医院常见感染临床标本收集方法与注意事项.docx

医院常见感染临床标本收集方法与注意事项第一节总则一、临床微生物标本采集原则(1)采集时机：发现感染病例，应在抗菌药物使用前及时采集标本做病原学检查。已用抗菌药物者需至少停用抗菌药物2472小时后采样。最好在病程早期、急性期或症状典型时采样。(2)做好个人防护：必须戴手套、口罩，穿工作服，必要时戴面具和护目镜。(3)无菌采集：运送培养基现用现领，避免在病房内存放时间过长而被污染或失效。标本容器需经灭菌处理，宜采用压力蒸汽等物理灭菌方法，不得使用化学消毒剂灭菌。用外表面非无菌试管留取标本前后，需将试管口置于酒精灯火焰上消毒。采集无菌标本时应注意对局部及周围皮肤的消毒，对于与外界相通的腔道，不应从腔道口取标本，应从底部取组织检查。如使用消毒液消毒皮肤，需作用一定时间，待其干燥后采样。严格执行无菌操作，避免标本污染。(4)根据目的菌的特性，用不同的方法采集：混有正常菌群的标本，不可置肉汤培养基内送检，如痰液、尿液、伤口拭子。对于阳性率检出低的标本，床旁接种可提高病原菌检出率。如怀疑为厌氧菌感染，应给予标本无氧环境。(5)采集适量标本，正确填写检验单：采集量不应过少，而且要有代表性。同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位的标本。如伤寒患者，发病的第一周应采集血液,第二周应采集粪便和尿液，以提高阳性率和准确率。检验单需注明抗生素使用情况，采集时间、部位和可疑的诊断。(6)安全采集：标本采集时注意预防锐器伤。做好自身防护，严格正规操作，避免病原菌传播。(7)护士在采集标本时遵照五项原则流程：遵照医嘱；充分准备；严格查对；正确采集；及时送检。二、临床微生物标本送检的注意事项所有标本采集后都应立即送往实验室，最好在2小时内。一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检。如果不能及时送检，按要求存放。(1)送检标本应注明来源、检验目的和采样时间，使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境。(2)以棉拭子采集的标本，宜插入运送培养基内送检，如咽拭子、伤口拭子等。(3)厌氧培养标本需保持厌氧状态运送：使用专用运送培养基或用针筒抽取标本后排尽空气，在针头上置无菌橡皮塞后运送。(4)通常用于细菌学检验的标本存放不要超过24小时。(5)最佳的临床标本送检，包括厌氧菌培养标本，首先取决于所获取标本的量。量少的标本要在采集后的1530分钟内送检。活检组织如果采用厌氧运送方式，可置于25。C恒温箱存放2024小时。(6)送检期间要予以安全防护：放标本的容器必须防漏，禁止将渗漏的标本送往实验室。严禁将带有裸露针头的注射器送往实验室。三、微生物实验室对标本的拒收标准(1)所用运送培养基不合适，如厌氧培养标本却按需氧培养标本送检。(2)运送标本的时间过长。(3)标本容器上未贴标签或贴错标签。(4)容器有裂缝或被打破。(5)标本明显被污染。(6)拭子上的标本干掉。(7)标本不符合检验要求，如痰标本以唾液为主。(8)标本使用了固定剂及防腐剂。(9)标本量不够。(10)24小时内重复送检的标本(血培养除外)。第二节常见部位采样方法一、呼吸系统感染标本留取方法与结果判断L咽分泌物培养标本。正常人咽喉部培养应有口腔正常菌群，而无致病菌生长。在机体全身或局部抵抗力下降和其他外部因素作用下，可以出现感染而导致疾病。个别医务人员可能存在咽耐药菌定植，故对于个别重点科室，如母婴室等，需定期检测医务人员咽分泌物。对于白喉、化脓性扁桃体炎、急性咽喉炎等，咽分泌物培养出致病菌，对于其诊断和治疗有临床意义。