制药企业微生物知识及无菌制剂微生物污染培训.ppt

微生物与卫生知识培训,简介,河北科技大学生物科学专业河北大学生物化学与分子生物学石药集团欧意药业,微生物与制药行业息息相关,药品生产药品检验微生物混入药品中危害人体健康速冻食品中检出金黄色葡萄球菌新国标乳制品中黄曲霉素超标,目 录,第一章 微生物总论第二章 微生物的类群第三章 消毒与灭菌第四章 微生物的污染与控制,第一章 微生物总论,什么是微生物？人类是如何认识微生物的？微生物有什么特点？微生物都分布在哪里？微生物是如何代谢的？,日常接触到的微生物,日常接触到的微生物食物发霉霉菌肥面（老面或面肥）酵母菌酸奶乳酸菌、双歧链杆菌等流感病毒,微生物（microorganism）是指一些个体微小、结构简单、肉眼看不见只有借助显微镜才能观察到的生物总称。,人类对微生物世界的认识过程,感性认识阶段（史前时期）形态学发展阶段（初创时期）生理学发展阶段（奠基时期）分子生物学发展阶段（成熟时期）,1.感性认识阶段（史前期）,细菌冶金 沤粪肥田 制曲酿酒 提倡轮作 种痘防花 麦曲治泻,2.形态学发展阶段（初创期）,列文虎克发现微生物，为微生物学的发展做出了极大的贡献。,3.生理学发展阶段（奠基期）,本期特点建立了研究微生物所必要的方法和技术 开创了寻找病原微生物的“黄金时期”从形态学推进到生理学成为独立的学科形式,巴斯德,彻底否定了自然发生说证实发酵由微生物引起免疫学预防接种发明巴氏消毒法,代表人物和重要事件,巴氏消毒,巴氏灭菌法，亦称低温消毒法，是一种利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法。现用的巴氏杀菌方法一般有两种：一、加热到6265之间，30分钟；二、加热到7590摄氏度以上，至少保持15秒钟。巴氏消毒法所用温度低，故达不到灭菌的程度。但是它可以使细菌总数减少9095，故能起到减少疾病传播，延长食品的使用时间的作用。,科赫,建立微生物学研究基本技术证实了疾病的病原菌学说提出科赫准则,4.分子生物学发展阶段（成熟期）,J.D.Waston(沃森),H.F.C.Crick(克里克)发现DNA双螺旋模型,微生物分类：三型八类：,原核细胞型微生物细胞核的分化较低，仅有原始核，无核膜、核仁。细胞器很不完善。DNA和RNA同时存在。这类微生物众多，有细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体。,微生物分类：三型八类：,非细胞型微生物是最小的一类微生物。无典型的细胞结构，只能在活细胞内生长繁殖。核酸类型为DNA或RNA。病毒属之。,微生物分类：三型八类：,真核细胞型微生物细胞核分化程度高，有核膜和核仁，细胞器完整。如真菌。,大肠杆菌,放线菌,酵母菌,爱滋病病毒,微生物五大共性,体积小，面积大；吸收多，转化快；生长旺，繁殖快；适应强，易变异；分布广，种类多。,体积小，面积大,微生物大小的单位是m（1m106m）或nm（1m109nm）。物体的表面积和体积之比称为比表面积。把一定体积的物体分割得越小，它们的总表面积就越大。如果把人的比表面积值定为1，则大肠杆菌的比表面积值竟高达30万！,吸收多，转化快,由于微生物的比表面积大，这非常有利于微生物通过体表吸收营养和排泄废物，就使它们的“胃口”十分庞大。如大肠杆菌在合适条件下，每小时可以消耗相当于自身重量2000倍的糖，而人要完成这样一个规模则需要40年之久。,生长旺，繁殖快,微生物以惊人的速度“生儿育女”。,适应强，易变异,微生物对环境条件尤其是恶劣的“极端环境”具有惊人的适应力，这是高等生物所无法比拟的。微生物个体微小，与外界环境的接触面积大，容易受到环境条件的影响而发生性状变化（变异）。,分布广，种类多,微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入,人类生活在微生物的汪洋大海之中，但常常是“深在菌中不知菌”。