临床标本的细菌学检验.ppt.ppt

1,临床标本的细菌学检查,2,病原学检查的主要任务,1研究感染性疾病的病原体特征 传统感染性疾病的病原体研究 条件致病菌和耐药菌的研究 临床感染优势菌的组成和变迁规律 新出现病原体的研究,3,2提供快速、准确的病原学诊断 以分离培养为核心，微生物的分离鉴定及确证实验为诊断依据的活菌检验 非培养方法的快速检验,4,3.指导临床合理使用抗生素对分离的病原体进行抗生素敏感试验参与临床，提出合理用药的建议,5,4对医院感染进行监控 Nosocomial infection：又称医院获得性感染（hospital acquired infection），指患者在入院时不存在，也不处于潜伏期，而在医院内发生的感染，包括医院内获得的而在出院后发病的感染。广义的医院感染对象不仅指住院患者，还包括门诊病人、医院职工、探视人员与陪护人员等。医患之间、病人之间、病人内源性感染、操作不当引起的医源性感染。,6,监控内容,基本原则与病原体感染类似，但更应注意正常菌群的污染以及条件致病菌在医院感染中的地位。定期对医院环境进行病原体监测。定期对医疗器械的消毒效果进行监测。,7,血液（败血症）的细菌学检查 中枢神经系统感染的细菌学检查 呼吸系统感染的细菌学检查 泌尿生殖道感染的细菌学检查 胃肠道感染的细菌学检查外科感染的细菌学检查,8,Precedures for bacterial detection,specimen,Stain of smear,Culture and isolation,Enriched culture,Anaerobic cultivation,Cultivation with carbon dioxide,Observation of colonial morphology,Picking colony,Stain of smear microscopic detection,Serological identification,Biochemical identification,Antimicrobial susceptibility testing,Determination of pathogenic bacterial detection,9,临床标本采集基本原则1.尽早采集标本采集的最适时机:尽量在抗菌药物使用前，临床症状和体征最明显的时候采集标本。,10,2.无菌采集：减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染。盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用消毒剂。,11,3.不同的采集方法和标本种类,12,4.保存和运送：标本采集后应立即送至实验室。床边接种可提高病原菌检出率。,13,5.安全采集,14,Step1.接受每一份标本时都应该用肉眼或 显微镜检查，以便评价其是否适合 进一步检查。,临床标本检验程序,15,Step2.明确标本来源、来源科室及检验 项目有助于对病原菌的正确诊断。,requisitionThe patient,s name and hospital number.Age and sex.Collection date and time.Exact nature and source of the specimen.Objective.,16,17,Step3.选择适合特定标本类型的初次培养 基、孵育的温度和气体，以便有效 地发现潜在的致病菌。,18,19,20,21,Step4.初次培养基上的分离物，可能存在 多种细菌：区分正常菌群与致病菌 确定优势菌群,22,化脓性链球菌菌落特征（溶血）,铜绿假单胞菌菌落特征（血琼脂平板）,23,涂 片 检 查,快速是“指南针”对确诊报告提供参考意义不要过分依赖、过分夸大它的作用,24,血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。,25,1）选择有价值的试验：所选项目大结果可能为阴性/阳性，但阳性/阴性率应大于90%，否则无意义。2）选择快速简便的项目：鞭毛染色、氧化酶、凝固酶、触酶、O/F等应做为首选项目。3）一种试验有多种方法时，应了解不同试验的敏感性和特异性。,鉴定实验的选择,26,革兰阳性需氧球菌鉴定,触酶,+,凝固酶DNA酶,+,葡萄球菌属,-,溶血现象,溶血,溶血,溶血,optochin,胆汁七叶苷,6.5Nacl,杆菌肽,CAMP,胆汁七叶苷,6.5Nacl,-,27,革兰阴性杆菌鉴定,需氧菌,厌氧菌,脆弱拟杆菌梭杆菌属其他,氧化酶,KIA,O/F,KIA,O/F,发酵菌F,非发酵菌O/-,肠杆菌科,苯丙氨酸VP,动力,不动杆菌属,-,+,弧菌科,-,-,+,+,发酵菌F,非发酵菌O/-,动力,嗜麦芽寡养单胞菌,假单胞菌属产碱杆菌属,黄杆菌属莫拉氏菌属,28,Step5.