（1）采集方法：协助患者清水漱口后，取无菌生理盐水棉签（必要时以压舌板轻压舌根），嘱患者发“啊”音，以轻快的动作迅速擦拭两侧腭弓及咽、扁桃体分泌物后，速将试管口在酒精灯火焰上消毒，将拭子插入试管中塞紧，立即送检。（2）注意事项1）标本采集前勿用消毒液漱口。2）棉拭子避免触及舌、口腔黏膜和唾液。3）标本采集后立即送检，防止干燥。4）不可置肉汤培养基内送检。5）对化脓性扁桃体炎或口腔念珠菌病者，用棉拭子在病灶部位擦拭数次即可。6）鼻咽拭子：查脑膜炎奈瑟球菌或百日咳杆菌，应自鼻咽部采集。7）避免在进食后2小时内留取标本，以防呕吐。（3）结果判断：咽部有大量的正常菌群存在，需注意辨别。常见的病原菌为：化脓性链球菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌等。2.痰培养标本（1）采集方法自然咳痰法：嘱患者先用洁口液、再用清水漱口，以除去口腔中的细菌，尽可能在应用抗菌药物之前采集标本（临检），深吸气后用力咳出12口痰于培养皿或瓶中，标本量应大于Iml（临检），痰量极少可用45。Cl0%氯化钠溶液雾化吸入导痰。支气管采集法：建立人工气道，如气管切开或气管插管者，戴无菌手套或用无菌镶子取一次性无菌专用吸痰管，一头缓慢插入气管至隆突（叶支气管）水平，一头接电动吸引器，螺旋式抽吸，吸引痰液。小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时可喷出肺部气管分泌物，将粘有分泌物的拭子送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方以诱发咳痰。（2）注意事项1）标本及时送检，避免干燥，如在室温下放置2小时，则定植于口咽部的非致病菌过度生长，而肺炎球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。2）防止唾液及上呼吸道分泌物污染。3）在抗生素使用前采集价值高。4）连续采集34次，采集间隔时间24小时。5）对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。（3）结果判断1）正常人体的下呼吸道是无菌的，上呼吸道有正常菌群栖居。2）合格痰的涂片镜检鳞状上皮细胞VlO个低倍视野，白细胞25个/低倍视野，或两者比例VL2.5。3）连续两次分离出相同的病原菌可认为是感染病原菌。4）经纤维支气管镜和人工气道吸引采集分泌物分离出的细菌可认为是感染病原菌。5）痰液与血液或胸腔积液中分离到相同病原体，有诊断意义。6）痰培养常见病原菌为金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌、卡他莫拉菌、脑膜炎奈瑟、白喉棒状杆菌、类白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、炭疽芽抱杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、百日咳杆菌、军团菌、支原体和衣原体等；常见的真菌主要有白假丝酵母菌、隐球菌、曲霉菌、毛曲霉；常见的病毒主要有腺病毒、流感病毒、副流感病毒等。7）痰中的病原菌不少属于机会致病菌，应根据病情判断。8）如查癌细胞，应用10%甲醛溶液或95%乙醇溶液固定痰液后立即送检。二、泌尿系统感染标本留取方法与结果判断1 .采集方法（1）普通中段尿采集：女性采样前用肥皂水或0.现高镒酸钾溶液冲洗外阴部尿道口（男性需翻转包皮冲洗），用0.现苯扎溟钱或无痛碘消毒尿道口，最好留取清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水。为避免尿道周围皮肤及器官的正常菌群污染尿液，自然留取时尿液须呈直线状排出，或插导尿管留取中段尿，但可能损伤尿道，应注意动作轻柔，严格无菌操作。