大肠埃希菌.ppt
大肠埃希氏菌,目录：,一、引起疾病症状（致病性、流行病学情况）-3-4二、基本情况及特征-5-12三、培养特性-13-14四、生化特性-15-18五、抗原特征-19-20六、检验方法（举例阐述检验某一食品、商品中该菌的详细操作过程）-21-23,一.引起疾病症状,案例：大肠艾希氏菌引起食物中毒，在国内已有报道，现将2004年5月的一起由该菌引发的案例报道如下。2004年5月30日，某乡镇干部于伊斯兰餐厅就餐，随后该餐厅又接待了一对新人的婚宴。17:00点发现首例病情，18:00病人增多。31日23时停。潜伏期最短3h,最长33h,平均18h。主要症状为发热37.538.5。腹痛，腹泻，头痛，恶心，呕吐。腹泻呈水泻便，一般2-3次，最多9次。经抗菌素治疗2-3天痊愈，无死亡。,大肠艾希氏菌O157,大肠埃希菌(大肠艾希氏菌O157),通常称为大肠杆菌,是肠道中大量存在的共生微生物.大肠艾希氏菌O157是肠出血性大肠艾希氏菌的一个主要血清群,严重危害人类身体健康.该菌能引起人的出血性腹泻和肠炎,并发溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等,严重的可致人死亡.目前,多个国家已将“O157”列为必须报告的传染病,予以高度重视.为防止大肠艾希氏菌O157感染事件的发生,我国于1997年5月建立了全国性的监测网络,2000年卫生部将大肠艾希氏菌 O157列为重点监测对象.大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）革兰氏阴性短杆菌,大小0.513微米.周身鞭毛,能运动,无芽.能发酵多种糖类产酸、产气,是人和动物肠道中的正常栖居菌.大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶.,肠杆菌科,大肠埃希菌,科,与医学有关的属,种,埃希氏菌属,肠杆菌科(Enterobacteriaceae),1.致病菌：如沙门菌，志贺菌、鼠疫耶尔森菌；2.机会致病菌：大肠埃希菌、奇异变形杆菌等；3.由常居菌转变而来的致病菌：如引起胃肠炎的 大肠埃希菌。,一大群寄居在人和动物肠道中生物学性状近似、革兰氏阴性、遗传学上有亲缘关系的肠道杆菌。现已知有44个菌属，170多个菌种,，包括三大类别：,肠杆菌科的共同特征,1.革兰阴性杆菌，无芽孢，少数有荚膜或微荚膜(K或vi抗原）；2.多数菌种（除志贺菌和克雷伯菌）有鞭毛和菌毛；3.营养要求一般，需氧或兼性厌氧；4.触酶阳性，还原亚硝酸盐；发酵乳糖的为非病原 菌,不发酵乳糖的是病原菌（志贺菌,沙门菌）；5.易变异，可通过突变和“可移动遗传原件”的转移 而致变异；6.菌体抗原、鞭毛抗原及荚膜抗原是血清学分型、鉴定的依据。,主要内容,一、概述二、生物学性状,概述,大肠埃希氏菌（Escherichia coli)俗称大肠杆菌，为德国科学家 Escherich首先 发现（1885年）。,艾舍里希,正常情况下 安分守己 竞争性抵御致病菌 帮助合成维生素K2,机体免疫力降低、肠道长期缺乏刺激 兴风作浪 肠道以外 例如胆囊、尿道、膀胱、阑尾,互利共生,大部分大肠杆菌是机会致病菌,感染,生物学性状,形态特征1、G-短直杆菌，大小0.40.723m，两端钝圆，无芽胞。,2、多数有周身鞭毛，可运动，但也有无鞭毛或又失去鞭毛无动力变异株。3、有菌毛 普通菌毛 性菌毛 有些菌株还有致病性菌毛，菌毛与致病力相关。,4、除少数菌株外，通常无可见荚 膜，但常有微荚膜（0.2m以下）。,培养特性,营养要求不高 兼性厌氧 S型菌落普通琼脂：生长良好圆形凸起、半透明、光滑、湿润、灰白色菌落，直径约23mm,麦康凯琼脂：红色菌落 伊红美蓝琼脂：紫黑色菌落 血平板：一些致病性菌株 常溶血,生化特性,能发酵多种糖类，产酸产气。多数菌株发酵乳糖；约半数菌株不分解蔗糖；,含酚红指示剂，酸性呈黄色，碱性呈红色,I M Vi C 实验现象为“”,凡此实验有上述结果的，判为典型的大肠埃希菌,吲哚试验（I）,甲基红试验（M）,细菌分解色氨酸产生吲哚,与二甲基氨基笨甲醛生成玫瑰吲哚，显红色。,细菌分解葡萄糖，产酸，使甲基红指示剂显红色。,VP反应,枸橼酸盐利用,细菌分解葡萄糖，产生丙酮酸，脱羧生成乙酰甲基甲醇,进而氧化生成二乙酰，与胍基生成红色化合物。,细菌分解柠檬酸盐生成碳酸盐，进而氨盐分目录：解，产生氨，培养基变碱，显深蓝色。,VP试验（V）,枸橼酸盐试验（C）,抗原结构及分类,O抗原：即菌体抗原，化学本质为多糖-磷脂-蛋白质复合物。耐热121 2h不破坏其抗原性。每个菌株只含有一种O抗原，其种类以阿拉伯数字表示；可用抗O单因子血清通过凝集试验鉴定。,K抗原：即荚膜抗原；个别位于菌毛中。不耐热。O不凝集性：具有K抗原的菌株不会被其相应的抗O血清凝集。,H抗原：即鞭毛抗原；不耐热，80可破坏其抗原性。1个菌株仅有1种H抗原。,该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55经60分钟或60加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。,抵抗力,大肠艾希氏菌的鉴定,1.样品来源：从本市批发部、超市、另售点等12家供货单位共采取鸡翅、鸡腿、鸡胸、鸡尖、鸡爪、整鸡及鸭头、鸭掌等9个冻离类产品计20件样品。,2.检验项目：致泻性大肠艾希氏菌,3.检验方法：,3.1增菌和分离培养：以无菌手续称取检验25g，加在225mL营养肉汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂磨碎。取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN，其余的移入500mL广口瓶内，于361培养6h。挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌肉汤内，于42培养18h。,3.2分离：将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板；污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板，于361培养1824h，观察菌落。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。,3.3.1假定试验：挑取经生化试验证实为大肠埃希氏菌的琼脂培养物，用致病性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌和产肠毒素大肠埃希氏菌多价O血清和出血性大肠埃希氏菌O157血清做玻片凝集试验。当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血清所包含的单价O血清做试验。如与某一个单价O血清呈现强凝集反应，即为假定试验阳性。,3.3血清学鉴定：,3.3.2证实试验：制备O抗原悬液，稀释至与Mac Farland3号比浊管相当的浓度。原效价为1：1601：320的O血清，用0.5%盐水稀释至1：40。稀释血清与抗原悬液在10mm75mm试管内等量混合，做单管凝集试验。混匀后放于50水浴箱内，经16h后观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。将培养后的三糖铁琼脂斜面上生长的菌落用侵袭性、产毒性大肠艾希氏菌诊断血清做玻片凝集试验。,3.4 生化试验：,自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁琼脂(TSI)或克氏双糖铁琼脂(KI)。同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。以上培养物均在36培养过夜。TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性，KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌.,