在已鉴定的细菌中，确定哪一 种要进行怎样的微生物敏感性 试验。,29,医生、护士、检验师 正确采集 运送标本 微生物科 直接镜检、免疫学和分子生物检测、病原体分离培养鉴定、药敏实验 报告 结果 医生 明确诊断、合理用药,30,败血症的细菌学检查,血液标本的细菌培养是诊断败血症的基本方法。如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。Sepsis：The presence of pathogenic microorganisms or their toxins in tissues or in the blood.Systemic disease caused by the spread of the microorganisms via the circulating blood is commonly called SEPTICEMIA.一过性、间歇性、持续性,31,血培养常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌（A，B群、肺炎链球菌等）、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌属、厌氧菌和念珠菌等。,32,血标本采集和运送：1.采血指征:2.采血量:成人采血量是810 ml,儿童1 5 ml血液和肉汤之比为15110。3.血培养次数和采血时间：4.具体操作：5.标本运送：,33,菌血症时血液中的细菌并不多，通常仅1020 CFU/ml,故采血量大阳性率高。采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行,在24 h 内采集23 次做血培养(一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养)。对间歇性寒战或发热，应在寒战或体温高峰到来之前0.51h采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。标本运送:采血后应该立即送检,如不能立即送检,需室温保存或置35 37 孵箱中,切勿冷藏。,34,实验室检查：1.传统手工法：2.自动化血培养检测系统：,35,36,1.目前引起败血症的病原菌多为耐药的金葡菌和大肠埃希菌及其他一些G-杆菌，也有二种以上细菌和真菌同时或交替引起的败血症。2.对检出的常见细菌不能随便判定，其标准为：1）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）。2）发病2个星期后血中抗体滴度明显上升。,37,结果报告1.阳性结果报告:(1)初级报告(2)最终报告2.阴性结果报告：,38,中枢神经系统感染的细菌学检查,脑脊液为一水样透明液体，存在于脑室和蛛网膜下腔内。在生理情况下，血液和脑脊液之间有血脑屏障，阻碍各种微生物通过血液进入中枢神经系统。正常人的脑脊液是绝对无菌的。在病理情况下，血脑屏障受到破坏，病原微生物及其产物进入脑脊液，引起中枢神经系统损害。此时在脑脊液中可培养检出病原微生物。,39,3个月至5岁儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌流感嗜血杆菌。新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、B群溶血性链球菌、Lister monocytogens和脑膜败血黄杆菌引起。化脓性脑膜炎脑膜炎奈瑟菌、Haemophilus influenzae、肺炎链球菌继发性脑膜炎葡萄球菌（败血症和损伤等）链球菌（继发于耳鼻喉感染，尤以乳突炎和中耳炎多见）大肠埃希菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、枸橼酸杆菌、不动杆菌和肠球菌等（脑部外伤、神经外科手术和脊髓麻醉等引起）,40,结核性脑膜炎结核分枝杆菌真菌性脑膜炎新生隐球菌、白假丝酵母菌大脑脓肿患者的脑脊液培养时，多达85%可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌混合感染。