消毒时按照中、左、右、中的顺序进行。如果需要可收集第一段尿液数毫升做淋球菌和衣原体检查；不终止排尿，在排出数毫升尿液后用无菌试管收集第二段尿，即为所需中段尿。（2）留置导尿尿标本采集：培养前，有条件者可夹管1020分钟。采样时应松管弃去前段尿液，左手戴无菌手套固定导尿管后，按中、左、右、中的顺序，严格消毒尿道口处的导尿管壁，待干后，用无菌注射器针头斜穿管壁抽吸尿液。不可打开导尿管和引流管连接处收集标本。2 .注意事项(1)采集的尿液标本放入无菌容器中立即送检，2小时内接种，标本不能立即送检者，暂存于4。C冰箱内；但不得超过24小时。(2)在用药前采集尿液，不加防腐剂。(3)严格无菌操作，避免污染。(4)不可从集尿袋下端管口留取标本。(5)会阴部分泌物过多时，应先清洁再采集。3 .结果判断(1)正常人体内膀胱中的尿液是无菌的。(2)中段尿以晨起第一次尿液为主，其革兰氏阴性杆菌浓度大于105ml,革兰氏阳性球菌大于104/ml可认为是感染的病原菌；反之，污染菌可能性大。真菌浓度大于(103104)/ml可认为感染菌。(3)已用抗菌药或经导尿管采集的尿液，多次尿培养为单一的同种菌，细菌浓度虽未达到上述界限，也可认为是感染的病原菌。(4)尿培养显示浓度超过上述界限的但有3种或3种以上细菌和真菌时，应考虑污染菌的可能。(5)尿培养中常见病原菌为大肠埃希菌、肠球菌等，其他病原体有支原体、衣原体、真菌等。三、血液系统感染标本留取方法与结果判断1 .血培养标本采集法（1）采集方法1）培养瓶消毒程序：消毒培养瓶橡皮塞，待干燥后使用。2）皮肤消毒程序：用消毒液从穿刺点向外螺旋形消毒，使消毒区域直径达5cm以上，待干后采血。3）静脉穿刺和培养瓶接种程序：用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头（如果行第二次穿刺或用头皮针取血时，应换针头），直接注入血培养瓶，先注厌氧培养瓶，并注意避免注入空气，后注入其他培养瓶，轻轻混匀以防血液凝固或严格按厂商推荐的方法采血。4）采血部位：通常为肘静脉，疑为细菌心内膜炎时以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静脉点滴抗菌药物的静脉处采血。对于成人患者，每次发热时应该分别在两个部位采集血标本以帮助区分是病原菌还是污染菌。在不同部位取血,2次分离出同样菌种才能确定是病原菌。不应从留置静脉或动脉导管取血，因为导管易被固有菌群污染。5）采血时机：在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，以正在发冷发热前半个小时为宜或在停用抗菌药物24小时后。6）采血量：成人菌血症或败血症的血液中含菌量较少,平均l3ml血液中仅有1个细菌。所以采血量一定要足够。以培养基与血液之比10:1为宜，以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。采血量过少会明显降低阳性率。成人每次每培养瓶采血510d（含50ml培养基），婴幼儿和儿童每次每套培养瓶采血l20ml（含20ml培养基，根据孩子的体重确定具体量）。（2）注意事项1）血液标本采集后应立即送检，不能及时送检者应置室温暂存，勿放于冰箱内。检验单需注明抗菌药物（特别是磺胺、青霉素）使用情况、采集时间和部位（如左臂等）、可疑的诊断。2）采血次数及间隔：24小时内最多采集4套标本（厌氧培养与需氧培养），不同情况采血次数与间隔不同。急性发热：尽量在抗菌药物使用前，10分钟内，在不同的部位，采集2套标本（厌氧培养与需氧培养）。非急症感染病例：在抗菌药物使用前或血药浓度最低时（用药之前或停药3天后）,在不同的部位采集24套标本（厌氧培养与需氧培养）。