维生素类药物的分析.ppt

第八章,维生素类药物的分析,维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。人体不能合成维生素。,第一节 概述,VitA、D2、D3、E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺,VitM,VitPP,-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯,R:,第二节 维生素A,为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯,（一）,具有UV吸收,存在多种立体异构化合物,维生素A 325.5 100%新维生素Aa 328 75%新维生素Ab 320.5 24%新维生素Ac 310.5 15%异维生素Aa 323 21%异维生素Ab 324 24%,相对生物效价,VitA2,VitA3,易发生脱氢、脱水、聚合反应,鲸醇,或有金属离子存在时氧化,环氧化物,VitA醛,VitA酸,CHCl3,不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等,条件 无水无醇,CHCl3,蓝色,紫红,（BP（1998）,max为326nm一个吸收峰,max为350390nm三个吸收峰,去水VitA（VitA3）,VitA,USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑,立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A（VitA2）去水维生素A（VitA3）,UV法,（一）,三点校正法1.条件：（1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。,2.波长的选择：（1）1 VitA的max（328nm）（2）2 3 分别在1的两侧各选一点,测定对象 VitA醋酸酯,第一法 等波长差法,第二法 等吸收度法(皂化法),测定对象 VitA醇,测定法（1）基本步骤:第一步 A选择选择依据：所选A值中杂质的干扰已基本消除,注意：C 为混合样品的浓度,第二步 求,第三步 求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,方法：,（2）,第一法,维生素A醋酸酯,判断 是否在326329nm之间,在326329nm之间,改用第二法,是,否,求算 并与规定值比较,规定值 差值,判断差值是否超过规定值的,有一个以上超过,无超过,计算 A328（校正）,用A328计算,第二法,第二法,VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为,A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216,A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299,求本品中维生素A的含量？,A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+0.010.01 0+0.02+0.04,=,适用于维生素A醇,（等吸收度法）,第一法无法消除杂质干扰时用此法,皂化法、6/7A法,（3）第二法,水溶性,脂溶性,判断max是否在323327nm之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,判断 A300/A325 是否大于0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算A325(校正),0,3%,3%,三氯化锑比色法,（二）,优点 简便 快速,max 618nm620nm,标准曲线法,苯并二氢吡喃醇,第三节 维生素E,*,*,*,生物效价 右旋体：消旋体=1.4：10,（天然品）,（合成品）,dl生育酚醋酸酯,一、结构与性质,苯环+二氢吡喃环+饱和烃链,1、易溶于有机溶剂，不溶于水,2、UV,3、酯键 易水解,（一）,硝酸反应,二、鉴别,取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75加热15分钟，溶液应显橙红色。,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO3,强氧化剂,（二）三氯化铁联吡啶反应,生育酚,对-生育醌,弱氧化剂,红色,=41.045.5,max=284nm,min=254nm,0.01%无水乙醇中,（三）UV法,维生素EUV图,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷-乙醚（4：1）,显色剂 硫酸（105 5）,VitE Rf=0.7,（四）TLC法,游离生育酚,硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄灰紫）,利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈,三、检查,（一）原理,（二）试剂,（M生育酚=430.8）,例,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。