SN_T1496-2023进出口化妆品中生育酚及α-生育酚醋酸酯的测定.docx

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1、ICS71 100 70CCS Y42SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T14962023代替SN/T14962004进出口化妆品中生育酪及a-生育酪醋酸酷的测定DeterminationoftOcOpherOIanda-tcpherylacetateinCOsmeticsfrimprtandexprt2024-07-01 实施2023-12-29发布中华人民共和国海关总署发布刖三本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替SN/T1496-2004化妆品中生育酪及d-生育酪醋酸酷的检测方法高效液相色谱法，与SN/T14

2、962004相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：增加了第一法液相色谱-串联质谱法（见第4章）；更改了第二法高效液相色谱法的反相色谱分离条件（见5.4.2.1,2004年版的5.3.1）；一一更改了第二法高效液相色谱法的反相色谱分离条件；将第二法高效液相色谱法中的邻衍二甲酸二正辛酷内标定量法更改为用外标法定量（见5.4.2.2,2004年版的5.3.3）；更改了样品前处理方法（见5.4.1,2004年版的5.1）请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口O本文件起草单位：厦门海关技术中心。本文件主要起草人：赖莺

3、、杨泽、骆劲松、林容、董清木、黄后廷、黄宗平、杨志鸿。本文件于2004年首次发布，本次为第一次修定o进出口化妆品中生育酪及a-生育酪醋酸酷的测定1范围本文件规定了进出口化妆品中生育酪及d-生育酪醋酸酷的液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱-二极管阵列检测器法。本文件适用于进出口化妆品中生育酪及以生育酪醋酸酷的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义

4、。4第一法液相色谱-串联质谱法4. 1原理样品经丙丽或乙睛提取，用液相色谱-串联质谱法测定和确证，d-生育酪采用内标法定量，其余目标物采用外标法定量。4.2. 剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水4.3. 1乙睛色谱纯。4.4. 2丙丽:色谱纯。4.5. 3甲醇:色谱纯。4.6. 4乙酸:优级纯。4.7. 5d生育酪(MTocopheroI,CAS号10191-41-0):纯度95%。4.8. 6生育酪(0-ToCOPherol,CAS号148-03-8):纯度95%。4.9. 7Y生育酪(KToCOPherol,CAS号54-28-4):纯度95%。

5、4.10. 生育酪(5-TOCOPherOl,CAS号119-13-1):纯度95%。4.11. d生育酪醋酸酷(O-Tocopherylacetate,CAS号58-95-7):纯度95%。4.12. 10d生育酪d6(d-Tocopherol-d6,CAS号113892-08-3):纯度95%4.13. 110.1%乙酸甲醇溶液：11_甲醇(4.2.3)中加入ImL乙酸(4.2.4),混匀。4.14. 120.1%乙酸溶液:IL水中加入ImL乙酸(4.2.4),混匀。4.15. 13内标储备液(100oOmgL):准确称取d-生育酪-d6(4.2.10)0.10g(精确到0.0001g),

6、置于IOmL容量瓶中，用丙雨(4.2.2)溶解并定容。一18节以下保存，溶液有效期6个月。4.16. 14内标工作液：移取适量的内标储备液(4.2.13),用乙睛(4.2.1)逐级稀释成IOmg/L的标准内标工作液o18节以下保存，有效期3周。4.17. 2.15标准储备液(IoOOOmgL):准确称取d生育酪(425)、生育酪(426)、Y生育酪(427)、生育酪(428)和d生育酪醋酸酷(429)各0.10g(精确到0.0001g),置于IOmL容量瓶中，用丙雨(4.2.2)溶解并定容。一18节以下保存，溶液有效期6个月。4.18. 16标准中间液：移取适量的标准储备液(4.2.15),用

