临床检验基础尿液检验.ppt.ppt

尿液标本采集和处理,重点内容,3.尿标本采集有哪些种类、方法和临床应用?,第一节 尿液标本采集,一、标本采集一般要求安静状态，正常饮食细菌培养标本须在使用抗生素前采集运动、烟酒、饮食可影响某些结果清洁外阴，女性避免阴道分泌物污染导尿和穿刺由医护人员采集,二、标本种类及采集方法,三、保存 收集的新鲜尿液最好半小时内送检，否则需经以下处理：低温（4）冷藏。加防腐剂：甲苯（0.5-1ml/100ml，用于蛋白定量），盐酸（10ml/24小时，用于肾上腺素，17-O，17-OH检测），醋酸（醛固酮）。,第二节 尿液标本采集质量控制,生理状态生活习惯标本保存时间和温度物理和化学因素标本采集的质量管理,尿液一般检验,重点内容,1.什么是蛋白尿？形成肾小球和肾小管性蛋白尿有哪些主要原因和主要特点？6.试带法尿白细胞检测能否完全代替显微镜有形成分检查吗?为什么？11.均一性和非均一性尿红细胞的临床意义？13.尿管型形成有哪些基本条件？16.尿试带法与尿显微镜检查的关系？19.全自动尿有形成分分析仪与尿显微镜检查的关系？,第一节尿液理学检查,一、尿量定 义：24小时排出体外尿液总量。标本保存：每100ml尿液中加甲苯2ml防腐。参 考 值：正常成人尿量1-2L/24h。,（1）少尿：0.4L/24h或17 ml/h 无尿：0.1L/24h或12h无尿液病因 肾前性：血容量减低等肾血流量不足。肾性：见于急性肾小球肾炎等。肾后性：尿路梗阻等。（2）多尿：2.5L/24h原因生理性：饮水过多、输液等。病理性：内分泌疾病：如尿崩症等。肾 脏 疾 病：肾小管受损。代谢性疾病：如糖尿病。,临床意义,二、尿色和透明度正常尿液为无色或淡黄色、清晰透明。病理性尿色改变常见的有：(1)血尿：血量 lml/L尿液即可出现淡红色称肉眼血尿。镜检时每高倍视野红细胞平均3个称为显微镜下血尿。血尿多见于肾或泌尿系结石、肿瘤、外伤、重症肾小球疾病、肾盂肾炎、膀胱炎、肾结核、多囊肾等。(2)血红蛋白尿：血红蛋白尿呈浓茶色或酱油色，尿隐血试验阳性。血红蛋白尿见于阵发性睡眠性血红蛋白尿、蚕豆病、输血反应等溶血性疾病。,(3)菌尿和脓尿：菌尿呈云雾状；脓尿呈白色混浊状。不论加热或加酸，混浊均不消失。脓尿、菌尿见于泌尿系统感染如肾盂肾炎、膀胱炎等。(4)乳糜尿：因乳糜液逆流进入尿中所致，外观呈不同程度的乳白色，尿乳糜试验阳性。常见于丝虫病等淋巴管破裂淋巴液溢入尿液者。(5)胆红素尿：尿内含有大量结合胆红素，振荡后泡沫呈黄色。胆红素尿见于阻塞性黄疸及肝细胞性黄疸。,尿色异常及原因,尿浑浊异常及原因,成人随机尿为1.0031.030之间，晨尿1.020,临床意义,1、比重增高（晨尿1.020）：见于肾前性少尿 糖尿病 清蛋白尿2、低比重尿（1.015）：见于急性肾小管坏死、急性肾衰竭、尿崩症等。,参考值,三、比重(SG),四、尿渗量（Osm）定义：尿液中具有渗透活性的全部溶质微粒总数。受大分子物质影响小，主要决定于电解质和尿素浓度。参考值：600-1000mOsm/kg H2O/24h，尿/血约3-4.7:1,临床意义,1、评价肾脏浓缩稀释功能尿渗量或尿/血渗量比低说明浓缩功能不全。