流式细胞术在白血病和淋巴瘤中的应用.ppt
流式细胞术在白血病、淋巴瘤免疫分型中的应用,免疫分型的作用,区分淋系、髓系白血病区分淋系白血病中的T、B-ALL鉴定混合细胞性白血病的类型：T-M、B-M、T-B、T-B-M于治疗过程中监测MRD，评价疗效提示某些遗传学异常：CD56+APL-t（11；17）？CD19+AML-t（8；21）（q22；q21）？提示预后：CD7、CD11b、CD56等阳性的AML患者预后不良CD15阳性的AML患者CR率高,免疫分型的原理,正常造血细胞 白血病细胞 抗原表达遵循系列保守性 出现抗原跨系表达髓系:CD33+,T系:CD7+髓系:CD33+CD7+抗原表达有一定的时序性 出现抗原时序混乱表达原始细胞:CD34+CD11B-原始细胞:CD34+CD11B+各阶段细胞按一定的比例分布 出现分化阻滞原幼细胞20%,免疫分型需要掌握什么理论知识？,正常造血细胞的抗原表达规律不同系列的细胞表达的抗原？同一系列不同阶段的细胞表达的抗原？每种抗原的表达强度？,正常B系细胞分化图,源于王建中等编著的临床流式细胞分析,正常T系细胞分化图,源于王建中等编著的临床流式细胞分析,正常粒细胞分化图,源于王建中等编著的临床流式细胞分析,正常单核细胞分化图,源于王建中等编著的临床流式细胞分析,免疫分型中的重要抗原CD45,正常成人骨髓标本,成熟粒细胞：约占40-60%，表达CD11b、CD13、CD33、CD15、CD16、CD10、CD64,不表达CD34、HLA-DR、CD14、CD117,有核红细胞：50%,表达GPA,成熟单核细胞：约占2-8%，表达CD11b、CD64、CD14、HLA-DR，不表达CD34、CD117,成熟淋巴细胞：约占20-40%T细胞：表达CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7,不表达CD10、CD34、TDT等 B细胞：表达CD19、CD20、CD22，不表达CD10、CD34、TDT等NK细胞：CD3-(CD16+CD56)+,正常幼稚B细胞：5.0%,表达CD10、CD19、CD22、弱表达CD20，少量CD10stCD34+TDT+,幼稚髓系细胞：5.0,免疫分型常用的抗体,AMLCD34、CD117、CD33、CD13、HLA-DR、CD11b、CD15、CD64、CD14、CD65s、MPO怀疑M6加做CD71、GPA怀疑M7加做CD61、CD41B-ALLCD34、CD10、CD19、CD20、CD22、c/mIg、TDT、cCD22/CD79aT-ALLCD34、CD10、CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7、HLA-DR、CD1a、TDT、cCD3NK细胞CD16、CD56、CD57浆细胞CD38、CD138、c、c、CD19、CD56,免疫分型的步骤一,第一步：初筛，初步筛选白血病类型CD7/CD19/CD33/CD10/CD117/HLA-DR/CD34/CD45CD7+CD19-CD33+/-HLA-DR-CD117+/-疑为T-ALLCD7+CD19-CD33+HLA-DR+CD117+疑为AML伴CD7+CD19+CD7-CD33-CD10+/-CD117-疑为B-ALLCD19+CD7-CD33+CD10+CD117-疑为B-ALL伴CD33+CD19+CD7-CD33+CD10-CD117+疑为AML伴CD19+CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR+疑为AMLCD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-疑为APL,免疫分型的步骤二,第二步：确诊，进一步确定白血病类型，并且将某一系别的白血病根据分化程度的不同再分为不同亚型根据初筛结果加做其他系别特异性标记T-ALL:CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD1a、TDT、cCD3B-ALL:CD20、CD22、c/mIg、TDT、cCD22/CD79aAML:CD13、CD11b、CD15、CD64、CD14、CD65s、MPO,怀疑M6加做CD71、GPA,怀疑M7加做CD61、CD41,B-ALL免疫亚型,T-ALL免疫亚型,示例：T-ALL初筛CD7+CD19-CD33+/-HLA-DR-CD117+/-,示例：AML伴CD7+初筛CD7+CD19-CD33+HLA-DR+CD117+,示例：B-ALL初筛CD19+CD7-CD33-CD10+/-CD117-,示例：BALL+CD33初筛CD19+CD7-CD33+CD10+CD117-,示例：AML+CD19初筛CD19+CD7-CD33+CD10-CD117+,示例：AML初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR+,示例：AML-M3初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-,示例：AML-M3V初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-,混合细胞性白血病的免疫分型,双表型：一种白血病细胞同时表达两个或两个以上系列标志。双克隆型：同时存在两种或两种以上异常细胞，分别表达各自的系列特异性标志。类型：T-M、B-M、T-B、T-B-M,白血病中各种抗原的积分情况,混合细胞性白血病判断标准：每个系列积分或=2.5分,示例：B-M型AL,示例：T-M型AL,示例：T-B-M型AL,免疫表型的预后价值,免疫分型在慢淋、淋巴瘤中的应用简介,肿瘤性B细胞鉴别关键：、轻链出现单克隆表达或双阴性或表达强度明显异常。肿瘤性T细胞鉴别关键：CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7中出现抗原表达缺失或抗原表达强度的改变；CD45RA、CD45RO的表达情况出现异常；表达TDT、CD10等幼稚抗原；TCRV系列抗原出现单克隆表达。浆细胞肿瘤鉴别关键：CD138+细胞表达CD56，不表达CD19，出现cy、cy轻链的单克隆表达。NK细胞肿瘤鉴别关键：出现CD16、CD56、CD7、CD2等抗原的缺失，CD45表达强度的改变每种类型都必须关注异常细胞CD45表达强度、SSC、FSC的变化。,示例：正常淋巴细胞,正常T细胞,正常B细胞,正常NK细胞,示例：B-CLL/SLL,示例：MCL,示例：HCL,示例：Burkkit淋巴瘤,示例：FL,示例：脾边缘区淋巴瘤,示例：NK-T淋巴瘤,示例：T-NHL,82.5%,15.6%,示例：细针穿刺 B-NHL,示例：脑脊液标本 B-NHL,示例：正常浆细胞,示例：MM,示例：浆样淋巴瘤,流式细胞术检测BCR-ABL融合蛋白,
