益生菌酒精性肝损伤.ppt

益生菌对酒精性肝损伤作用机制研究,目的,方法,结果,结论,探究益生菌类制剂对小鼠实验性肝损害有无预防作用,本实验以小鼠为研究对象，共分三组，并设对照组。先期给予一段时间的益生菌制剂灌胃，而后一次性用四氯化碳和豆油溶液对所有小鼠灌胃染毒；,与对照组比较，益生菌制剂组肝损害程度较轻,益生菌制剂对小鼠实验性肝损害有预防作用,摘 要,1989年，Fuller定义：益生菌是通过改善肠道菌群平平衡而对宿主健康产生有益作用的活菌添加剂,Havenaar和HuisIntVeld于1992年扩展为：通过改善内源性性微生物,对动物或人类施加有益影响的单一或混合的活微生物,欧洲权威机构欧洲食品与饲料菌种协会(EFFCA)于2002年给出最新定义 益生菌是活的微生物,摄入充足的数量后,对宿主产生一种或多种特殊且经论证的健康益处,1994年德国会议益生菌是含活菌和/或死菌包括其组分和产物的细菌制品,经口或其其他黏膜途径投放,旨在改善黏膜表面微生物或酶的平衡,或者刺激特异性或非特异性免疫机制,2.扩 展,4.至 今,3.修 订,益生菌定义演变,1.首次定义,前 言,Nanji等曾给肝病患者肠道引入双歧杆菌,结果发现病人的血氨降低,同时食欲增加,有助于肝病的恢复。,华方德等曾应用回春生治疗肝硬化、肝炎,结果证明可有效地改善肝脏蛋白质代谢功能,降低血中的内毒素水平。其疗效优于现有的治疗肝炎、肝硬化药物。,李春梅的临床动物实验研究结果也证实,经益生菌制剂治疗后,肠道内致病菌数量减少,双歧杆菌数量增加,提示内毒素血症的好转与肠道内致病菌的增殖受到抑制有关。,研究进展,王清图的结果证明经双歧杆菌治疗后,可降低血中内毒素和血氨浓度。这些研究结果均证明益生菌制剂可减轻致病因素对肝脏的损伤,并有效地改善肝脏代谢功能。,材料与方法,11 材料111 动物 昆明种健康小白鼠,体重18-20g,内蒙古大学动物饲养中心提供。,四氯化碳溶液 食用鲁花花生油 苦味酸 发酵乳 乳酸菌发酵剂（活菌粉）生理盐水 ALT试剂盒 AST试剂盒 SOD试剂盒 4%的多聚甲醛 70%乙醇80%乙醇 95%乙醇 无水乙醇 二甲苯 石 蜡 PBS 伊 红 苏木精,112 主要药品与试剂,113主要仪器与设备,灌胃针，1ml、5ml注射器，电子秤，显微镜，包埋机，切片机，高速台式离心机、高速冷冻离心机;电子分析天平;电热恒温水浴锅;低温冰箱（-4-20-80）;,1.2 方法1.2.1 小鼠分组 在内大动物饲养中心取健康小白鼠，雄性20只，雌性20只。分组如下（表1）：,给药方法如下图（表2）：,小鼠 称重 眼眶取血 离心 解剖 取肝脏 取脾脏 多聚-80 多聚-80 甲醛 冰箱 甲醛 冰箱 固定 保存 固定 保存 脱水透明 脱水透明 包埋切片 保留待用 包埋切片 保留待用 HE染色 观察 HE染色 观察,1.2.2 小 鼠 处 理,肝脏疾病是影响人类健康的最为常见的疾病之一。各种有害因素导致的肝损伤主要有病毒性肝炎，酒精性肝炎和药物性肝炎等类型，其临床表现为肝坏死，脂肪肝，胆汁淤积、肝纤维化，肝硬化和肝癌等。目前，对肝损伤的治疗仍是一个全球性的严峻课题。CCL4肝损伤模型一直是筛选具有保肝降酶作用药物的常用模型之一。其致病机理如下：,讨 论,损伤细胞膜结构和功能 提高肝脏可溶性酶活性 肝脏毒物 攻击肝细胞膜 CCl4 CCl3(活泼）脂质过氧化 细胞膜损伤 坏死 P450激活 磷脂分子 Ca2+激活肝细胞膜上磷酸化酶,抑制内质网钙离子泵,与微粒体、脂质、蛋白质发生共价结合,CCl4致肝损伤机理,在对肝脏发病机制的研究中发现：内毒素是肝病发生、发展和恶化的最重要原因,可以直接或间接地造成肝脏的损害。有的学者认为内毒素是各种原因肝损害的共同物质基础。因此,许多研究者试图通过某些改变或降低内毒素的方法来减轻肝损害。传统常用的药物治疗效果并不十分令人满意,近年有人提出用微生态疗法,即补充益生菌或益生元制剂作为肝病的辅助治疗。益生菌是肠道原籍菌和常驻菌,而内毒素大多由革兰阴性菌即腐败菌或过路菌产生,补充原籍菌从而抑制腐败菌生长是降低内毒素的关键。,少数优势种群对整个肠道菌群落起决定性作用,补充优势菌即可抵制劣势菌的生长,补充的优势菌参与机体的防御屏障,其代谢产物乙酸、乳酸能阻止致病菌在肠内的定植(化学屏障);定植于粘膜或皮肤细胞上皮之间的正常菌群形成生物膜样结构,影响过路菌或外袭菌的定植、占位生长和繁殖（生物屏障),免疫、营养及杀菌,利用对人体无毒、无害、无致病的耗氧性微生物,使肠道局部环境的氧分子浓度降低,造成厌氧菌生长的微环境,促进常驻厌菌的生长,最终恢复正常的微生态平衡。,生态平衡理论,生物拮抗理论,其 他,生物夺氧,作用机制,实 验 图 片,实验图片小鼠生活照,实验照片灌胃,实验图片眼眶取血（杀鼠）,实验图片组织脱水,实验图片组织透明,实验图片包埋腊块,参考文献：,1 张平.内毒素与肝脏损害J.国外医学临床生物化学于与检验分册,1990,11(1)13-16.2 王跃.双歧杆菌及其在体内的作用J.国外医学临床生物化学与检验学分册,1988,9(3):12-15.3 康白.微生态学M.大连出版社,1988.4 刘丹卓，赵新广肝损伤的现代医学研究进展与展望2007，29（3）50-515 袁铁铮姚斌 分子水平上益生菌研究进展 2004,24(10)30-336 孙延波,等.双歧杆菌对门静脉血内毒素影响的初步研究J.中国微生态学杂志,1991,3(1):17-19.7 蒋寒青,等.双歧杆菌与乳杆菌对大鼠肠菌群失调的调整作用的初步研究J.中国微生态学杂志,1995,7(2):32-34.8 Nanji AA,Khettry,U,Sadrzadeh SMH.Proc Soc Exp 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