2、鉴别肾性和肾前性少尿肾小管坏死致少尿时，尿渗量降低；肾前性少尿时较高。,五、尿气味正常新鲜尿液为微弱芳香气味，久置后可出现氨臭味。新鲜尿液出现氨味多为慢性膀胱炎和慢性尿潴留腐臭味见于泌尿系统感染或晚期膀胱癌苹果样气味见于糖尿病酮症酸中毒有机磷中毒患者尿常带蒜臭味,第二节尿液化学检查,一、酸碱度(pH),参考值,正常新鲜尿液多呈弱酸性晨尿pH5.5-6.5随机尿pH4.58.0,临床意义,1、pH降低：见于酸中毒、发热、糖尿病等；2、pH增高：见于碱中毒、尿路感染、菌尿等。3、用药指标：酸/碱化尿液，利于某些药物排出。,二、蛋白质当尿蛋白150mg/24h或100mg/L时，尿蛋白定性试验为阳性，称为蛋白尿。病理性蛋白尿1.肾小球性蛋白尿因炎症、免疫和代谢等因素导致肾小球滤过膜损伤，通透性增加及静电屏障减弱，血浆蛋白特别是清蛋白滤出，超过肾小管重吸收能力而形成的蛋白尿。,根据滤过膜损伤程度及尿蛋白组分，分为,非选择性蛋白尿,选择性蛋白尿,以清蛋白为主，IgG/Alb清除率0.1常见于肾病综合征,肾小球毛细血管壁有严重损伤，以分子量较大的免疫球蛋白、补体和清蛋白为主，IgG/Alb清除率0.5常见于肾小球疾病,2.肾小管性蛋白尿指肾小管在受到感染、中毒损伤或继发于肾小球疾病时，因重吸收能力降低或抑制，而出现的以分子量较小的蛋白(如B2MG)为主的蛋白尿。3.混和性蛋白尿病变同时或相继累及肾小球和肾小管，兼有两种蛋白尿的特点。,4.溢出性蛋白尿血液中分子量较小或阳性电荷的蛋白质增多，经肾小球滤过，超过肾小管重吸收能力而形成的蛋白尿，如本周蛋白。5.组织性蛋白尿来源于肾小管代谢、组织破坏、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质形成的蛋白尿,以TH糖蛋白为主。,6.偶然性蛋白尿：又称假性蛋白尿：即因尿内混有大量血液、脓液和黏液等而导致蛋白定性试验阳性，一般并不伴有肾本身的损害。7.功能性蛋白尿：指泌尿系统无器质性病变，尿内暂时出现的轻度蛋白质，又称为生理性蛋白尿。可由剧烈运动、发热、受寒或精神紧张等因素引起，常为一过性蛋白尿。8.体位性蛋白尿：指直立姿势时出现蛋白尿而卧位时尿蛋白消失，且无血尿、高血压、水肿等异常表现，又称为直立性蛋白尿。,检测方法试带法：pH指示剂蛋白质误差原理，主要用于尿液分析仪简便、快速、易标准化，适于健康体检或筛查。对清蛋白灵敏，对球蛋白不灵敏，不适用于肾病病人；pH在3-9以外时可出现假阴或假阳性；,磺基水杨酸法：又称磺柳酸法，为定性或半定量方法。操作简便、反应灵敏、结果显示快，是干化学法检测尿蛋白的参考方法，并为检测尿蛋白的确证实验。pH在3-9以外或高浓度尿酸盐可导致假阴或假阳性。加热乙酸法：方法经典而准确，为蛋白定性确证实验，操作略繁。特异性强，干扰因素少。,三、葡萄糖血糖浓度超过8.88mmol/L时，尿中出现葡萄糖。检测方法1.试带法即葡萄糖氧化酶过氧化物酶法，特异性强、灵敏度高、简便快速、适用于自动化分析。2.班氏法非特异试验，可测定尿中所有还原性物质，灵敏度低、方法稳定、成本低。,维生素C对尿糖检测影响影响机制试带法：与试剂发生竞争性抑制反应。