微生物种类繁多。迄今为止，我们所知道的微生物约有10万种，有人估计目前已知的种只占地球上实际存在的微生物总数的20%，微生物很可能是地球上物种最多的一类。,微生物的“生物界之最”,个体最小 数量最多 分布最广形态最简 变异最易 起源最早胃口最大 抗性最强 发现最晚食谱最广 休眠最长 界级最宽繁殖最快 种类最多,微生物的营养要求,微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。水：水是各种生物细胞必需的。水是良好的溶剂，微生物的新陈代谢过程中的一切生化反应都离不开水的作用。碳源：碳源是合成菌体成分的原料，也是微生物获取能量的主要来源。,氮源：氮源主要是供给合成菌体结构的原料。无机盐类：无机盐主要可为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素。微生物需要的无机盐类很多，主要有P、S、K、Na、Ca、Mg、Fe等，其主要功能为构成菌体成分；调节渗透压；作为某些酶的成分，并能激活酶的活性等。生长因子：有些微生物虽然供给它适合的碳源氮源和无机盐类，仍不能生长，还要供给一定量的所谓“生长因子”。其种类很多，主要是B族维生素的化合物等。生长因子可以从酵母浸出液、血液或血清中获得。,微生物的生长和繁殖,细菌的生长曲线(.延迟期，.对数期，.稳定期，.衰亡期),微生物的生态分布,微生物由于结构简单、繁殖快等特点，因此，它们在地球上分布远比动植物要广泛得多。,土壤：土壤是微生物生活的最适环境，在土壤中分布着形形色色的微生物类群。土壤中细菌占大多数。水：水具有微生物生命活动适宜的温度、PH、氧气等。因此，水中生长着众多的微生物类群，90%的微生物为革兰氏阴性菌，主要有弧菌、假单胞菌、黄杆菌等。空气：空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘。但空气本身缺乏微生物生活所必需的营养物，日光对微生物也具有很强的杀菌作用，另外空气一般是干燥的，因此空气不是微生物生活的良好环境。,正常人体微生物的分布 部位 主 要 微 生 物 的 种 类口腔 白色葡萄球菌、绿色链球菌、类白喉杆菌、梭形杆菌、螺旋体、真菌胃 一般无菌肠 大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、葡萄球菌、粪链球菌、产气荚膜杆菌、破伤风杆菌、真菌、腺病毒等鼻咽腔 葡萄球菌、绿色链球菌、类白喉杆菌、卡答儿球菌、绿浓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、副大肠杆菌、变形杆菌、腺病毒皮肤 葡萄球菌 白色葡萄球菌、类白喉杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、真菌外耳道 葡萄球菌、类白喉杆菌、绿浓杆菌、非病原性抗酸菌,第一章 小结,微生物定义：微生物是指一些个体微小、结构简单、肉眼看不见只有借助显微镜才能观察到的生物总称。人类对微生物认识四个阶段：感性认识阶段、形态学发展阶段、生理学发展阶段、分子生物学发展阶段。微生物分为原核细胞型、真核细胞型和非细胞型微生物。微生物的五大共性是：体积小，面积大；吸收多，转化快；生长旺，繁殖快；适应强，易变异；分布广，种类多。微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。细菌生长的四个时期是：延迟期、对数期、稳定期、衰亡期。,第二章微生物的类群,微生物都有哪些类型？它们有着什么样的结构？每种结构有什么样的作用？,第一节细菌,细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二等分裂方式繁殖的原核微生物，分布广泛。