高铁还原酶ferric-chelatereductase,FCR试剂盒说明书.docx

高铁还原酶(ferricchelatereductase,FCR)试剂盒说明书微法IoOlf/96样注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定澜定意义：高铁还原酶(ferric-chelatereductase,FCR)催化高价铁螯合物中的Fe3+还原为Fe2+,在部分物种铁元素的吸收中有重要作用。渊定原理：FCR催化Fe3+还原为Fe入，Fe”和ferrozine反应显色，在562nm下有特征吸光值。自备用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸储水。试剂组成和配制：试剂一：液体6mLxl瓶，4匕避光保存;试剂二：液体6mLxl瓶，4七避光保存;试剂三：液体6mLxl瓶，4七保存。粗液提取：按照组织质量(g)：水(mL)为1：510的比例(建议称取约0.1g组织，加入ImL蒸储水)，进行冰浴匀浆。IoOoog4C离心Iomin,取上清，置冰上待测。渊定步骤：1、分光光度计或函标仪预热30min以上，调节波长至562nm,蒸储水调零。2、工作液配制：将试剂一、二、三以1:1:1的比例混合。临用前配制，用多少配多少。3、在微量石英比色皿/96孔板中,加入50L样本上清和150L工作液,混匀,记录初始吸光值Al和30min后的吸光值A2。A=A2-A1FCR活性计算：派用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线:y=8.0014x+0.0011,R2=0.9997；(1)按样本质量计算单位定义：每g样本每分钟产生InmolFe2+-ferrozine定义为一个醉活力单位。FCR(nmol/min/g鲜重)=(A-0.0011)÷8.0014xl(XX)xV标÷(V样÷V样总XW)÷T=4.166×(A-0.0011)÷W(2)按样本蛋白浓度计算单位定义：每mg蛋白每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位。FCR(nmol/min/mgprol)=(A-0.0011)÷8.0014xl000xV标÷(V样÷V样总XCPr)÷T=4.166×(A-0.0011)÷CprV样总：加入提取液体积，1mL；V样：反应中样品体枳，50L;V标：加入标准品体积，5OL;T：反应时间，30min:W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000,mol到nmol的转换系数。b.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y=4.0007x+0.0011,R2=0.9997；y,吸光度(1)按样本质量计算单位定义：每g样本每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个所活力单位。FCR(nmol/min/g鲜重)=(A-0.0011)÷4.0007x1000xV标÷(V样÷V样总xW)÷T=8.331×(A-0.0011)÷W(2)按样本蛋白浓度计算单位定义：每mg蛋白每分钟产生InmOlFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位。FCR(nmol/min/mgprol)=(A-0.0011)÷4.0007xl000xV标÷(V样÷V样总xW)÷T=8.331×(A-0.0011)÷CprV样总：加入提取液体积，1mL；V样：反应中样品体积，50L;V标：加入标准品体积，50L;T：反应时间，30min:W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000,mol到nmol的转换系数。