班氏法：维生素C为还原物质，可与试剂中的硫酸铜发生反应。解决办法将尿液煮沸后几分钟再检测,临床意义,（1）血糖增高性糖尿：糖尿病；甲状腺功能亢进；垂体前叶功能亢进如肢端肥大症；嗜铬细胞瘤；Cushing综合症。（2）肾性糖尿：家族性糖尿；慢性肾炎或肾病综合症；妊娠。（3）暂时性糖尿：生理性如大量进食碳水化合物等；应急性糖尿如颅脑外伤等。（4）其他糖尿：如乳糖、果糖等。（5）假性糖尿：尿中还原性物质，如维生素C、尿酸、葡萄糖醛酸或药物如异烟肼、链霉素、水杨酸、阿司匹林等，可呈阳性反应。,四、酮体（KET）是尿中-羟丁酸、乙酰乙酸、丙酮的总称。检测方法亚硝基铁氰化钠法基于该原理有多种检测方法，均不与-羟丁酸反应。Gerhardt法只能测定乙酰乙酸。,临床意义：正常人定性试验尿酮（）在生理或病理情况下，如糖尿病、剧烈运动、妊娠剧吐、应激状态、饥饿时，脂肪动员加速，代谢紊乱，酮体生成过多，引起血酮体过多而导致酮尿。糖尿病性酮症：糖尿病患者出现尿酮，应考虑糖尿病酮症酸中毒，是发生酮酸中毒性昏迷的前兆。非糖尿病酮尿：孕妇可因严重妊娠反应剧烈呕吐、重症子癫不能进食引起尿酮体阳性。,五、胆红素(BIL)主要分为未结合胆红素（UCB）和结合胆红素（CB）。未结合是非水溶性，不能从肾脏滤过，故尿中正常没有，结合性是水溶性的，可从尿中排出。检测方法重氮法多用于试带法，维生素C或标本保存不当可致假阴性。,参考值,正常人尿胆红素含量2mg/L，定性阴性。,临床意义,主要用于黄疸的诊断和鉴别诊断肝细胞性黄疸阳性梗阻性黄疸阳性溶血性黄疸阴性,六、尿胆原（URO）和尿胆素尿胆原是结合胆红素排入肠道后形成的。尿胆原与空气接触后变成尿胆素。尿胆红素、尿胆原、尿胆素三者共称尿三胆。检测方法试带法基于改良的Ehrlich醛反应原理，标本久置后或维生素C会导致假阴性。,参考值,尿胆原含量10mg/L，定性为阴性或弱阳性。,临床意义,主要用于黄疸的诊断和鉴别诊断溶血性黄疸强阳性肝细胞性黄疸阳性梗阻性黄疸阴性,肾,小部分 大部分 胆素原,胆红素清蛋白复合物,单核吞噬细胞,肝细胞,血 液,清蛋白,七、血红蛋白（Hb）游离血红蛋白超过结合珠蛋白结合能力，可经尿液排出，称为血红蛋白尿。检测方法试带法血红蛋白的血红素基团，具有过氧化物酶活性，能催化过氧化氢，使色原氧化呈色，色的深浅和血红蛋白含量成正比。常用色原有邻甲苯胺和四甲替联苯胺。化学法原理同试带法。免疫法免疫胶体金测定原理，灵敏度特异性好。,临床意义,尿中出现Hb是血管内溶血的证据之一红细胞破坏疟疾感染DIC免疫因素,八、亚硝酸盐（NIT）主要来自病原菌对尿硝酸盐的还原反应。检测方法亚硝酸盐还原法阳性检出率主要取决于致病菌是否含有硝酸盐还原酶尿在膀胱中是否停留足够细菌作用的时间尿中是否存在适量硝酸盐,影响因素标本因素高比重尿降低敏感性，陈旧尿致假阳性；食物因素不能正常饮食者，可出现假阴性；致病菌因素与大肠杆菌感染符合率高，粪链球菌感染则为阴性；药物利尿剂和维生素C导致假阴性；尿停留时间晨尿较好，停留时间过短可为假阴性。临床意义主要用于尿路感染的快速筛检。,九、白细胞酯酶与显微镜检测白细胞有互补作用检测方法酯酶法只对粒细胞灵敏，与淋巴细胞不反应；假阳性率高，主要见于阴道分泌物污染等；维生素C可以导致假阴性。