,细菌的特点,一、细菌的形态与结构,观察细菌常用光学显微镜，其大小用测微尺在显微镜下进行测量，以微米(m)为单位。细菌按其外形，主要有,球菌杆菌螺形菌,链球菌,球菌,葡萄球菌,球菌,四联球菌,球菌,八叠球菌,球菌,杆菌,不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。,杆菌的形态多样,分枝杆菌,双歧杆菌,杆菌,螺形菌,细菌的结构,基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核,特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞,细菌的结构,革兰氏染色意义,鉴别细菌 选择药物 与致病性有关革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素，两者的致病作用不同。,细菌荚膜,抗吞噬作用黏附作用抗有害物质的损伤作用抗干燥作用当缺乏营养时，荚膜可被利用作碳源和能源，有的荚膜还可作氮源。,芽孢,某些细菌到一定的发育阶段或当环境条件不适于细菌繁殖时，会在细胞内形成一个圆形或椭圆形的，对不良环境条件具有高度抵抗力的休眠体，叫做芽孢.自然界中抗热性最强的嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢需要在121度下12分钟才能杀死。因此，在日常的消毒灭菌中，均选择芽胞菌作为生物指示剂。辐照灭菌中，选择短小杆菌芽胞；热力灭菌中，选择嗜热脂肪杆菌芽胞；环氧乙烷消毒灭菌，选择枯草杆菌黑色变种芽胞。,蜡状芽孢杆菌芽孢,细菌内毒素,内毒素：细胞壁外层，属于细胞壁的组成部分（脂质A）一般与细胞结合在一起不分泌到环境中，只有当细菌溶解（裂解）后才释放出来，故称内毒素。少量内毒素（0.001g）入血即可引起发热反应。内毒素被吞噬细胞吞饮后，细胞释放出内源性致热原，经血流到达下丘脑，体温调节中枢引起发热。作用特点：没有组织器官的选择性 肌体发热，腹泻，出血性休克或其他组织损伤 不能经甲醛脱毒,热原,热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。特点：耐高温；不具挥发性（重要疏水原理）；易被强酸、强碱破坏；可滤过性；易吸附性；可稀释性（水溶性）。热原通常是磷脂多醇与蛋白质结合而成的复合物。磷脂多醇是复合物的活性中心，致热作用最强。其化学组成因菌种不同而有所差异。分子量为51045105，分子量越大致热作用也越强。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。,细菌的繁殖,二分分裂繁殖,菌落,单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征因种而异。可作为鉴定细菌种的依据。,粘质沙雷氏菌的菌落特征,沙门氏菌的菌落特征,铜绿假单孢菌的菌落特征,弗氏志贺氏菌的菌落特征,第二节放线菌,放线菌的形态、大小和结构在显微镜下，放线菌呈分枝丝状，我们把这些细丝一样的结构叫做菌丝，菌丝直径与细菌相似，小于1微米。根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。,放线菌的菌丝,放线菌的繁殖放线菌主要通过形成无性孢子方式进行无性繁殖，成熟的分生孢子或孢囊孢子散落在适宜环境里发芽形成新的菌丝体；另一种方式是菌丝体的无限伸长和分枝，在液体振荡培养（或工业发酵）中，放线菌每一个脱落的菌丝片段，在适宜条件下都能长成新的菌丝体，也是一种无性繁殖方式。,第三节 霉菌,霉菌的菌丝构成霉菌营养体的基本单位。菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。