7、乙睛(4.2.1)逐级稀释成IOmg/L的标准中间液。一18节以下保存，有效期3周。4.19. 17标准工作溶液：分别移取适量标准中间液(4.2.16)和内标工作液(4.2.14),用乙睛(4.2.1)稀释成含50gL内标的10gL20gL50gL100gL200gL500gL的标准工作溶液.临用时配制。4.20. 18有机相滤膜：0.22m04.3仪器和设备4.21. 1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有APQ离子源。4.21.2 子天平：感量0.0001go4.21.3 涡混合器。4.21.4 心机：转速不低于5000rmin4.21.5 声波清洗器：超声输入功率800W,超声频率40K

8、Hz,可控温最高温度不低于60节4.22. 步骤4.23. 1提取4.24. 1.1液体油状化妆品称取经混匀后的试样约0.2g(精确到0.00Olg),准确加入50PL内标工作液(4.2.14),置于IomL具塞比色管，用丙雨(4.2.2)稀释至刻度在旋涡混合器上混匀后，超声波落取15min,转移至IOmL具塞离心管，以5000rmin的速度离心8mino准确移取上清液ImL,氮气吹干，准确加入ImL乙睛(4.2.1)溶解,一18节以下冷冻4h,5000rmin冷冻离心5min除油,上清液过0.22Pm滤膜(4.2.18)后进行液相色谱-串联质谱测定.4.25. 1.2固体蜡状化妆品称取经混匀

9、后的试样约0.2g(精确到0.000Ig),准确加入50L内标工作液(4.2.14),置于IOmL具塞比色管，用乙睛(4.2.1)稀释至刻度。在旋涡混合器上混匀后，(355)节超声波落取25min,转移至IOmL具塞离心管，以5000rmin的速度离心8min上清液于一18节以下冷冻4h,5000rmin冷冻离心5min除油，过0.22m有机相滤膜(4.2.18)后进行液相色谱-串联质谱测定。4.26. 1.3其他化妆品(不包含精油)称取经混匀后的试样约02g(精确至J0.0001g),准确加入50L内标工作液(4.2.14),置于IOmL具塞比色管,用乙睛(4.2.1)稀释至刻度。在旋涡混合

10、器上混匀后，超声波落取15min,转移至IOmL具塞离心管，以5000rmin的速度离心8min,上清液过0.22m滤膜(4.2.18)后进行液相色谱-串联质谱测定。24.4.2测定4.4.2.1色谱参考条件由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不能给出色谱/质谱分析的普遍参数下列参数已被证明对测试是合适的.a)色谱柱：五氟彳杆基柱，10OmmX2.1mm(内径)，1.9m,或相当者；b)柱温：20节；c)进样量:2L;d)流动相：A-0.1%乙酸溶液(4.2.12),B-0.1%乙酸甲醇溶液(4.2.11);e)梯度洗脱条件见表1；f)流速：03mLmin0表1液相色谱梯度洗脱条件时间min流

11、动相B体积分数/%流动相A体积分数/%087131871349010610007.510007.687134.4.2.2 质谱参考条件由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不能给出色谱/质谱分析的普遍参数.下列参数已被证明对测试是合适的APCl离子源参数见表2,监测离子对、碰撞能量等见表3。表2大气压下化学电离(APCI)离子源参数参数设定值干燥气温度/节325气化室温度/节350干燥气流量/(Lmin)10雾化气压力psi40毛细管电压/V2000(+)电晕电流A10表3待测物质的监测离子对和碰撞能量物质名称母离子m/碰撞诱导解离电压V子离子m碰撞能量CEV电离方式d-生育酪431.41311

12、65a22APCI(+)136.940APCI()0-生育酪417.4124150918APCI(+)6940APCI()Y-生育酪417.4124150.9a18APCI(+)6940APCI(+)15-生育酪403.2108137a18APCK+)80.856APCI(+)力生育酪乙酸酷473.3135207.2a16APCI(+)164.840APCI(十)定量离子.4.4.2.3 定性测定按照上述条件测定试样和标准工作溶液，如果试样的质量色谱峰保留时间与标准品一致，允许偏差小于2.5%；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表4规定的范围，则