临床意义用于诊断泌尿系统感染，肾移植排斥反应时尿中以淋巴细胞为主，此时应以镜检为准。,十、维生素C检测方法还原法只能检测还原性抗坏血酸。临床意义用于判断其他检测项目结果是否准确可靠，是否受到维生素C浓度的影响，以免出现假阴性。,十一、其他1.人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测原理单克隆免疫金标法临床意义诊断早期妊娠、异位妊娠；流产诊断和监测；妊娠滋养细胞疾病诊断与监测；肿瘤标志,2.乳糜液和脂肪检测原理乙醚提取，苏丹III染色临床意义乳糜尿：丝虫病、淋巴管破裂脂肪尿：肾病综合征等3.本周蛋白 加热至40-60度时凝固,90-100度时溶解,再降低至56度时可重新凝固,故称作凝溶蛋白。检测原理热沉淀溶解法临床意义见于多发性骨髓瘤等,第三节尿液有形成分显微镜检查,尿液有形成分是指通过尿液排出体外能在光学显微镜下观察到的有形物，如细胞、管型、结晶、微生物、寄生虫等。尿沉渣做显微镜检查可提供许多有用的信息，是试纸条不能取代的,主要检查细胞、管型及结晶等。下述情况应进行显微镜检查某些疾病如泌尿系统疾病、糖尿病等；任何一项尿液理学、化学检查结果异常；尿液干化学检查，红细胞、白细胞、蛋白质和亚硝酸盐中有一项异常者，并以显微镜结果为准。,一、检查方法,检查方法,显微镜,分析仪,直接镜检,离心浓缩,染色,不染色,染色,不染色,流式分析,图像分析,尿液形成分检查方法学比较,二、细胞1.红细胞参考值 24小时尿3/HP为镜下血尿；每L尿中红细胞达到1ml时，为肉眼血尿。,均一性血尿 多为非肾小球性血尿，红细胞外形及大小正常，类似外周血未染色血片上的红细胞形态，整个尿标本中不超过二种以上的红细胞形态。主要见于肾小球以下部位和泌尿道毛细血管的出血。临床上主要见于剧烈运动、肿瘤、结石、前列腺炎等。,非均一性血尿多为肾小球性血尿。即变形红细胞性血尿，其红细胞大小不一，外形呈两种以上的多形性变化、可见大红细胞、小红细胞、棘形红细胞、面包圈红细胞、新月形红细胞、颗粒形红细胞、红细胞穿孔等。与肾小球基底膜病理性改变以及肾小管因素对红细胞作用有关。主要见于肾小球肾炎、肾盂肾炎、红斑狼疮、肾病综合征.常伴有尿蛋白和管型的异常.,混和性血尿为上述两种血尿的混合，依据其中哪一类红细胞超过50%又可分为以均一性为主和以非均一性为主的两种。提示出血有可能是肾小球性，也可能伴有下尿道出血，常见于IgA肾病等。,2.白细胞闪光细胞低渗条件下中性粒细胞颗粒呈布朗运动，油镜下可见蓝色发光现象，称为闪光细胞。脓细胞由炎症过程中被破坏、变性或坏死的中性粒细胞形成。参考值 24小时尿200万，中性粒细胞为主，随机尿 0-5/HP；临床意义 中性粒细胞增多主要见于泌尿系统炎症急性期；淋巴、单核细胞增多主要见于慢性炎症、肾移植术后等；,3.吞噬细胞 分大小两种，分别来自中性粒细胞和单核细胞，后者称巨噬细胞。临床意义 见于泌尿系统急性炎症、细胞多少与炎症程度有密切联系。,4.