所有标本在24小时内采集，间隔时间不超过3小时。急性心内膜炎：尽可能在抗菌药物使用前，12小时内，在3个不同的部位采集3套标本（厌氧培养与需氧培养）。不明原因发热：在不同的部位采集24套标本（厌氧培养与需氧培养），如果在2448小时内结果阴性，再采集23套甚至更多套的标本。儿童：及时采集；几乎不需要连续采样。(3)结果判断1)健康人体的血液是无菌的。2)通常血培养分离的细菌或真菌可认为是血液感染的病原体。3)大多数的菌血症是间歇性的，往往需要以多次血培养阳性证实。如为表皮葡萄球菌、类白喉棒状杆菌等皮肤常居菌，则连续两次培养为同种细菌方可确定。4)血液中常见细菌为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、A群链球菌、B群链球菌、肺炎链球菌、肠球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌等。2 .静脉留置导管标本采集(1)采集方法：用消毒液清洁导管周围皮肤，待干燥后拔出静脉留置导管，用无菌技术剪导管。将体内段5cm立即置于血平皿上滚动涂抹1遍或将导管置于空的无菌试管内立即送检。(2)注意事项：采样后立即送检，避免标本干燥；不宜将剪下的导管体内段置于肉汤增菌液中，因为不能区分导管感染菌与少量定植菌。(3)结果判断：细菌菌数215CFU/平板即为阳性。四、手术部位感染标本留取方法L脓液和伤口标本(1)采集指征：软组织有急性化脓性炎症、化脓性疾病、脓肿、创伤感染等。(2)采集时间：在使用抗菌药物之前采集。(3)采集方法：首先用无菌生理盐水清洗脓液及病灶的杂菌，尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口边缘取样。(4)容器：使用无菌试管，最好用卡布(CaryBair)拭子转运系统。(5)标本运送：常温2小时内送检。(6)注意事项1)组织或液体优于拭子标本，如必须用拭子，采集2个，一个培养，一个做革兰氏染色。从脓肿底部或脓肿壁取样，结果最好。2)应观察脓液及创面分泌物性状、色泽、气味，为培养鉴定提供参考依据。如脓液黏稠，呈黄色，病灶局限，可能为金黄色葡萄球菌；脓液稀，带血水，病灶扩散，可能为化脓性链球菌；脓液呈绿色，带生姜味，可能为铜绿假单胞菌；脓液有恶臭，可能为厌氧菌感染。若直接涂片革兰氏染色有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌，而分离培养时又无细菌生长，一般应考虑患者已接受抗菌药物治疗，或可能为厌氧菌感染。若为厌氧菌最好做床边接种或置于厌氧培养基内送检。(7)结果判断：从脓液和创面分泌物中能够检出的细菌种类很多，但不一定都是感染主要致病菌。细菌学检验对局部细菌的控制、伤口创面感染的病原学诊断具有重要意义。化脓性感染可由一种或多种细菌所致。需氧菌或兼性厌氧菌中以金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、产气肠杆菌等多见。冷脓肿由结核分枝杆菌所致。脓液、创面分泌物中常见的病原微生物。2.组织标本(1)采集指征：出现表浅皮肤黏膜感染、深部组织感染等。(2)采集时间：在使用抗菌药物之前采集。(3)采集方法：根据不同的病变部位(炎症或坏死组织)，采用相应的方法采集。(4)采集量：留取尽可能大的组织标本，如果标本量足够，建议留一部分保存在一7(TC,以备进一步的分析。(5)容器：无菌容器，需要加一些无菌盐水保持湿润。(6)标本运送：常温15分钟内送检，4。C保存24小时内送检。(7)注意事项：呈送组织的量尽可能多，不要呈送表面简单摩擦的拭子。组织标本不要添加固定液。3 .