,41,观察物,细菌性的,结核性的,真菌性的,病毒性的,优势白细胞类型,分裂的多形核嗜中性粒细胞,单核细胞,单核细胞,单核细胞,糖,很低5-20mg/100ml,低20-40mg/100ml,低20-40mg/ml,正常65-70mg/ml,蛋白,增高,增高,增高,感染早期轻度增高,涂片染色,革兰染色,抗酸染色,印度墨汁,脑 膜 炎 类 型,42,标本的采集和运送 腰椎或脑室穿刺，将脑脊液分别收集于3只无菌试管内，1-2ml/管 细菌学检查 化学和免疫学检查 细胞计数和分类 标本采集后置于无菌容器中立即送检，不能保存于冰箱中。,43,实验室检查 脑脊液离心沉淀，取其沉淀物接种于巧克力琼脂平板、血琼脂平板和厌氧琼脂平板，分别置需氧和厌氧环境中培养，对疑有真菌和结核分枝杆菌感染的还应分别接种于相应专用培养基上。孵育后根据菌落性状、生化反应作细菌学鉴定。在细菌培养同时，取其沉淀物作涂片、染色、镜检，以早期诊断感染的病原。,44,新生隐球菌（负染色法检查是否有宽厚荚膜的酵母菌作出确诊，非致病菌无荚膜）,45,Cryptococcus neoformans新生隐球菌PAS染色,46,结果报告 培养48小时，仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。查见细菌则报告菌名和药敏结果。,47,呼吸系统感染的细菌学检查,上呼吸道：从鼻部到喉部，包括口咽和鼻咽，以及相连的腔、窦和中耳。咽炎、鼻咽炎、中耳炎、窦炎、会厌炎正常菌群：绿色链球菌和肺炎链球菌 非致病性奈瑟氏菌种 卡他布兰汉氏菌 金葡、表葡 类白喉菌 嗜血杆菌种 酵母菌（念珠菌种），数量有限 各种严格的厌氧性阳性球菌和革兰氏阴性杆菌,48,下呼吸道：包括气管、支气管和肺气管炎、支气管炎、肺脓肿、肺炎,49,正常人下呼吸道基本无菌，当机体全身或局部抵抗力减低时，上呼吸道的正常菌群可侵入下呼吸道，也可因直接吸入病原微生物或通过淋巴-血循环导致感染。下呼吸道标本主要为痰液和支气管分泌物，排出的痰液经过咽喉及口腔后，常混有上呼吸道的常居菌。上呼吸道存在正常菌群，在采集标本与结果分析时应予考虑。,50,呼吸道标本中常见分离菌,51,上呼吸道感染细菌性咽炎和扁桃体炎化脓性链球菌 猩红热、皮肤红疹 风湿热、急性肾小球肾炎百日咳百日咳鲍特菌白喉白喉棒状杆菌鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾炎病人的临床诊断；还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的诊断有意义，应结合临床。,52,上呼吸道标本的采集和运送：病人朝亮光处坐立，用压舌板压下舌头，无菌棉拭子擦拭扁桃体、咽喉壁及感染区域。不要接触舌或颊表面，最好同一处用两个拭子擦拭。,53,下呼吸道感染,1.咳嗽咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状，咳嗽的性质与痰的性状如脓或铁锈样痰具有鉴别诊断意义。2.咯血喉以下的呼吸道出血为咯血，包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。3.呼吸困难呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。4.发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或CRP明显增高。5.胸部影像学检查提示 有感染可能。,54,1.自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。尽可能在用抗菌药物之前采集标本。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应1ml。咳痰困难者可用雾化吸入加温至45C的100g/L NaCl水溶液，使痰液易于排出。对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存2h。,下呼吸道标本的采集和运送：,55,2.支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法，均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。3.小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。,56,57,下呼吸道细菌学检验标本涂片显微镜白下细胞和鳞状上皮细胞计数判断标准,58,实验室检查：采集痰或鼻咽拭子要来自于呼吸道合格的标本，以提高检出率和阳性的正确率。鼻咽拭子的细菌学检查应紧密结合临床。