(2010年版药典规定，天然型检查此项，合成型是以有关物质项来采用HPLC法）,2.15,（三）限量,药典规定,消耗硫酸铈液（0.01mol/L）1.0ml,设：应消耗硫酸铈液 V ml,0.011.0 实际浓度 V,若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量,例 Ce(SO4)2=0.01020mol/L,四、含量测定,GC法,（一）,GC特点,1、,选择性好灵敏度高速度快分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,载气N2固定液硅酮（OV-17）担体硅藻土或高分子多孔小球柱温265检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标正三十二烷 n 500（填充柱）或5000（毛细管柱）R2,内标法加校正因子,内标法,供试液（样品+内标）,内标物,对照液（对照+内标）,校正因子：,实际工作中的计算方法,例,内标液 取正三十二烷加正己烷溶解 并稀释成1.0mg/ml溶液,对照液 精密称取VitE对照品0.2011g 置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内 标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 13ul注入GC仪，测定，计算,供试液 精密称取供试品0.1998g置棕 色具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取13ul 注入GC仪，测定，计算,对照液,供试液,本品含C31H52O3应为96.0 102.0%,BP GC 内标 正三十二烷 R1.4,USP GC 内标 十六酸十六醇酯 R1.0,JP HPLC 外标 dl生育酚 R1.4,利用生育酚的易氧化性,还原型,氧化型,二苯胺（亮黄灰紫）,（二）铈量法,防止Ce(SO4)2的水解减慢生育酚被O2氧化速度,C、酸性条件,Ce(SO4)2易溶于水生育酚易溶于醇,B、溶剂,分子量较大，反应慢 易被O2氧化,A、反应速度,MVitE=472,样品 dl生育酚固定相十八烷基硅烷键合硅胶流动相甲醇-水（49：1）检测波长292nm R2.6 RSD0.8%,测定对象血清中VitA和VitE固定相十八烷基硅烷键合硅胶流动相甲醇-水（96：4）检测波长 8前330nm 8后292nm,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),HCl,Cl-,第四节 维生素B1,（一）溶解性,1、易溶于水2、水溶液呈酸性,（二）UV,共轭双键,max=246nm,一、结构与性质,（三）硫色素反应,嘧啶环 伯氨,噻唑环 季铵,1、可与酸成盐,2、与生物碱,3、含量测定 非水碱量法,（四）,碱性,ChP 2010,二、鉴别试验,（一）硫色素反应,鉴别（1）取本品约5 mg,加氢氧化钠试液2.5 ml溶解后，加铁氰化钾试液0.5 ml与正丁醇5 ml，强力振摇2分钟，放置使分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光；加酸使成酸性，荧光即消失；再加碱使成碱性，荧光有显出。,硫色素,2H,VitB1,（二）沉淀反应,S元素反应,Cl-反应,（三）其他反应,三、含量测定,（一）非水溶液滴定法(ChP 2010),【含量测定】取本品约0.12g，精密称定，加冰醋酸20ml微热使溶解，放冷至室温，加醋酐30ml，照电位滴定法（附录 A），用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于16.86mg的 C12H17ClN4OSHCl。,维生素B1的含量测定,（二）UV法,维生素B1片的含量测定,=421,（每片）相当于标示量的%=,A=ECL,g/100ml,ChP 2010 片剂、注射剂,（每ml）相当于标示量的%=,规格g/ml,ml,准确度高灵敏度低操作繁琐设备简单,（三）硅钨酸重量法,2337.27,3479.22,取本品约50mg，精密称定，加水50ml溶解后，加盐酸2ml，煮沸，立即滴加硅钨酸试液4ml，继续煮沸2分钟，用80恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（120）20ml分次洗涤，再用水10ml洗涤1次，最后用丙酮洗涤2次，每次5ml，在80干燥至恒重，精密称定，所得重量与0.1939相乘，即得,例,精密称取本品0.0519g，加水50 ml溶解，加盐酸2ml煮沸，立即滴加硅钨酸试液4 ml，继续煮沸2分钟，用80恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（120）20 ml 分次洗涤，再用水10ml 洗涤1次，后用丙酮洗涤2次，每次5ml。在80干燥至恒重，称得沉淀重量为0.2557g。求本品的含量按干燥品计算为多少？(本品干燥失重项下测定结果为3.73%),A.取样量50mg 提高灵敏度,B.80 保持4个H2O,C.HCl 增大沉淀颗粒,D.硅钨酸：VitB1=8：1 使沉淀完全,E.硅钨酸边搅拌边缓慢加入 增大沉淀颗粒,NaOH,（四）硫色素荧光法,激发波长365nm发射波长435nm,+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇,+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇,S,d,A,b,对照液,供试液,（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析,L抗坏血酸,第五节 维生素C,二烯醇结构,二酮基结构,二烯醇结构,有活性,有活性,无活性,糖类的显色反应,结构与糖类相似,50,C3OH的pKa=4.17,C2OH的pKa=11.57,一元酸,L(+)抗坏血酸活性最强,手性C（C4、C5）,*,*,与碱反应,（七）UV特征,1、与AgNO3反应,2、与2，6-二氯靛酚反应,(ChP2010),氧化型,玫瑰红色,(ChP2010),（玫瑰色）,（无色）,3、与碱性酒石酸铜反应,ChP2010(维生素C钠鉴别）,4、与KMnO4反应,USP,BP,0.01mol/L HCl,指示剂 淀粉指示液,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,（1）酸性环境 d.HCl,（2）新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,赶走水中O2,减少O2的干扰,（4）附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,USP,JP,（2）快速滴定 2min内,（1）酸性环境 HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多 氧化力较强,1、HPLC的优点,灵敏度高,选择性高,分离分析同步,微量分析,干扰少,快速,2、HPLC法分离VitC常用方法及测 定对象,对象 制剂、生物样品、果汁,方法 离子交换色谱法 离子对色谱法 分配色谱法（正、反相）,血、尿、组织、细胞等,例,多种维生素片中VitA、VitB1、VitB2、VitB6、烟酰胺、VitC、VitE的含量测定,色谱柱 ODS流动相 A、水-甲醇（4：1）B、甲醇（梯度洗脱）抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠,水溶性维生素 离子对色谱法（樟脑磺酸）内标法+校正因子 内标物苯酚,脂溶性维生素 外标法,例1在三氯醋酸或盐酸存在下，经 水解、脱羧、失水后，加入吡 咯即产生蓝色产物的药物应是 A.