上皮细胞肾小管上皮细胞：来自肾小管，与白细胞相似，多见于肾小管病变；移行上皮细胞：又称大圆上皮细胞，来自肾盂、输尿管、膀胱等，增多提示相应部位病变，单独出现少量无明显意义；鳞状上皮细胞：来自输尿管下部、膀胱、尿道和阴道表层，大而不规则，大量增多并伴白细胞增多，提示有炎症。,肾小管上皮细胞,移行上皮细胞,鳞状上皮细胞,尾形(肾盂)上皮细胞,管型形成的的条件,原尿中有清蛋白、TH蛋白，这是构成管型的基质和首要条件,肾小管有浓缩和酸化尿液的能力,尿流缓慢，有局部尿液淤积,具有可供交替使用的肾单位,三、管型管型是蛋白质、细胞及其崩解产物在肾小管、集合管内凝固而成的圆柱形蛋白凝聚体。,正常01/LP,透明管型,红细胞管型,白细胞管型,颗粒管型,蜡样管型,肾衰竭管型,临床意义：(1)细胞管型：肾上皮细胞管型：可见于急性肾小管坏死、肾淀粉样变性、急慢性肾小球肾炎、肾病综合征。红细胞管型：主要见于肾小球疾病，如急进性肾炎、急性肾小球肾炎、慢性肾小球肾炎急性发作、肾移植术后急性排斥反应等。白细胞管型：管型中如白细胞发生变性或嵌入脓细胞，则称为脓细胞管型，常提示肾实质有活动性感染，见于肾盂肾炎、间质性肾炎。,(2)颗粒管型：粗颗粒管型：见于慢性肾小球肾炎、肾盂肾炎或某些原因(药物中毒等)引起的肾小管损伤；细颗粒管型：见于慢性肾小球肾炎或急性肾小球肾炎后期。(3)透明管型：健康人可偶见，在运动、重体力劳动、麻醉、应用利尿剂、发热时可一过性增多。在肾病综合征、慢性肾小球肾炎、恶性高血压及心力衰竭时可见增多。(4)蜡样管型：提示局部肾单位有长期梗阻性少尿，说明肾小管病变严重，预后较差。见于慢性肾小球肾炎的晚期、慢性肾衰竭。(5)肾衰竭管型：外形宽大不规则易折断,有时呈扭曲状,在慢性肾衰竭时出现,提示预后不良。,四、结晶1.生理性结晶酸性尿液中结晶草酸钙结晶、尿酸结晶、非结晶性尿酸盐、马尿酸结晶碱性尿液中结晶磷酸盐结晶、碳酸钙结晶、尿酸铵结晶生理性结晶又称代谢性结晶，一般无临床意义。,2.病理性结晶胆红素结晶黄红色、成束针状或小块状，见于黄疸、肝癌、肝硬化或坏死；胱氨酸结晶黄褐色、小球状，见于肝坏死、肝硬化、磷中毒；酪氨酸结晶略黑、细针状，见于肝坏死、磷中毒、肝硬化；,胆固醇结晶无色、缺角方形，见于肾淀粉样变、脂肪变性等；胱氨酸结晶无色、六边形片状，见于肾结石、膀胱结石等；磺胺类药物结晶伴红细胞出现提示药物性损伤；含铁血黄素结晶提示红细胞被大量破坏。,五、其他成分1.细菌有革兰氏阴性杆菌和革兰阳性球菌，主要有大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌为主。革兰阴性菌105/ml或革兰阳性菌104/ml时说明有泌尿系统感染。2.真菌白色假丝酵母菌酵母菌与小红细胞相似，可通过破碎试验区分。,六、质量保证1.检验前标本要求 宜使用晨尿，及时分析，避免污染经血阴道分泌物等；器材标准化 使用清洁、干燥，无干扰物质的容器；制定标准操作程序 统一实验室尿液操作程序和方法；参与室内、室间质评 动态掌握本实验室检验水平。,2.检验中主要是标准化操作离心因素离心温度（1525）、离心时间（5min)和离心力（400g)标本量标本应为10ml，离心后取管底0.2ml，混匀后再取约50ul镜检镜检先低倍下观察有形成分分布情况，并报告管型数；再高倍仔细观察、分辨细胞，并报告细胞数；,3.