无菌体液标本(1)采集指征1)胆汁：急性胆囊炎、急性重症胆管炎，伴有腹痛、黄疸、墨菲征阳性，以及恶心、呕吐和发热，尿少且黄、中毒或休克。2)胸腔积液：结核性胸膜炎、细菌性肺炎引起的胸膜炎伴有胸痛、发热，胸腔积液混浊、乳糜性、血性或脓性。3)腹水：原发性腹膜炎、继发性腹膜炎伴有腹痛、呕吐、肌紧张、肠鸣音减弱或消失。4)心包液：结核性心包炎、风湿性心包炎、化脓性心包炎、细菌性心包炎。5)关节液：化脓性关节炎、关节肿胀、关节周围肌肉发生保护性痉挛。(2)采集时间：怀疑感染存在，应尽早采集标本，一般在患者使用抗菌药物之前或停用药物后12日采集。(3)采集方法：2%碘酊消毒皮肤后，由临床医生穿刺采集标本(2ml左右)，装入无菌密封容器立即送检。(4)采集容器：无菌试管。(5)采集量：至少Imlo(6)标本运送：采集后保温立即送检，保证在15分钟内送至实验室，实验室收到标本后应立即接种。五、消化系统感染标本留取方法粪便样本留取方法如下。(1)采集指征：当腹泻患者出现以下任何一种情况时建议采集粪便标本，进行细菌培养。1）粪便涂片镜检白细胞5个/HP。2）体温385°C°3）重症腹泻。4）血便或便中有脓液。5）未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者。6）来自疫区的患者。（2）采集时间：尽可能在发病早期和使用抗菌药物之前。在不同的时间采集23个标本可以提高致病菌的分离率。（3）采集方法1）自然排便采集标本时，取有脓血、黏液、组织碎片部分的外观无异常的粪便13g,应从粪便表面的不同部位取材。2）液体粪便则取絮状物，一般取13d,直接装入粪便容器或运送培养基中送检。3）直肠拭子采集粪便标本：先以肥皂、水和70%乙醇，将肛门周围洗净，然后用经无菌盐水湿润的棉拭子插入肛门并超越肛门括约肌约2cm,与直肠黏膜表面接触，轻轻旋转，沿一个方向旋转推出，必须将棉拭子置于运送培养基中送检。4）采集量：固体标本13g。液体标本13ml。5）容器：一般粪便标本装于无菌广口塑料杯内；直肠拭子置于Cary一Bair拭子转运系统。6）采集隐血标本时嘱咐患者检查前三天禁食动物肝、血，以免造成假阳性。（4）标本运送1）粪便标本：室温1小时内送检。2）直肠拭子：室温1小时内送检。3）高度怀疑霍乱弧菌感染的标本室温1小时内送检，运送必须符合特殊标本的安全要求。（5）注意事项1）除婴儿和有活动性腹泻症状的患者外不推荐用拭子做常规病原检测。2）有腹部痉挛的患者在发病6小时内采集到的血便或液状便的效果最好。对于气单胞菌、邻单胞菌、弧菌、小肠耶尔森菌的培养需要提出特别申请。3）粪便标本中含有许多杂菌，但也应该在标本采集过程中注意无菌操作，防止杂菌污染。4）为提高检出阳性率，最好采集新鲜粪便，采集有脓血、黏液、组织碎片部分的粪便j陈旧标本会影响检出率。5）腹泻患者应在急性期（3天以内）采集标本，这样可提高检出率。（6）结果判断腹泻是病原菌或病毒在肠道内繁殖的结果。可引起腹泻的细菌种类也较多，各类腹泻也具有一定的临床特点。沙门菌、志贺菌、气单胞菌、邻单胞菌是主要腹泻的病原菌，实验室粪便培养对临床诊断有非常重要的意义，并特别关注使用抗菌药物引起的抗菌药物相关性腹泻。六、皮肤软组织感染标本留取方法L压疮溃疡(1)采集指征：局部出现炎症，临床医师根据患者实际情况选择检测项目。(2)采集时间：在使用抗菌药物之前采集。(3)采集方法：用无菌盐水清洗表面，如得不到活检标本，用拭子用力采集损伤底部，将标本放人Cary-Bair拭子转运系统。(4)采集范围：5cm左右。(5)容器：CaryBair拭子转运系统。(6)标本运送：标本采集后应及时送检，2小时内进行接种，如不能及时送检，应在冰箱内保存。(7)注意事项：压疮溃疡拭子提供不了什么临床信息，因此不提倡。一般选择组织活检或针头抽吸标本。