,霉菌的繁殖,霉菌有着极强的繁殖能力，而且繁殖方式也是多种多样的。虽然霉菌菌丝体上任一片段在适宜条件下都能发展成新个体，但在自然界中，霉菌主要依靠产生形形色色的无性或有性孢子进行繁殖。孢子有点像植物的种子，不过数量特别多，特别小。霉菌的无性孢子直接由生殖菌丝的分化而形成，常见的有节孢子、厚垣孢子、孢囊孢子和分生孢子。,第四节 酵母菌,酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5微米5-30微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。,酵母菌的细胞形态,酵母菌的细胞形态,酵母菌细胞结构的 显微照片,酵母菌的芽殖过程 1泡；2小管；3核；4液泡,酵母菌假菌丝的形成 图中1、2、3、4 是出芽的顺序,酵母菌的无性繁殖,酵母菌子囊孢子的形成过程 1、2、3、4：两个细胞结合；5：接合子；6、7、8、9：核分裂；10、11：核形成孢子,酵母菌的有性繁殖,酵母菌的菌落,大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。,第五节病毒,形态结构病毒的形态基本可归纳为三种：杆状、球状和这两种形态结合的复合型。病毒粒子的主要成分是核酸和蛋白质，在宿主细胞协助下，通过核酸的复制和核酸蛋白装配的形式进行增殖。病毒粒子通常形成螺旋对称、二十面体对称和复合对称。,噬菌体,毒性噬菌体,噬菌体的应用,细菌的鉴定与分类分子生物学研究的重要工具细菌感染的诊断与治疗,第二章 小结,细菌按外形可划分为：球菌、杆菌和螺旋菌。细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。革兰氏阳性菌呈紫色、革兰氏阴性菌呈红色。细菌的基本结构包括：细胞壁、细胞膜、细胞质和核质。特殊结构包括：荚膜、鞭毛、菌毛和芽孢。霉菌的基本单位为菌丝。热力灭菌中选择嗜热脂肪芽孢杆菌作为生物指示剂。,第三章消毒与灭菌,什么叫消毒、灭菌和无菌？消毒和灭菌有哪些方法？这些方法有何特点？,第一节 概 述,消毒：采用物理或化学的方法，清除或杀灭外环境(传播媒介)中的病原微生物或其它有害微生物。对消毒意义的理解，有两点需要注意，其一是不必清除杀灭所有微生物，主要是针对病原微生物；其二消毒是相对的，不是绝对的，只要将微生物减少到无害化的程度。消毒剂：用于杀灭微生物的化学药物。如乙醇、新洁尔灭等。,灭菌：用物理和化学的方法杀灭一切活的微生物(包括病原微生物和非病原微生物，繁殖型或芽胞型微生物)，其概念是绝对的。工业化生产的灭菌，允许将灭菌概率标准规定为10-6，即在100万个试验对象中，可有1个以下的有菌生长，就可认为该批产品是无菌的。灭菌剂：能杀灭一切微生物的药物。如过氧乙酸、甲醛等。,消毒与灭菌是两个不同的概念，消毒处理不一定能达到灭菌的程度，而灭菌则一定能达到消毒之目的。灭菌是最彻底的消毒。,无菌：是指物体或任一介质中没有活的微生物的存在，即无论用何种方法，检不出活的微生物。无菌操作：指在操作中，采用或控制一定条件，尽量避免产品污染微生物的一种操作方法程序。为此目的，所用的一切物品、环境，均应事先灭菌，操作也应在无菌操作室中进行。,第二节物理消毒灭菌法,利用物理因素作用于微生物，将之杀灭或清除，称为物理消毒法。常用的物理法有：机械消毒法、热力消毒法、光消毒法、电消毒法、声消毒法及辐射消毒法。,一、机械消毒法,此方法不是真正的杀灭微生物，而只是达到机械排除。如刷、冲洗、擦拭、吸附、过滤等。过滤除菌是用物理阻留的方法除去微生物。如用砂滤法制备生活饮用水，厂房空气净化设施以及戴口罩等，都是利用过滤除菌的有效方法。目前，滤膜器孔径最小可达0.01m，能制取优质的注射用水可将空气处理到100L中只有1颗0.3m尘粒的超净水平。