2024高铁血红蛋白还原试验及临床意义.docx

2024高铁血红蛋白还原试验及临床意义原理高铁血红蛋白还原试验(methemoglobinreductiontest,MHb-RT)是在待检血液中加入亚硝酸盐，使红细胞中的亚铁血红蛋白转变成高铁血红蛋白(MHb)。当红细胞内的G-6-PD正常时，可催化磷酸戊糖旁路代谢，生成足够的还原型辅酶I(NADPH),其脱下的氢通过递氢体亚甲蓝和MHb还原酶的作用，使高铁血红蛋白还原成亚铁血红蛋白，溶液从暗褐色变为红色。当红细胞G-6-PD缺乏时，NADPH生成减少或缺乏，MHb不被还原或还原速度显著减慢。MHb呈褐色，在635nm波长处有吸收峰，通过比色法计算MHb还原率，可间接反映红细胞内G-6-PD的活性。检测方法1.试剂1.018molL亚硝酸钠和028molL葡萄糖混合溶液：亚硝酸钠1.25gx葡萄糖5.0g、蒸水溶解并加至100ml,贮存于棕色瓶中，放4。C冰箱，可保存1个月。2.0.4mmolL亚甲蓝溶液：亚甲蓝(含3个结晶水)0.15g,蒸储水加至100ml。先将亚甲蓝放人乳钵中,加蒸储水少量研磨彳寺溶解后移到IOoml容量瓶中，再加蒸储水至IoOmI,混匀过滤,此液可贮存3个月。3.0.02molL磷酸盐缓冲液：(PH7.4)磷酸氢二钠229.5mg、磷酸二氢钾52.2mgx蒸留水加至IoOmI。或用0.0667m。/LPH7.4磷酸盐缓冲液稀释3倍。4.109mmolL枸橡酸钠溶液(32gL)2.操作1 .在试管中加入葡萄糖20mg,109mmolL酸钠溶液0.2ml,静脉血1.8mlz混匀。2 .离心15分钟，取出，调整血细胞与血浆比例为1:1后再混匀。3 .取上述抗凝血1ml,加亚硝酸钠葡萄糖混合溶液和亚甲蓝溶液各0.05ml,颠倒混合15次使与氧气充分接触加塞后放37。C水浴或孵箱中3小时。4 .孵育后混匀，取血0.1ml,加PH7.4磷酸盐缓冲液IOml,混匀，2分钟后在波长635nm处测定吸光度(设为SA)5 .空白对照,用未加亚硝酸钠葡萄糖的血液同样孵育后取01ml,加pH7.4磷酸盐缓冲液Ioml,2分钟后测定吸光度为Bo然后加人亚硝酸钠葡萄糖混合溶液1滴，混匀，5分钟后再测其吸光度为ST此为高铁血红蛋白对照3.结果计算高铁血红蛋白还原率(%)=1-(SA-B)(ST-B)x100(%),式中：SA-B、ST-B分别为还原后和还原前高铁血红蛋白的吸光度；SA-B/ST-B为还原后剩余高铁血红蛋白的比值。参考区间注意事项1 .测定吸光度时分光光度计的波长应准确,一般ST应大于B8倍以上。2 .贫血患者应将血细胞比容调整至0.35-0.40比容过低，则高铁血红蛋白还原率显著降低，可出现假阳性结果。3 .细菌污染可产生亚硝酸盐而造成假阳性，应保证试管等器材无菌。4 .试验的特异性和敏感性不是很理想,不稳定血红蛋白、HbH,高脂血症等均可出现假阳性结果。5 .标本加入缓冲液后混浊可影响比色，可离心用上清液比色。6 .血液孵育应选用枸橡酸钠或ACD液，标本可保持1周左右。7 .抗凝剂比例也应注意如ACD量太多，PH降低可使高铁血红蛋白还原速度减慢，出现假阳性结果。因草酸盐具有还原性，不宜作抗凝剂。临床意义本试验简便易行，对G-6-PD活性减低或缺乏检测具有较高的敏感度，是G-6-PD缺乏的筛查试验之一。G-6-PD缺乏时,高铁血红蛋白还原率下降，见于蚕豆病、服用某些药物（如伯氨喳、磺胺药、抗疟药、硼类药）后药物性溶血性贫血、感染等。G-6-PD中间缺乏（杂合子型），外周血高铁血红蛋白还原率为31%74%,脐血为41%76%;G-6-PD严重缺乏（半合子或纯合子型），外周血高铁血红蛋白还原率常30%,脐血40%。参考文献：口尚红,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程（第4版）M.北京:人民卫生出版社，2019.川彭明婷.临床血液与体液检验（第1版）M北京:人民卫生出版社,2017.2夏薇,陈婷梅.临床血液学检验技术M.北京人民卫生出版社，2015.