血清肌酸激酶(CK) DGKC推荐方法测定 血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定方法.docx
1.实验原理德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法。ADP+磷酸肌酸CK肌酸+ATPATP+葡萄糖糖微聘(HK)ADP+葡萄糖-6-磷酸(G6PQH)葡萄糖-6-磷酸+NADP'6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+HNADPH在34Onm处有特异吸收，通过测定NADPH生成速率计算出CK活性。2.标本：2.1病人准备：无特殊要求。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3.标本存放：稳定性：28保存稳定7天；1525保存稳定1天；-20C保存稳定4周(避光保存M3天内的活性损失：28e保存24小时或1822C保存1小时至少损失10%o4.标本运输：常温条件下保存运输。5.标本拒收标准：细菌污染的标本。6.实验材料6.1试剂利德曼CK测定试剂盒(试剂16×64ml试剂26X16ml)6.1.1试剂组成:试剂1(Rl)+试剂2(R2)：咪嗖缓冲液pH6.7100mmolL磷酸肌酸30mmolL葡萄糖20mnolLN-乙酰半胱氨酸(NAC)20mmolLEDTA-Na22mmolLADP2mmolLNADP2mmo1/L二腺昔-5'-磷酸10mol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6P-DH)>1500UL已糖激酶(HK)>2500UL6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28C,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂己变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7.仪器：奥林巴斯AUlOOO生化分析仪8.操作步骤8.1项目基本参数：参见AUIOoo生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU100O生化分析仪操作规程.SOP文件9.检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：以TrUCalU复合校准品CK校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行CK活力检测，可以直接使用A/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算CK活力的计算因子见下表：AA/minX因子=CK活力U/L计算因子(37'C)：340nm41274207334nm365nm472912.参考值范围L(U/L)成人：女性24-167男性24190参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义"、%肌酸激酶(CK)主要由存在于肌肉中的同工酶(CK-M)和存在于脑中的同工酶(CK-B)组成。在血清中CK形式为CK-MM,CK-MB,CK-BB和巨醯等的二聚物。在心肌损伤或骨骼肌疾病时可以观测到CK活力的升高。CK和CK-MB一起检测有助于心肌梗死的诊断和监视。14.操作性能14.1线性范围<1200U/L14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AUlOOO批内精密度小于3N,总精密度小于3M用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(U/L)S(U/L)CV(%)批间精密度n=20X(U/L)S(U/L)CV(%)样品11593.182.00样品149.51.052.12样品22201.540.70样品2157L63LO4样品35083.690.73样品32282.311.0114.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对71个样品进行CK活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.98x+0.02(U/L)；r=1.000°14.5病人结果可报告范围：5-120OU/L。16.病危报警值的处理：无。17.方法局限性17.1本法对CK活力的线性上限为1200U/L,当测定值超过上限时，应将样品用9gL氯化钠溶液作1+10稀释，重新测定，结果乘以17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704molL,胆红素浓度684molL,血红蛋白2.00gL,甘油三酯浓度22.6mmolL时没有观察到干扰。18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献1.SteinW.Creatinekinase(totalactivity),creatinekinaseisoenzymesandvariants.In:ThomasLed.Clinicallaboratorydiagnostics.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.71-80.2.MossDW,HendersonAR.Clinicalenzymology.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.PhiIadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.P.617-72L3.RecommendationsoftheGermanSocietyforClinicalChemistry.Standardizationofmethodsfortheestimationofenzymeactivitiesinbiologicalfluids:Standardmethodforthedeterminationofcreatinekinaseactivity.JClinChemClinBiochem1977;15:255-60.4.LorentzK,RohleG,SiekmannL.Introductionofnewstandardmethods1994forthedeterminationofcatalyticenzymeconcentrationsat37.DGKlinischeChemieMitteilungen1995;26:290-3.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定1.实验原理使用多克隆抗体抑制CK的CK-M同工酶活性后，按照德国临床化学学会（DGKC）和国际临床化学学会（IFCC）推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶活力。