设计大赛第七组综合与交叉学科量子点基因载体运载siRNA靶向TERT治疗神经胶质瘤的实验研究.docx

二、设计大赛第七组：综合与交叉学科量子点基因载体运载siRNA靶向TERT治疗神经胶质瘤的实验研究作者：王海潮I李洁凤2黄其俊2傅子财21.深圳大学2012级临床医学；2.深圳大学2014级临床医学指教教师：林桂淼陈献雄深圳大学医学部，深圳518060【摘要】立论依据SiRNA为基础的RNA干涉技术(RNAi)是一种重要的基因治疗手段，但是由于缺乏安全有效的SiRNA转运载体，肿瘤的基因干涉治疗进展缓慢。设计思路构建一种基于量子点(QD)的SiRNA非病毒可视化运载体系，靶向干涉端粒酶逆转录酶(TERT),用于神经胶质瘤基因干涉治疗。实验内容量子点经PEI修饰后，通过EDC缩合反应偶联转铁蛋白(TF),制备具有肿瘤细胞靶向能力的QD-PEl-TF纳米复合物。制备人神经胶质瘤的裸鼠皮下移植瘤模型，利用该纳米复合物运载TERT-SiRNAFAM进行治疗。采用小动物荧光活体成像实时观察siRNA纳米复合物在肿瘤组织的富集和分布。绘制肿瘤生长曲线，实验结束后，剥离肿瘤进行称重，采用实时定量PCR观察TERTmRNA转录水平，采用蛋白免疫印迹观察TERT蛋白表达水平，采用HE染色观察肿瘤组织形态学变化，采用免疫组化观察肿瘤血管生成情况，采用TUNEL实验观察肿瘤细胞凋亡情况。材料主要材料包括量子点、裸鼠、TERTSiRNA、实时定量PCR试剂盒、VEGF抗体和TUNEL检测试剂盒等。可行性前期体外实验中，我们成功构建了非靶向QD-PEI纳米复合物，该纳米复合物能够高效将siRNA转染至神经胶质瘤细胞内，并有效沉默TERT基因的表达。本项目在前期基础之上,将QD进行TF靶向修饰，理论可行性好。此外，该项目所需的实验条件和实验设备齐全，购置相应的实验试剂和耗材即可顺利完成。创新性本次构建的非病毒载体转染效率高，能够有效携带目标SiRNA进入细胞内。该量子点基因载体具有实时示踪可视化特点和靶向功能，能够有效避免脱靶效应，降低机体发生不良反应的风险。导师简介：林桂淼，病理学与病理生理学专业博士，深圳大学医学部基础医学院副教授，医学教学实验中心副主任，深圳市高层次孔雀计划人才，主要从事肿瘤生物治疗和纳米毒理学方面的研究。主持多项国家及省市基金项目，发表论文40余篇。陈献雄女，南方医科大学预防医学专业硕士，现深圳大学医学院高级实验师，医学教学实验中心副主任，主要从事病原生物学和免疫学方面的研究，有多年组织辅导学生参赛经验。主持各级课题10余项，近年发表研究论文10多篇。