检验后综合分析核对申请单及时反馈临床结果记录，回顾分析,第四节尿液分析仪检查,一、干化学分析仪检查尿液干生化试带法操作简便、检测迅速、结果准确，可目测也可自动化分析。1.检验原理分析仪组成机械系统光学系统电路系统试带种类单项试带多联试带尿干生化分析仪检测原理的本质是光的吸收和反射。,尿干生化试带各检测项目反应原理,方法学评价优点标本用量少、速度快、项目多，重复性好、准确性较高，适用于大批量标本检查。缺点不能代替病理性标本的显微镜检查；不能判断红细胞形态；对球蛋白不敏感，不适用于肾病患者；只能检出有硝酸盐还原酶的细菌；干扰因素(维生素C)多；不能反映淋巴细胞增多;保存和使用要求高.,干化学法与显微镜检法结果不相符的情况分析,干化学法与显微镜检法比较,标本用量少、速度快、项目多，重复性好、准确性较高，适用于大量标本。,不能代替病理性标本的显微镜检查；不能判断红细胞形态；,干扰因素多；保存和使用要求高。,能真实反映有形成分形态，直观可靠。,标本用量多，操作费时，不适用大量标本。,干化学,显微镜,二、尿有形成分分析仪检查具有检验快速、人为偏差小、精密度高等特点。1.直接镜检影像分析仪检测原理与人工显微镜镜检原理相似，但具有无污染、定量、简便、高效、准确、精确度高的优点。,2.全自动尿有形成分分析仪应用了流式细胞技术和电阻抗分析原理 具有快速(每小时检出标本50-100个)、操作方便,临床医生能结合给出的尿沉渣有形成分定量结果和红细胞、白细胞细胞散射光分布、直方图进行分析、便于对疾病的诊治和科研工作等特点。仪器组成 包括光学系统、液压系统、电阻抗检测系统,流式细胞技术将待测细胞或微粒进行荧光染色后制成悬液标本,在一定气体压力下将待测样品压入流动室。用缓冲液(又称鞘液)在高压下从鞘液管喷出,鞘液管入口方向与待测细胞或微粒流成一定角度,使鞘液包绕着细胞或微粒高速流动,形成鞘流。待测细胞在鞘流中单行排列,依次通过流式细胞仪的检测区域,经激发光激发后产生荧光信号。通过检测荧光信号可以逐一检测每一个细胞的物理和化学特性，从而对细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析。,流式细胞技术原理,染色菲啶主要作用于DNA，用于区分有核与无核细胞羧花氰与细胞膜脂质结合，反映细胞大小检测F1（荧光强度）反映染色质强度Flw（前向荧光脉冲宽度）反映染色质长度Fsc（前向散射光强度）反映细胞大小Fscw（前向散射光脉冲宽度）反映细胞长度电阻抗大小反映细胞体积,尿沉渣流式分析仪（UF100）,方法:流式分析+荧光染色电阻抗法,电导率为复合型仪器优点 客观标准化判读精确的定量化信息,如RBC,WBC,CAST等多种参数,RBC形态,电导率速度快,100个/小时使用新鲜,未离心尿缺点太敏感价格偏高,基层医院尚难承受假阳性偏高,方法学评价(与显微镜检比较)优点不需离心、可自动进样所需标本量少、速度快、效率高、可定量采集的信息量大易于标准化和质控 与干化学分析仪联检意义大可提供实际细菌量可判断出血状况和性质可检测淋巴和单核细胞缺点假阳性率高、不能鉴别异常细胞大量细菌和酵母菌有干扰，影红细胞易漏检,