,二、热力消毒法在所有消毒与灭菌的方法中，热力是一种应用最早，效果最可靠使用最广泛的方法。热杀灭微生物的机理是损伤微生物的细胞壁，细胞膜、破坏微生物的蛋白质(凝固或变性)从而导致其死亡。热力消毒与灭菌的方法分为两类：干热和湿热。,A)干热消毒与灭菌 1灼烧：灼烧是直接用火焰灭菌。如微生物实验室接种针、接种环、涂菌捧等不怕热的金属器材的灭菌。灼烧法来菌温度很高，效果可靠，但对器械有破坏性。2干烤：干烤灭菌是在烤箱中进行。适用于高温下不损坏、不变质物品的灭菌。例如玻璃制品：平板、试管、吸管，注射器等均可用此法灭菌，一般在160-180下，干烤l2h。,(B)湿热消毒与灭菌湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法。影响湿热灭菌的主要因素有：微生物的种类与数量、蒸汽的性质、药品性质和灭菌时间等。,1煮沸法：煮沸法消毒是使用最早的消毒方法之一。由于其方法简单、方便、经济、实用效果好，故今仍是一种常用的消毒方法。2高压蒸汽灭菌,焚烧-最彻底的灭菌方法,烧灼-直接用火焰灭菌方法,干烤-加热160-180 2小时,干热灭菌法,湿热灭菌与干热灭菌的比较,湿热灭菌法,加压蒸汽灭菌法,最有效的灭菌方法 121 2030分钟,煮沸消毒法,水煮100 5分钟(繁殖体)2小时(芽胞),流通蒸汽消毒法,巴氏消毒法,间歇蒸汽灭菌法,水蒸汽100 1530分钟(繁殖体),反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌,较低的温度杀灭致病菌,同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好,原因,1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固,2、湿热的穿透力比干热大,3、湿热的蒸汽有潜热,三、紫外线消毒紫外线可分为长波段、中波段和短波段3组。以短波段2500265.0nm的杀菌力最强。一般多以2537nm作为紫外线杀菌波长的代表。当微生物被照射，此作用可引起细胞内成分，特别是核酸、原浆蛋白与酶的化学变化，从而使之死亡。紫外线穿透力极差，空气中的湿度、尘粒对其均有影响；在液体中，亦随深度增加而降低。不能透过固体物质。,四微波灭菌法微波是指频率在303000MHz之间的电磁波。水可强烈地吸收微波，使其极性分子转动，分子间的磨擦而生热，且升温迅速，靠热力而灭菌。在数十秒至几分钟之内可达100150，并全部杀死液体中的微生物，适于水溶性注射液的灭菌。,五、电消毒法臭氧是以无声放电法产生的。在一对交流电极之间隔以介电体，当空气或氧气通过高压电极(60008000V)时，在具有足够动能的放电电子中，使氧分子电离，一 部分氧分子被聚合为臭氧。臭氧有很强的杀菌力，高效、广谱。有的医用高分予器材厂采用臭氧发生器进行了净化车间的空气消毒，效果甚为满意。,六、辐射消毒法辐射消毒法是采用放射性同位素放射的射线杀灭微生物和芽孢的方法。优点：(1)消毒效果可靠；(2)不引起温度升高，是一种“冷处理”灭菌；(3)节约能源；(4)不破坏包装，可长期保存；(5)穿透力强，适用于封装灭菌；(6)无残留毒性；(7)处理过程干燥，无消毒剂的沾污；(8)可连续灭菌；(9)无环境污染。缺点：(1)一次性投资大；(2)必须有经过专门训练的技术人员管理。,第三节 化学消毒灭菌法,一、气体灭菌法此法系指用化学试剂的气体或蒸汽对物品进行的灭菌。常用者为环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸、丙二醇、乳酸、戊二醛等。,（一）、环氧乙烷在室温、常压下是无色气体，具醚样臭，可闻出的气味阈值为700ppm，沸点为108，当温度低于10.8时，气体液化呈无色透明液体，能溶于水。