细菌学镜检的描述性报告：如镜检见到排列成葡萄状的革兰阳性球菌，可报告“找到革兰阳性球菌，形似葡萄球菌”；如见到平端相对矛头状端相背，成双排列，具有明显荚膜的革兰阳性球菌时，可报告“找到革兰阳性球菌，形似肺炎链球菌”；如见到不易识别的细菌时则报告“找到革兰性形细菌”。,59,挑取可疑菌落进行细菌鉴定和药敏试验，痰及下呼吸道分泌物标本易受到上呼吸道正常菌群的污染，临床微生物实验室通常可从送检的呼吸道标本中分离出多种细菌，但分离的细菌是否能真正代表下呼吸道感染的病原菌，这对临床诊断和治疗感染性疾病至关重要。实验室人员在检验过程中应重视判断所分离的细菌是污染的上呼吸道正常菌群还是引起下呼吸道感染的病原菌。在实际工作中，有时也由于细菌生长速度不一，如肺炎链球菌可能被生长速度快的细菌（包括正常菌群）菌落掩盖，不仔细观察就会漏检。,60,当在同一培养基上分离出多种病原菌时，应主动与临床医生联系，结合患者的临床症状、痰涂片染色镜检及近期细菌培养结果（如近期同一病人多次分离培养出同一种菌）等综合判断所分离的多种细菌中哪一种菌可能为优势病原菌。,61,结果报告：痰标本培养48小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长，报告“正常菌群”。查出致病菌，最终检验结果应报告标本肉眼观察的结果、涂片革兰染色白细胞、鳞状上皮细胞与细菌学镜检的描述性报告、优势菌鉴定的规范细菌名称和药敏试验结果及评述性意见。,62,结核分枝杆菌的检验,结核标本的采集与处理：合格的痰标本：连续3次送检 其他类型标本：尿液、脑脊液、胸水等 标本的后期处理：1：1 4%NaOH 消化15分钟 消除杂菌 液化作用 促进粘蛋白和细胞中结核杆菌释放 CSF与尿液要离心,63,涂片：12cm2 抗酸性与抗酸染色 涂片的结果要结合培养结果，有助于早期诊断、早期隔离传染源和指导临床用药培养：酸性罗琴培养基 温度：37 气体：专性需氧、5CO2 时间：35天，生长缓慢 菌落：坚硬、粗糙、淡黄色菌落观察与结果报告：每周观察一次 报告：找到抗酸杆菌 未找到抗酸杆菌,64,抗酸染色,65,泌尿生殖道感染的细菌学检查,尿液标本：尿路感染是人类最常见的感染之一 尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引起的尿路炎症。诊断尿路感染最常用的方法是进行尿液标本的细菌学检查。根据感染可分为上尿路感染（如肾孟肾炎）及下尿路感染，男性还可出现前列腺感染，不同部位同时感染也很常见。,66,中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数105/ml（球菌104/ml），提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核等）。常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。,67,一、尿液标本采集和运送 采集指征：（1）有典型的尿路感染症状；(2）肉眼脓尿或血尿；（3）尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性；(4)不明原因的发热，无其他局部症状；（5）留置导尿管的患者出现发热；（6）膀胱排空功能受损；(7）泌尿系统疾病手术前。,68,2.采集方法：标本采集应力争在未使用抗生素之前注意避免消毒剂污染标本，方法有：(1）清洁中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，将前段尿排去，中段尿约10-20ml直接排入专用的无菌容器中，立即送检，2h内接种。该方法简单、易行，是最常用的尿培养标本收集方法，但很容易受到会阴部细菌污染，应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。,69,（2）耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，但有一定的痛苦患者难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。(3）直接导尿：按常规方法对会阴局部进行消毒后，用导尿管直接经尿道插人膀胱，获取膀胱尿液，可减少尿液标本污染，准确地反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道细菌引入膀胱，导致继发感染，一般不提倡使用。,70,3.