationalReferenceMaterials.ClinChem1998;44:1641-9.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。血清载脂蛋白B免疫透射比浊法测定法1 .实验原理免疫透射比浊终点测定法。使用抗APoB抗体和样品中的ApoB进行抗原一抗体反应。反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映ApoB浓度。2 .标本：2 .1病人准备：12小时禁食。2.2类型：血清、肝素或EDTA血浆。3 .标本存放：稳定性：1525°C保存可稳定5天；28C保存可稳定2周；-20。C保存可稳定3个月；标本不可反复冻融。4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：细菌污染的标本。6 .实验材料6. 1试剂申能APOB测定试剂盒(货号：25171102101试齐IJ15×25ml;试剂2IX25ml)6.1.1试剂组成试剂1(R1)：PH 7. 5适量PH 7. 5适量Tris缓冲液100mmolL聚乙二醇(PEG)表面活性剂，稳定剂试剂2(R2)：Tris缓冲液100mmolL羊抗人APOB抗体(含稳定剂)6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂保存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6. 1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。7. 1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95gL）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂8. 2校准品：建议使用DiaSys公司提供的TruCalpoB校准品对自动分析仪进行校准，校准稳定期：4周。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。9. 3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。10. 器：奥林巴斯AlnoOO生化分析仪11. 作步骤8 .1项目基本参数：参见AUlOOO生化分析仪项目测定参数.SOP文件9 .2仪器操作步骤：参见AUIOoO生化分析仪操作规程.SOP文件10 检验结果的判断与分析11 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与11质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。12 .计算方法：按照公司配套校准品使用要求，用3个不同水平的校准液，并以9gL氯化钠溶液为空白，经校准测定，仪器自动对校准品响应量通过合适的数学模型如Logit/Log,拟合成校准曲线。校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。12参考值范围女性：0.75L50gL男性：0.801.55gL参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义J载脂蛋白B（APoB）是低密度脂蛋白（LDL）的主要结构蛋白，它输送胆固醵至细胞中，因此与动脉粥样硬化斑块形成有关。因为APOB浓度水平与动脉粥样硬化程度密切相关，因此APOB浓度水平的上升和冠心病（CHD）紧密有关。在使用总胆固醇和甘油三酯来过筛冠心病危险时，除检测脂蛋白（a）与载脂蛋白AI之外，同时检测载脂蛋白B能对各种脂蛋白代谢失调提供更多的信息，也可替代低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）检测。检测载脂蛋白B在监视降脂药物治疗时非常有用。一些研究表明，当APoB浓度上升（女性ApoB>1.50gL,男性ApoB>l.55gL）,而ApoAl浓度下降（女性Apol<l.20gL,男性APOAkI.10gL）,对于预测CHD危险非常有用。14.操作性能14 .1线性范围：O.Ol2.50gL°14.2精密度：精密度的评估是根据NeCLS推荐的标准方法，AUlOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3%o用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(gL)S(gL)CV(%)天间精密度n=20（每天校«）X(gL)S(gL)CV(%)样品10.2420.00642.63样品10.3120.00742.38样品20.9520.02332.45样品20.6380.01181.84样品31.560.03412.18样品31.490.05163.46天间精密度n=20（一次校准）X(gL)S(gL)CV(%)样品10.2540.00742.89样品20.9130.02332.55样品31.580.03762.3814.3方法学比较：A，公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对63个样品进行APoB检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下:y=l.08-0.0512gL;r=0.990o15 .4灵敏度：本试剂的检测限为O.003gL016 .5病人结果可报告范围：0.012.50gL17 .超出范围结果处理：本法的检测范围为0.01-2.50gLo当样品测定值超过上限时，应将样品用9gL氯化钠溶液作1：1稀释后，重新测定，结果乘以2。18 .病危报警值的处理：无。19 .方法局限性17.1本法的检测范围为0.01-2.50gJ当样品测定值超过上限时，应将样品用9gL氯化钠溶液作1:1稀释后，重新测定，结果乘以2。17.2干扰物质：DiaSys公司的poB试剂中抗体特异地只与人ApoB发生免疫反应。当样品中抗坏血酸浓度1704molL,胆红素浓度598mol/L,血红蛋白浓度5.00gL,甘油三酯浓度22.6mmolL时没有观察到干扰。试剂与ApoAl和ApoA2没有交叉反应。17.3前带限制：血清ApoB值10.00gL时，没有观察到前带效应。18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献1. BhatnagarD,DurringtonPN.MeasurementandclinicalsignificanceofapolipoproteinsA-IandB.In:RifaiN,WarnickGR,DominiczakMH,eds.Handbookof1ipoproteintesting.Washington:CCPress,1997:p.177-98.2. RifaiN,BachorikPS,AlbersJJ.Lipids,lipoproteinsandapolipoproteins.In:BurtisCA,AshwoodER,editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.PhiIadelphia:W.BSaundersCompany;1999.p.80961.3. JungnerI,MarcovinaSM,WalldiusG,HolmeI,KolarW,SteinerE.ApolipoproteinBandA-Ivaluesin147576Swedishmalesandfemales,standardizedaccordingtotheWorldHealthOrganization-InternationalFederationofClinicalChemistryFirstInternationalReferenceMaterials.ClinChem1998;44:1641-9.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。