环氧乙烷具较强的扩散和穿透能力，作用快，对细菌芽胞、真菌和病毒等各种微生物均有杀灭作用，属于广谱灭菌剂。,环氧乙烷属烷化剂，它能与微生物的蛋白质、DNA等发生非特异性的烷基化作用，对菌体细菌的代谢产生不可逆性破坏。注意事项环氧乙烷具可燃可爆性。环氧乙烷对塑料、橡胶、纸板等穿透力强，亲和力也强。故灭菌完毕后需通空气或采用排除毒性气体装置，将被某些材料吸收的环氧乙烷降到最低浓度。,（二）、甲醛熏蒸甲醛熏蒸消毒是利用其与高锰酸钾发生氧化还原反应过程中产生的大量热,使甲醛受热挥发,经一定时间后杀死病原微生物。此法是目前对消毒常用的方法之一,具有全面彻底、省时、省力和消毒效果好等特点。,甲醛常用于接种室、培养室、接种箱熏蒸灭菌，用量为每立方米10毫升。用法是按接种室体积计算甲醛用量放入特定容器中，再按甲醛毫升数的一半数称取高锰酸钾所需克数放入玻璃或铁制容器中，将接种室窗户封闭严后，将甲醛倒入高锰酸钾容器内，立即退出，封闭房门，312小时后方可使用。,甲醛的危害：具有对人体危害性和环境污染性。甲醛既是致癌物又是促癌物。甲醛的生殖毒性会引起女性的月经机能的严重危害。长期在空气中含甲醛的工作环境中，人群普遍患有嗅觉下降、慢性咽喉类、记忆力减退等症状。,二、表面消毒选择的消毒剂必须是抗菌谱广的或有针对性的。理想的化学消毒剂应具备的性质：使用情况下的高效；有效浓度低；作用速度快；性质稳定；无腐蚀性，低毒；无残留毒性；使用无危险性；易溶于水；可在低温下使用；不易受外界理化因素影响；无色、无味、无臭；价廉。,常用消毒剂的种类和用途,影响消毒剂作用的因素,消毒剂,细菌,环境,种类,浓度,作用时间,菌龄,种类,有机物,温度,酸碱度,选择适当的消毒剂,第三章 小结,消毒与灭菌的区别：消毒处理不一定能达到灭菌的程度，而灭菌则一定能达到消毒之目的。灭菌是最彻底的消毒。干热消毒的方法有：灼烧、干烤；湿热消毒方法有：煮沸法和高压蒸汽法。选择消毒剂应注意哪些方面：有效、低破坏、低毒、方便、价廉和易贮藏。,第四章微生物污染与控制,微生物是通过哪些途径污染药品的？药品生产人员应该注意哪些事项呢？,微生物污染,微生物污染是指因微生物产生、附着而给特定的环境带来的不良影响。如果细菌得到了必要的养料、一定量的水份和合适的温度，它们就能迅速繁殖，它们繁殖的速度快得惊人。通常一个细菌在仅仅24小时后可产生出281兆(百万)个的细菌。,微生物污染导致药物变质的因素 药品的生产、储存、使用的全过程，都有因微生物污染而导致药物变质的因素。而药物变质，一般需要很高的微生物污染程度。也就是说，微生物面广、量大的繁殖才出现显著的易被觉察的损坏现象。,防止微生物污染的原则,1.了解污染源2.进行微生物监测,微生物控制的意义,防止疾病的发生、发展和传播防止微生物污染防止微生物引起的原材料变质和腐败,传播污染的五大媒介,空气水表面人物料,传播污染的五大媒介空气,空气：空气并不是产生污染的介质，但它是污染的危险携带者。空气中存在的尘埃微粒是含有微生物(细菌等)的。因此，空气是侵袭我们产品的污染物的主要媒介。所以尽量保持空气洁净是极为重要的。,在药品生产中，减少空气中微生物数量的方法有多种，常用的有以下3种方法：空气洁净技术采用的过滤方法 过滤是最常用的方法。过滤介质种类很多，例如：纤维素、玻璃棉或人造纤维等。空气净化装置可用于整个房间如无菌操作室，也可只限于操作区域局部如超净工作台。化学消毒方法 采用消毒剂作用于室内空气和物体表面。紫外线照射方法 采用紫外线对室内空气进行照射。,传播污染的五大媒介水,在生产过程中，水是应用最广泛的原料之一。常用的对水消毒的方法：化学消毒剂方法 膜过滤法 适用于水系统的连续循环处理。紫外线照射法,传播污染的五大媒介表面,表面包括：天花板、墙壁、地面、设备、容器、工具或桌子；一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。