采集容器：（l）应由不与尿液成分发生反应的惰性材料制成；(2）洁净、无菌、加盖、封闭、防渗漏；(3）不含防腐剂和抑菌剂；(4）广口、具有较宽的底部、容积应50ml、盒盖易于开启。4.标本运送：标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2h（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存）,4 冷藏保存时间不得超过8h，但应注意冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养。,71,二、实验室检查 1涂片检查：尿路感染标本可直接做细菌培养，无需常规进行涂片检查。对于临床怀疑淋病奈瑟菌、假丝酵母菌或结核分枝杆菌感染的标本可用无菌吸管吸取尿液5-10ml置无菌试管中，3000-4000r/min离心30min，倾去上清液，取沉渣涂片，行革兰染色或抗酸染色后镜检。,72,2细菌培养：(l）普通培养：将收集标本的容器轻轻旋转混匀，用定量接种环分别取尿液lul涂抹接种血平板和麦康凯平板（或中国蓝平板），35-37培养18-24h，观察结果。对导尿、耻骨上膀胱穿刺和已使用抗生素治疗的病人标本应增加一个10l接种量。,73,（2）特殊培养：检查淋病奈瑟菌、结核分枝杆菌感染时无需做定量培养，可将标本离心后取尿沉渣进行培养，以提高阳性率。对怀疑有苛氧菌感染者应采用耻骨上膀胱穿刺法或导尿法采集样本，加种一块巧克力平板，置5%CO2环境中培养48h。,74,三、结果观察和报告 1.结果观察和评价：(l)菌落计数：计数平板上的菌落数，采用1ul接种量者，将菌落数乘以103；采用10ul接种量者，将平板菌落数乘以102，即为每ml尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）。如菌落生长过多无法精确计数时，则报告105CFU/ml。,75,（2）结果评价：正常情况下从肾脏排泌至膀胱的尿液是无菌的，但膀胱中的尿液经尿道排出体外时可受到下尿道中正常菌群的污染，而出现细菌。因此对不同方法获取的尿液标本培养结果需正确评价，才能有效指导临床合理治疗。一般认为，清洁中段尿标本中单种细菌菌落数105 CFU/ml可能为感染；104CFU/ml可能为污染，在两者之间需要根据具体情况进行评估。,76,77,2阴性培养结果报告：培养48h无菌落生长，即为阴性。接种lul尿量者，应报告“培养48h，菌落计数103CFU/ml”；接种10ul尿量者，应报告“培养48h，菌落计数102CFU/ml”。3.阳性培养结果报告：无意义的阳性培养结果报告；纯培养报告“革兰性菌生长，菌落计数：CFU/ml”；混合菌生长报告“革兰性菌和革兰性菌混合生长”。有意义的阳性培养结果报告：报告菌落计数、细菌种属名称及标准抗菌药物敏感性试验结果。,78,生殖道标本正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性阴道）有多种细菌寄生。查见病原菌提示有细菌感染。生殖道分泌物培养常见病原菌中，革兰阳性菌有葡萄球菌、肠球菌、化脓性链球菌、厌氧链球菌、结核分枝杆菌、阴道加特纳菌等；革兰阴性菌有淋病奈瑟菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、杜克嗜血杆菌、不动杆菌、拟杆菌等；可见的病原微生物还有念珠菌、解脲脲原体、人型支原体、生殖道支原体等。,79,多种细菌引起的生殖道感染常见有包皮炎、前列腺炎、子宫内膜炎、产褥热等，老年男性因尿道器械检查而继发的附睾炎多由革兰阴性杆菌引起。淋病奈瑟菌所致的淋病是一种泌尿生殖道急性传染病，引起尿道、阴道及子宫颈部的化脓性炎症，感染有该菌的孕妇分娩时，胎儿经产道可被感染，导致淋病性眼结膜炎。杜克嗜血杆菌是软性下疳的病原菌，软性下疳是一种通过性交传播的人类溃疡性疾病。阴道加特纳菌（GV）、拟杆菌、厌氧链球菌感染与细菌性阴道病（BV）的病因有关。生殖道分泌物中培养出厌氧菌，在临床上常见为盆腔感染，如输卵管脓肿、败血性流产、盆腔脓肿、子宫内膜炎、手术后感染特别是子宫切除术后等。,80,标本采集 生殖器官分泌物,尿道口、阴道、子宫颈及前列腺分泌物及精液由医师采集，置于无菌试管送检。,81,（二）检验方法和操作流程 1.涂片检查（1）革兰染色镜检（2）梅毒螺旋体涂片：暗视野显微镜检查,82,直接显微镜检查衣原体包涵体,83,淋病患者的尿道分泌物标本直接涂片,84,2.分离培养（1）普通细菌培养（2）淋病奈瑟菌培养（3）阴道加特纳菌培养3.