CK-MB由CK-M和CK-B亚单位组成。抗CK-M抗体完全抑制了CK-MM（肌酸激酶的主要活性部分）和CK-MB中的CK-M亚单位的活性。再检测CK的活力为余下的CK-B的活力，相当于一半CK-MB活力。所以将结果乘以2,为CK-MB的活力。ADP+磷酸肌酸CK肌酸+ATPATP+葡萄糖%1（hk）ADP+葡萄糖-6-磷酸葡葛糖-6-磷酸+NADP'（g6p-dh）6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H-2.标本:2.1病人准备：无特殊。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3.标本存放：稳定性：-20C保存稳定4周（避光保存*活性损失：28C保存24小时或1822保存1小时至少损失10%o4.标本运输：常温条件下保存运输。5.标本拒收标准：细菌污染的标本。6.实验材料6.1试剂利德曼CK测定试剂盒（X16ml）6.1.1试剂组成试剂I（R1）+试剂2（R2）：咪哇缓冲液pH6.磷酸肌酸葡萄糖N-乙酰半胱氨酸（NAC）试剂16×64ml试剂2671OOmniolZL30mmolL20mmolL20mnolL10mmolL2mmolL2mmolL2mmolL5mmolL10 u mol/L1500UL2500ULM2000UL乙酸镁EDTA-Na2ADPNADPAMP二腺昔-5'-磷酸6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH）己糖激酶（HK）抑制人CK-MM的人抗体6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28C,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7.仪器：奥林巴斯AinoOO生化分析仪8.操作步骤8.1项目基本参数：参见AUloOO生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AUlOOO生化分析仪操作规程.SOP文件9.检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控）做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：使用A/min均值乘以计算因子得到CK-MB活力。计算因子见下表：AA/minX因子=CK活力U/L计算因子(37)：340nm8254334nm841412.参考值范围：0-24U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义口编肌酸激酶主要由存在于肌肉中的同工酶(CK-M)和存在于脑中的同工酶(CK-B)组成。在血清中CK形式为CK-MM,CK-MB,CK-BB和巨酶等的二聚物。在检测心肌损伤时CK-MB特异性很高。因此，CK-MB常用于心肌梗死的诊断和监视。14.操作性能14.1线性范围<1OOOUL14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AUlOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3M用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(U/L)S(U/L).CV(%)批间精密度n=20X(U/L)S(U/L)CV(%)样品130.70.431.40样品131.50.270.85样品282.60.50OUq1样品293.30.49S53样品31941.000.52样品31871.060.5714.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对75个样品进行CK-MB活力检测，将检测结果作方法学比较,其统计结果如下：y=0.97x+3.78(U/L)；r=0.998°14.4灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。14.5病人结果可报告范围：2-1000U/L15.超出范围结果处理：本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L,当测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液稀释，重新测定。16.病危报警值的处理：无。17.方法局限性17.1本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L,当测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液稀释，重新测定。17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704molL,胆红素浓度684molL,血红蛋白2.00gL,甘油三酯浓度22.6mmolL时没有观察到干扰。18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献1.SteinW.Creatinekinase(totalactivity),creatinekinaseisoenzymesandvariants.In:ThomasLed.Clinicallaboratorydiagnostics.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.71-80.2.MossDW,HendersonAR.Clinicalenzymology.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3'ed.PhiIadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.P.617-721.3.WurzburgU,HennrichN,OrthHD,LangH.Quantitativedeterminationofcreatinekinaseisoenzymecatalyticconcentrationinserumusingimmunologicalmethods.JClinChemClinBiochcm1977;15:131-7.4.RecommendationsoftheGermanSocietyforClinicalChemistry.Standardizationofmethodsfortheestimationofenzymeactivitiesinbiologicalfluids:Standardmethodforthedeterminationofcreatinekinaseactivity.JClinChemClinBiochem1977;15:255-60.20其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。