,制药企业生产车间的厂房，库房及实验室都必须清洁整齐。建筑物表面不透水，光滑平整、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落，并能耐受清洗和消毒。设备、管道应易于拆卸、结构简单，便于清洁消毒。特别是药品生产过程中使用的容器，包括内包装容器，都应进行清洗和消毒。,人体不同部位所带细菌数量,传播污染的五大媒介人,人员的发菌量,洁净室内当工作人员穿无菌服时，静止时的发菌量为10300个/(min人)，躯体一般活动时的发菌量为1501000个(min人)，快步行走时的发菌量为9002500个(min人)；穿平常衣服时发菌量为330062000个(min人)；有口罩发菌量：无口罩发菌量为(1:7)(1:14)；咳嗽一次的发菌量为70700个，喷嚏一次的发菌量为400060000个。,人员污染的途径和方式,人的头发和皮肤水滴衣着化妆品和珠宝手饰生产过程中人们所引起的混杂和误差,传播污染的五大媒介物料,原辅料可能将大量的微生物带入到药物制剂中。因此，选用符合标准的原辅料，将有利于控制药品和环境的污染水平。原辅料在储藏过程中必须注意环境条件。包装材料，特别是内包装材料，一方面包装药品，另一方面防止外界微生物进入药中。若处理不当，在药品储藏和运输过程中，极易引起污染，造成严重后果。总之，包装材料应考虑不同需要加以清洁或消毒处理进行合理封装。,药品生产人员卫生注意事项,新进人员的健康检查建立生产人员健康档案培养药品生产人员良好的个人卫生习惯,如何培养良好的个人卫生习惯,勤洗手、勤剪指甲 定期洗澡、勤理发 勤换衣服、勤洗工作服 在生产区内做到三个严禁：禁止吃东西、禁止吸烟、禁止大声喧哗,洁净区生产人员要求,一、人员卫生净化要求1.鞋的净化：可使用一种地垫，它具有粘性表面，能杀灭细菌并经抗静电剂的处理，可除去人员脚上的尘粒。2.工作服的净化：工作服的使用，可沉积吸附大量微生物和不清洁物，衣服本身也会散发纤维屑，故应经常清洁、灭菌。3.手的净化：手是交叉污染的媒介，要教育生产人员警惕对产品的污染。用消毒皂和流水洗。,4.头罩：头罩必须把全部毛发遮住。5.口罩：常用的口罩由46层纱布制成。带口罩一定要遮住口、鼻；不能带潮湿的口罩；使用不能超过4h；不可正反两面使用。,二、操作要求洁净区工作人员要尽可能少而精，只有工作需要时才能进入；操作人员在洁净区动作尽量要缓慢，避免剧烈运动，以减少人的发尘量；洁净区的门应关紧，避免不必要的移动，以保持洁净区的风速、风量、风型和风压；如果是无菌区的话，操作人员的自我约束就更多，要严格按无菌操作规程执行。,日常工作注意事项,生产前开启紫外灯灭菌；生产结束后岗位人员的工作：彻底清洁生产现场和设备表面；生产结束后灭菌人员的工作：用消毒剂擦拭顶（包括高效送风口）、墙壁、地面等，并开启紫外灯；定期进行消毒；,无菌制剂中的微生物控制,产品无菌保证灭菌前微生物污染原料设备和生产过程生产环境生产时限灭菌工艺灭菌设备灭菌工艺验证包装密封性,原辅料和内包材的微生物控制,潜在风险：微生物质量缺陷后果：导致灭菌前微生物负荷失控产生风险原因：供应商质量保证不完善生产用水系统设计或管理不完善管理措施供应商均按SOP规定经过严格筛选制订原辅料微生物限度标准,并进行入库检验 控制仓储条件,保证适宜的储存环境 对于内包装材料,应有牢固的运输包装,防止淋湿和昆虫污染 注射用水65-80以上高速循环 按照SOP对总回水口每日取样,对其它使用点每周循环检验微生物和内毒素 风险水平:年度质量回顾证明质量稳定,可以接受。