(8)结果判断：常见病原菌为革兰氏阴性杆菌、厌氧菌、表皮葡萄球菌、肠球菌属等。2.烧伤(1)采集指征：烧伤部位出现炎症，临床医师根据患者实际情况选择检测项目。(2)采集时间：在使用抗菌药物之前采集。(3)采集方法：清洁伤口，去除异物和坏死组织，吸取或擦拭渗出液。(4)采集量：尽可能多，如果要求定量培养，最好选34mm活检标本。(5)容器：用无菌器皿或拭子运送。(6)标本运送：标本采集后应及时送检，2小时内进行接种，如不能及时送检，应在冰箱内保存。(7)注意事项1)只进行有氧培养。2)定量培养可能有意义，也可能没有。烧伤表面细菌的培养结果可能会引起误导。(8)结果判断：抗菌药物问世前，乙型溶血性链球菌是烧伤感染最常见的病原菌；青霉素应用后，耐药性金黄色葡萄球菌逐渐成为主要致病菌；随着抗菌药物的进一步发展,耐药性的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌与肠杆菌科逐渐成为主要致病菌。七、其他部位感染标本留取方法L脑脊液及其他无菌体液标本的细菌学检查。脑膜炎在临床上是非常严重的疾病，常危及生命。依病原不同，脑膜炎可分为细菌性脑膜炎、真菌性脑膜炎及无菌性脑膜炎。临床上，并不易以病症将其加以区分。因此，抽取脑脊液做微生物检查为诊断的必要步骤。正常人体中，脑脊液是无菌的,在感染的情况下只要检出细菌，通常都可视为病原菌。无菌体液主要包括胆汁、穿刺液(胸腔积液、腹水、心包液、关节液、鞘液)等。正常人体中，上述体液均是无菌的，有感染的情况下只要检出细菌，通常都可视为病原菌。采集脑脊液标本是为了诊断脑膜炎。(1)采集指征：具有非其他已认识的原因所引起的头痛、脑膜征象、颈部僵直、脑神经征象、发热、体温过低、易受刺激等临床症状。此外，其他实验室检查可发现：脑脊液白细胞增加、蛋白质增加且葡萄糖减少等。(2)采集时间：怀疑为感染存在，应立即采集标本，最好在用药前，以最严格的无菌技术做腰椎穿刺，所收集的脑脊液分置于3根无菌试管内，然后马上将第二根(或第一根)送至检验室。(3)标本量：采集35ml脑脊液于3支无菌试管中，每支试管至少12ml,整个过程需以最严格的无菌操作技术进行。做脑脊液培养时，建议同时做血培养。(4)标本运送：置于无菌密封容器内立即送检，并且保温(禁止放于冰箱内，因脑膜炎双球菌遇冷死亡)。某些细菌具有自溶酶，放置时间过长易自溶死亡，实验室收到标本后应立即接种。2.生殖道标本(1)采集指征：出现发热、乏力、食欲缺乏等全身症状伴有皮肤黏膜损害。男性有尿痛、尿频、尿急、尿道分泌物增多、会阴部疼痛、阴囊疼痛、性功能障碍、泌尿生殖器畸形和缺损。女性有阴道分泌物增多及性状异常、尿道口瘙痒、脓性分泌物流出、下腹疼痛、月经失调、阴道出血、外阴瘙痒、外阴或阴道疼痛、性功能障碍等。(2)采集时间：在使用抗菌药物之前采集。(3)采集方法男性前列腺：用肥皂和水清洗阴茎头，通过直肠按摩前列腺，用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内。男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm,旋转拭子，至少停留20秒，而使之容易吸收。女性阴道：擦除过多的分泌物和排出液，用2支无菌拭子从阴道穹隆部黏膜处获取分泌物。一支涂片，一支拭子做培养。(4)采集量：尽可能多取。(5)标本运送：常温2小时内送检，淋病奈瑟菌需保温送检，衣原体、支原体等培养无法及时送检时应4。C保存。3.眼、耳部标本(1)采集指征：眼、耳部出现各种急慢性炎症。(2)采集时间：在使用抗菌药物之前采集。(3)采集方法内耳：接触耳鼓室先用肥皂水清洗耳道，再用注射器收集液体，对破裂的鼓室，借助耳科诊视器，用拭子收集液体。外耳：用湿拭子将耳道的任何碎屑或痂皮拭去，在外耳道用力旋转拭子取样。