氯氮卓 B.维生素A C.普鲁卡因 D.盐酸吗啡 E.维生素C,例2中国药典（2010年版）采用以下何法测定维生素E含量 A.酸碱滴定法 B.氧化还原法 C.紫外分光光度法 D.气相色谱法 E.非水滴定法,例3中国药典（2005年版）采用气相色谱法测定维生素E含量，内标物质为 A.正二十二烷 B.正二十六烷 C.正三十烷 D.正三十二烷 E.正三十六烷,例4.下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是 A.维生素A B.维生素B1 C.维生素C D.维生素D E.维生素E,例5既具有酸性又具有还原性的药物是 A.维生素A B.咖啡因 C.苯巴比妥 D.氯丙嗪 E.维生素C,例6.维生素C的鉴别反应，常采用的试剂有 A.碱性酒石酸铜 B.硝酸银 C.碘化铋钾 D.乙酰丙酮 E.三氯醋酸和吡咯,例7.测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了 A.保持维生素C的稳定 B.增加维生素C的溶解度 C.使反应完全 D.加快反应速度 E.消除注射液中抗氧剂的干扰,例8.能发生硫色素特征反应的药物是 A.维生素A B.维生素B1 C.维生素C D.维生素E E.烟酸,例9使用碘量法测定维生素C的含量,已知维生素C的分子量为176.13，每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于维生素C的量为 A.17.61mg B.8.806mg C.176.1mg D.88.06mg E.1.761mg,例10.可发生以下反应或现象的药物为 A.维生素B1 B.维生素C C.两者均能 D.两者均不能1.与碘化汞钾生成黄色沉淀 2.麦芽酚反应 3.在乙醚中不溶 4.与2,6-二氯靛酚反应使颜色消失 5.硫色素反应,A,D,C,B,A,例11维生素A的鉴别试验为 A.三氯化铁反应 B.硫酸锑反应 C.2,6-二氯靛酚反应 D.三氯化锑反应 E.间二硝基苯的碱性乙醇液反应,例12中国药典（2000年版）规定维生素A的测定采用紫外分光光度法（三点校正法），此法又分为 A等波长差法 B等吸收度法 C6/7 A法 D差示分光法 E双波长法,例13维生素E的鉴别试验有 A硫色素反应 B硝酸氧化呈色反应 C硫酸-乙醇呈色反应 D碱性水解后加三氯化铁乙醇液与 2,2-联吡啶乙醇液呈色反应 EMarquis反应,例14.下面哪些描述适用于维生素A A.分子具有长二烯醇侧链，易被氧化 B.具有较长的全反式共轭多烯结构 C.含酯键，经水解后产生苯并二氢吡喃衍 生物，易被氧化 D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰色，很快转变为紫红色 E.样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加热后，呈橙红色,维生素A与 反应即显蓝色，渐变成紫红色；反应需在 条件下进行。（）维生素A分子中由于具有共轭多烯侧链，因而其性质很稳定，不易被氧化变质。,三氯化锑,无水,维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。,生育酚,维生素B1 的噻唑环在 介质中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合环合，然后经 等氧化剂氧化生成具有荧光的，加 荧光消失，加 荧光又显出；此反应称为 反应。,碱性,铁氰化钾,硫色素,酸,碱,硫色素,维生素C是 元弱酸，具有强 性，易被氧化剂氧化，常用作其它制剂的 剂。,一,还原,抗氧,维生素E中游离生育酚的检查时规定消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）不得过1.0ml，现硫酸铈滴定液的实际浓度为0.01053mol/L，应不得超过多少ml？A.0.95 B.0.97 C.0.99 D.0.92 E.1.05,维生素C的含量测定(ChP 2010)取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。已知：取样量为0.2084g，消耗碘滴定液（0.09981mol/L）22.75ml。,要求：（1）解释划线部分（2）计算本品的含量是否符合规定（规定本品含C6H8O6应不低于99.0%）,VitB1片UV法含量测定 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于VitB1 25mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液(91000)约70ml，振摇15分钟，加盐酸溶液(91000)稀释至刻度。用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5.0ml，置另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液(91000)稀释至刻度，摇匀，在246nm处测定吸收度，按C12H17ClN4OSHCl的吸收系数（）为421计算，即得。,已知 20片重=1.4070g A246=0.461 取样量=0.1551g 规格=10mg/片求 本品含量是否符合药典规定？（应相当于标示量的90.0110.0%),