,灭菌前各工序微生物污染控制,潜在风险:灭菌前微生物失控后果:超出已验证的灭菌工艺的范围,导致灭菌不彻底原因:设备清洁、消毒不当包装容器清洗不当生产环境和操作人员引入关键设备偏差残留微生物在适宜的条件下繁殖管理措施(监控)制定灭菌前微生物负荷的警戒、行动限度取样SOP保证灭菌前微生物含量样品的代表性,一般按照灌装时间顺序分前、中、后取样,样品应反映最差情况年度质量回顾可反映整体状况,管理措施(设备清洁)应制订清洁和消毒SOP,规定不同生产情况下的设备清洗和灭菌周期和有效期设备及管路系统应配制CIP和SIP装置设备与管路清洗清洗SOP应规定关键参数:水温,清洁剂浓度,流速,时间,阀门的开闭,蒸汽温度,压力等清洁和灭菌SOP需经过验证,管理措施(消除生产环境和人员造成的污染)生产区域洁净等级根据风险控制要求,符合相关GMP规范要求备料和配液为C级灌装为C级背景下的局部A级压盖为C级A级下连续微粒监测,C级区每周监测HVAC系统风量和压差应该恒定高效过滤系统每年2次DOP测试洁净生产区域(配制与灌装)应规定进入人员数量限定,最大限度减少人员接触物料的机会,管理措施(工艺和关键设备偏差)制订各个生产工艺步骤的时限选用国际著名厂商的药液过滤器,使用前后完整性测试,使用周期经过验证。发生偏差后增补灭菌前微生物负荷样品。SOP明确规定了发生诸如停电、通风系统故障、环境卫生状况超标等偏差后应采取的相应措施。洗瓶设备经清洗效果和微生物残留验证微生物残留验证。设置了洗瓶水过滤器压差和水压低限保护传感器。风险评估对每年数千个灭菌前微生物检查结果的回顾性评价,可以证明风险得到了有效的控制。生产环境动态监控数据回顾性评价证明洁净环境状况良好。关键生产设备得到良好维护,极少发生偏差。灭菌前各工序风险可以接受。,灭菌工序的风险评估,潜在风险灭菌不完全或过度灭菌二次污染已灭菌产品和未灭菌产品混淆 后果:达不到无菌保证的要求原因记录仪表故障,关键灭菌参数数据失真 热交换器泄漏,导致热传递介质染菌管理不当管理措施启动灭菌程序之前,操作人员必须确认灭菌设备、灭菌工艺、测温探头均在验证或校验的有效期内。灭菌全过程处在自动控制系统统和监测显示系统两套相互独立的监控系统以及操作人员的监督之下。每天对冷却用的注射用水取样检查微生物水平。每季度对热交换器进行泄漏检测。,管理措施(防止混淆)整个灭菌工序所在区域与外界上锁隔离采用能防止未灭菌产品非法离开灭菌车的装置。待灭菌区与已灭菌区之间上锁隔离。在每个灭菌产品装载车上放置灭菌指示胶带。灭菌结束后的产品必须须在已灭菌区卸载,并计数。封签的解封由双人负责。严格的物料平衡。采用自动化灭菌车装载与卸载设备,最大限度地避免人员操作带来的风险。风险评估从未发生已灭菌产品与未灭菌产品的混淆事件。从未出现灭菌过程的F0值低于内控限度。灭菌冷却水的微生物检测和热交换器的泄漏试验结果表明,没有发生热交换器的泄漏事件。风险水平评级:可以接受。,生产过程微生物学质量监控的风险评估,潜在风险：样品缺乏代表性；检测结果不科学后果：造成生产过程的微生物学质量处于受控状态的假象。产品无菌质量不合格,但被错误地判为合格产品而放行上市。原因检测方法不科学取样方案不科学,使得样品不具有代表性管理措施在每批产品灌封的开始、中间、结束均取样,进行灭菌前含菌量的检测和污染菌的耐热试验所有原辅料的含菌量检验方法、产品灭菌前的含菌量检测方法及污染菌的耐热试验方法均经过科学的验证风险评估检验方法均经过验证,取样方案可确保样品的代表性。风险水平评级:可以接受,产品密封系统的风险评估,潜在风险产品的包装密封存在缺陷,无法确保产品在有效期内的密封完好性后果:产品无菌得不到保证原因:包装密封材料。密封方法设计不合理。管理措施胶塞、玻璃瓶和铝盖供应商经过定期审计抽样监测轧盖后的铝盖钮力矩,应符合标准。在密封系统的部件发生变更时,必须评估其对密封系统完好性的影响,必要时重新进行密封完好性验证。密封系统的密封完好性经过验证:符合美国针剂协会(PDA)和美国USP有关专论的要求风险评估:可以接受,第四章 小结,微生物污染的五大途径：空气、水、表面、人、物料。洁净区工作人员要尽可能少而精，只有工作需要时才能进入,