眼部：分别用(无菌盐水预湿)拭子绕结膜取样，将拭子涂抹在两个玻片上染色。眼部标本建议在床边直接接种或涂片。(4)采集量：尽可能多取。(5)标本运送：耳部标本常温2小时内送检。眼部标本应15分钟送检。第三节主动筛查一、主动筛查的对象L重症监护病房的患者。往往存在重症感染。抗菌药物的长期使用，使重症监护病房的患者容易被分离到耐药菌,给治疗带来困难。侵入性操作，如呼吸机、中心静脉导管、导尿管的使用使正常的保护性屏障受到破坏，人体内的正常菌群成为致病菌，造成患者感染。耐药菌在重症监护病房的传播和定植，也可能成为感染源。故在重症监护病房进行主动筛查，对于区分医院感染和社区感染，了解病人携带的正常菌群非常重要；为重症监护病房的患者预防相应部位的感染发生尤为重要。2 .免疫力极度低下，需进行保护性隔离的患者。免疫力极度低下，特别是进行骨髓移植的患者，白细胞几乎只有几个。不同部位的正常菌群都可能成为患者的致病菌。为避免此类患者感染，常规主动筛查显得更为重要。在患者发生感染，查不到致病菌时，常规主动筛查得到的细菌可作为感染治疗的参考。3 .工作人员。在医院感染暴发时，对医务人员可进行主动筛查，排除因医务人员鼻咽部致病菌定植造成的交叉感染。在医院感染高危科室，如手术室、婴儿室、母婴室等，可进行工作人员主动筛查，对于存在病原菌定植的医务人员给予脱污染及脱污染后复查。二、采样方法与范围主动筛查主要以各正常人体部位的拭子采样为主，用蘸有无菌生理盐水的棉拭子，在鼻腔、咽部、阴道、肛门等部位进行采样，置于无菌容器中及时送检。也有报道称额头、耳蜗分离到的耐药菌，可能成为重症监护病房患者感染的病原体。由于可进行主动筛查的人体部位很多，所以需根据患者疾病情况采集主要的部位，常见采样部位为鼻咽拭子，其检出菌可能成为呼吸系统内源性感染的病原菌。入院48小时内的主动筛查，对于区分医院感染尤为重要。第四节厌氧培养标本的采集一、标本采集与运送标本的采集与运送是否适当，对厌氧培养能否成功至关重要。需注意：严格无菌操作；标本不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。下列标本通常不宜做厌氧菌培养：鼻咽拭子、齿龈拭子、痰和气管抽取物、胃和肠道内容物、肛拭、接近皮肤和黏膜的分泌物、压疮溃疡及黏膜层表面、排出的尿或导尿、阴道或子宫拭子、前列腺分泌物。采集标本时应尽量避免接触空气，多采用针筒抽取，减少标本与空气接触的机会。抽取时穿刺针头应准确插入病变部位的深处，一般抽取数毫升即可。抽出后可排出1滴标本于酒精棉球上。若病灶处的标本量较少，则可以先用针筒吸取InIl还原性溶液或还原性肉汤，然后再抽取标本。二、厌氧菌感染的临床特征凡有下列情况者应怀疑有厌氧菌感染：(1)感染组织局部产生大量气体：某些厌氧菌可产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发音，通常是产气荚膜菌感染的特征。(2)感染部位多发生在黏膜附近：口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等黏膜，均有大量厌氧菌寄生，这些部位及其附近有破损者，极易发生厌氧菌感染。(3)深部外伤，如枪伤后、人或动物咬伤后的继发感染。(4)分泌物有恶臭或为暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。发红色荧光的分泌物，可能有产黑色素普鲁沃菌和不解糖紫单胞菌；分泌物或脓汁中有硫黄颗粒，为放线菌感染。(5)长期应用氨基糖甘类抗生素治疗无效的病例、新近有流产史者，以及胃肠手术后发生的感染，均有可能是厌氧菌感染。(6)分泌物涂片经革兰氏染色镜检发现有细菌，而常规培养阴性者；或在液体及半固体培养基深部长的细菌，均可能为厌氧菌感染。