微生物临床实验.ppt

Medical Microbiologyexperiment,实验性质：综合性实验实验内容：1、简介实验室常用仪器设备2、空气、皮肤的细菌检查结果3、细菌的生长现象及代谢产物观察 4、观察紫外线消毒灭菌结果 5、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定（一）6、粪便中病原性肠道杆菌的分离鉴定（一）革兰染色法7、中草药、抗生素的抑菌试验,实验二、葡萄球菌、肠道杆菌的分离鉴定及细菌的药物敏感性试验,实验目的,1、掌握脓汁标本中葡萄球菌的分离鉴定方法。掌握革兰染色法。2、熟悉常见病原性球菌的菌落和形态染色特点。3、熟悉粪便标本中肠道致病菌的检验过程,一、微生物学实验室常用仪器设备,超净工作台高压蒸汽灭菌器过滤器培养箱,二、空气、皮肤的细菌检查结果,1、记录空气微生物培养结果（要记录本人所在实验台的结果）菌落大小、边缘、颜色、粗糙（光滑）每立方米层流洁净手术室：10普通手术室、无菌区：2002、记录皮肤微生物培养结果（要记录本人的实验结果）比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。,液体培养基（沉淀、浑浊、表面生长）金、柠、白葡萄球菌色素甲、乙、丙链球菌溶血环特征大肠与副伤寒杆菌致病性菌落特点绿脓杆菌的水溶性色素观察双糖含铁培养基动力、气体、硫化氢、乳糖分解观察结核杆菌菌落特征的观察,三、细菌的生长现象及代谢产物观察（示教）,细菌的生长现象及代谢产物观察,混浊生长,菌膜生长,四、观察紫外线消毒灭菌结果,五、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定（一）,1、讨论分离鉴定程序：标本直接涂片染色镜检：典型葡萄球菌，可做初步诊断 分离培养可疑菌落直接涂片染色镜检（血液琼脂平板）血浆凝固酶试验 药敏实验2、直接涂片染色镜检：球杆混合物、牙垢3、分离培养：平板分区划线接种37、24h,脓汁中葡萄球菌的分离鉴定,分区划线法,六、粪便标本细菌的分离培养鉴定1、讨论程序标本分离培养（S-S培养基、EMB）可疑菌落增菌培养 涂片染色镜检。初步鉴定（生化反应）血清学鉴定（确定菌群和菌型）药敏实验。2、分离培养：接种于SS培养基、EMB37、24h,革兰染色法,原理：革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁差异（肽聚糖含量）；革兰阳性菌等电点比革兰阴性菌低。实际意义：鉴别细菌；选择抗菌药物；与细菌致病性有关步骤：结果：,革兰染色步骤,1.制片：取标本（球杆混合物、牙垢）涂片、干燥、固定2.初染：结晶紫1min水洗3.媒染：碘液1min水洗4.脱色：95%酒精30s水洗5.复染：稀释复红1min水洗、滤纸吸干6.油镜观察：,1、制片涂片、干燥、固定,2.结晶紫初染 1min水洗,3.碘液媒染 1min水洗,4.95%酒精脱色 30s水洗,5.稀释复红复染 1min水洗、滤纸吸干,6.油镜观察结果,革兰阳性菌：紫色革兰阴性菌：红色,七、细菌对中草药、抗生素的敏感性试验,1、临床意义：（见实验讲义）2、实验方法：（画图表示）纸片法及打孔法(操作)实验材料：20%浓度 黄连、黄芩。庆大霉素、诺氟沙星药敏纸片。,(a)Kirby-Bauer Method,平行划线法,纸片法,MIC测定,