血凝实验真菌检查法.ppt

第五次实验,1、血凝试验（1份/人）2、真菌检查法（1份/人）3、真菌大小培养观察4、观察梅毒螺旋体形态（示教）5、性病防治（录像）,实验内容,掌握真菌检查实验原理及方法掌握血凝实验原理及方法 熟悉螺旋体及支原体形态学观察方法,二、教学目的及教学要求,（一）、病毒血凝实验,原理：某些病毒由于表面有由糖蛋白组成的血凝素（HA），在一定条件下，能与某些动物或人的红细胞表面的糖蛋白受体结合产生凝集，称为红细胞凝集试验或血凝试验，能形成血凝现象的病毒有：流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、乙脑病毒等。,操作步骤,弃去0.25ml,*观察结果时要轻拿、勿摇动,血凝试验结果判定,结果观察：凝集特别显著：“”凝集现象次之：“”凝集清楚可见：“”稍显凝集者：“”血凝效价：呈“”凝集时的最高稀释度为最终滴度。,意 义,检查病毒的存在。滴定病毒的血凝效价，采用一定的病毒量进行其他实验，通常采用4个血凝单位。,（二）、真菌检查法（1份/人）,概念：真菌是一大类具有细胞壁和典型细胞核不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。,分类：单细胞和多细胞,单细胞真菌：呈圆形或卵圆形常见于酵母菌，类酵母菌以出芽方式繁殖。,卵圆形G+，着色不一可见假菌丝,白假丝酵母,多细胞真菌形态,真菌基本形态单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。,烟曲霉,白假丝酵母,菌落特征:酵母型真菌 类酵母型真菌 丝状菌落,单细胞,多细胞,酵母型菌落,类酵母型菌落,酵母型菌落,类酵母型菌落,真菌的菌落白假丝酵母：菌落圆形，较大，白色菌落底层有假菌丝多细胞真菌：观察气生菌丝，营养菌丝，表面隆起，浅沟及菌落基底颜色。,白假丝酵母(血平板),黄曲霉,1、营养要求不高，常用沙保弱培养基培养。2、生长缓慢，培养14周才出现典型菌落。3、培养温度为22-28，但某些深部真菌最 适生长温度为37。4、最适酸碱度为PH4.06.0。5、湿度要求较高。,真菌培养特性,原理,直接涂片检查 用显微镜直接检查标本中有无菌丝及孢子的存在，对皮肤丝状菌的感染可作初步诊断，本法简单迅速易行。,材 料,标本:脚皮等 试剂:10KOH 器具:玻片、镊子、酒精灯等,方法 KOH透明法,（1）取脚皮少许于玻片上，加二滴10%K0H溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。（2）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用高倍镜证实,注意：盖玻片倾斜45度慢慢盖上，不能产生气泡！,标本片制备,真菌检查镜下观,报告：“找到菌丝或孢子”“找到发外孢子”“找到发内菌丝”,（三）、支原体,支原体是一类没有细胞壁，呈多形性，能在无生命的培养基中生长繁殖的最小微生物。大小介于细菌和病毒之间。普通染色不易着色，用Giemsa染色着色较浅。革兰染色为阴性。营养要求较高，需要在含1020%马血清和酵母浸液的培养基上生长。最适的pH7.8 8.0.生长缓慢,在固体培养基上培养2 3天后才出现菌落。典型的菌落呈“荷包蛋”状，中心厚边缘薄的菌落形态。菌落表面呈颗粒状,观察支原体集落,（四）、观察梅毒螺旋体形态,梅毒螺旋体：Fontana镀银染色，菌体非常细小，弯曲，螺旋状，呈棕褐色，有紧密螺旋。,下一堂实验课内容,1.鸡胚形态结构观察 2.鸡胚接种 3.病毒的细胞培养能CPE 4.观察病毒包涵体（示教）5.病毒组织培养法(录像)6.实验总结,