报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道 加特纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。,85,细菌阴道病（Bacteria Vaginosis，BV）实验室检查,（一）阴道分泌物pH测定和胺实验1pH的测定：用窥阴器扩展阴道,用pH试纸接触阴道壁,或用不沾盐水的棉拭子取分泌物后涂于pH 试纸上。细菌性阴道病病人的阴道分泌物的pH常大于4.5。2胺味的测定：取病人的阴道分泌物于载玻片上,加1滴10%氢氧化钾溶液，可闻到“鱼腥味”胺味。病人常会诉说阴道分泌物有特殊腥味。,86,（二）线索细胞检查1方法：在载玻片上加一滴生理盐水,取阴道分泌物混合成悬液,加盖玻片,置高倍镜下检查。2结果：细菌性阴道病患者阴道分泌物大多数可找到线索细胞,由于存在大量细菌（加特纳菌和厌氧菌）和细胞的明显溶解,可使鳞状上皮细胞边缘呈锯齿状且模糊不清。,87,88,3临床意义：细菌性阴道病的临床诊断标准为：阴道分泌物稀薄均匀,分泌物pH4.5；分泌物加入10%氢氧化钾时出现胺味；分泌物湿片检查可见线索细胞,革兰染色可见特定菌群分布。诊断细菌性阴道病必需具备及中的任意两条。线索细胞是诊断本病的必需标准之一。,89,阴道加德纳菌（Gardnerella vaginallis，GV）培养：GV一般不需作分离培养，诊断价值有待讨论。方法：将阴道分泌物接种到选择培养基，5%CO2，37培养。可疑菌落转种到人血琼脂平板，做革兰染色和氧化酶、触酶、糖发酵等生 化鉴定。结果：可形成0.30.5mm针尖大小的菌落，呈圆 形、光滑、不透明。涂片染色多形性的革 兰染色不定的球杆菌。,90,胃肠道感染的细菌学检查,()常见的病原体1.肠毒素为主的病原菌 霍乱弧菌、志贺菌(福氏、宋内)、大肠埃希菌(ETEC、EHEC、EAggEC)、金黄色葡萄球菌、难梭菌、产气荚膜梭菌。,91,2.侵袭性为主的病原菌 沙门菌、大肠埃希菌(EPEC、EIEC)、志贺菌(鲍氏、志贺)、弯曲菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、结核分枝杆菌、白假丝酵母菌。,92,临床意义,1感染性腹泻 最为常见，为胃肠炎 的症状，由多种病原体感染所致。2细菌性痢疾是指由志贺菌属(福氏和 宋内氏)引起的肠道传染病。常有里 急后重和脓血样便，中毒性痢疾见于 小儿。发病率呈下降趋势。粪培养对 诊断有价值。,93,3细菌性食物中毒常见于沙门菌、副溶血弧菌、致 病性大肠 埃希菌、葡萄球菌、肉毒棱菌、腊样芽胞杆菌食物中毒。多发生在夏秋季，以暴发和集体发病为特征。4致病性大肠埃希菌的肠道感染分为5类。即ETEC可致霍乱样肠毒素水泻，常见于儿童和旅行者腹泻；EPEC可引起婴幼儿腹泻；EIEC可引起志贺菌样粘液脓血便；EHEC的0157：H7血清型可引起出血性 肠炎和溶血性尿毒综合征；EAggEC是新近报道可引起慢性腹泻的大肠埃希菌。,94,5消化性溃疡幽门螺杆菌感染主要 部位是胃及十二指肠球部。大量 研究及临床证明胃炎、消化性溃 疡主要是HP所引起，HP可能还参 与了胃癌的形成。从此消化性溃 疡经抗感染的治疗而成为一个新 的概念，并取得好的疗效。,95,Helicobacter pylori,幽门螺杆菌,96,实验室检查,采集脓血或糊状新鲜粪便，应在急性期，使用抗生素前进行肠道细菌多为G-杆菌，形态区分困难，不做涂片镜检。,97,98,待检菌 分离培养志贺菌 接种于SS、MAC平板，35，培养24h沙门菌 接种于SS、MAC平板，35，培养24hEPEC、EIEC 接种于SS、MAC平板，35，培养24h或ETECEHEC 接种于SMAC平板，35，弧菌科致病菌 取脓血粘液便接种含1%NacL的碱性蛋白胨 水，35，6-9h后，挑取菌膜部分接种 TCBS平板、糖双洗平板，35，培养24h,99,菌落 报告志贺菌 检出或未检出志贺菌沙门菌 检出或未检出沙门菌EPEC、EIEC 凝集，报告检出EPEC或EIEC；不凝集，根或ETEC 据LT、ST结果，报告检出或未检出ETEC EHEC 检出或未检出EHEC 霍乱 传染病报告菌种送卫生防疫站最终鉴 定副溶血弧菌/报告检出或未检出副溶血弧菌/溶藻弧菌溶藻弧菌,100,伤寒沙门菌的实验室检查,101,102,103,外科感染的细菌学检查,1.常见病原菌,104,取创伤分泌物和脓液作标本；放线菌首先要检出标本中的硫磺颗粒；检测结核分枝杆菌作抗酸染色镜检；检测厌氧菌要作厌氧培养。由创伤、手术、侵入性器械操作等外科治疗引起的感染最为常见，并日渐增多。,105,106,API细菌生化鉴定,107,全自动细菌鉴定及高级专家系统药敏报告仪VITEK2,