13、可判断样品中存在相应的被测物。表4定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度%5020501020SlO最大允许偏差%202530504.4.2.4 定量测定d-生育酪采用内标法定量，以其峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标，质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线。其余目标化合物采用外标法定量，以各物质的峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线。标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内，如果含量超过标准曲线范围，应用乙睛(4.2.1)稀释到适当质量浓度后分析。在上述色谱条件下，标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见附录A中图A.l04.4.2.5 空白试验除不加试样外，均

14、按上述操作步骤进行。4.4.2.6 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定O4.5 结果计算按公式(1)计算试样中待测物质的含量o式中：X试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克(mgkg);P样液中待测物质的质量浓度，单位为微克每升(gL);Po空白试验待测物质的质量浓度，单位为微克每升(gL);Y样液最终定容体积，单位为毫升(mL);m试样质量,单位为克(g)；f稀释因子O计算结果保留三位有效数字。化妆品中生育酪总含量为a-生育酪、-生育酪、X生育酪、生育酪含量之和。4.6 定量限本方法对生育酪的定量限为L25mgkg,对a-生育酪醋酸酷的定量限为0.25mgkgo4.7 精密度4.

15、8 .1重复性同一操作者用同一仪器在恒定的实验条件下对同一个测定物质按正常和正确的实验方法操作，获得的两个连续测定结果之间的差不大于这两个测定值的算术平均值的10%。4.9 .2再现性在不同实验室，由同一人员使用相同设备，按相同的测试方法，对同一被测对象两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%5第二法高效液相色谱-二极管阵列检测器法5. 1原理样品经丙丽或乙睛提取，用带二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定，根据其保留时间和紫外吸收光谱定性，外标法定量。5.2 试剂和材料除以下列出的试剂和材料，其余同4.2o标准工作溶液:移取适量标准储备液(4.2.15),用乙睛(4.2

16、.1)逐级稀释成0.5mgL100mgL的标准工作溶液。一18节以下保存，有效期2周3周。5.3 仪器和设备5.3.1高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器。5.3.2电子天平:感量0.0001g.5.3.3旋涡混合器。5.3.4离心机：转速不低于5000rmin5.3.5超声波清洗器：超声输入功率800W,超声频率40KHz,可控温最高温度不低于60节。5.4分析步骤5.4.1提取5.4.1.1液体油状化妆品称取经混匀后的试样约05g（精确到0.0001g）,置于IOmL具塞比色管，用丙雨（4.2.2）稀释至刻度。在旋涡混合器上混匀后，超声波落取15min,转移至IomL具塞离心管,以5000

17、rmin的速度离心8min准确移取上清液ImL,氮气吹干，准确加入ImL乙睛（421）溶解，一18节以下冷冻4h,5000rmin冷冻离心5min除油，上清液过0.22m滤膜（4.2.18）后进行液相色谱测定。5.4.1.2固体蜡状化妆品称取经混匀后的试样约0.5g（精确到0.0001g）,置于IomL具塞比色管，用乙睛（4.2.1）稀释至刻度。在旋涡混合器上混匀后，（355）节超声波落取25min,转移至IOmL具塞离心管，以5000rmin的速度离心8min上清液于一18节以下冷冻4h,5000rmin冷冻离心5min除油，过022m有机相滤膜（4.2.18）后进行液相色谱测定。5.4.1

18、.3其他化妆品（不包含精油）称取经混匀后的试样约05g（精确到0.0001g）,置于IOmL具塞比色管，用乙睛（421）稀释至刻度。在旋涡混合器上混匀后，超声波落取15min,转移至IomL具塞离心管，以5000rmin的速度离心8min,上清液过0.22m有机相滤膜（4.2.18）后进行液相色谱测定。5.4.2测定5.4.2.1色谱参考条件由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不能给出色谱分析的普遍参数。下列参数已被证明对测试是合适的。a）色谱柱：五氯衙基柱，25OmmX4.6mm（内径）,5m,或相当者；b）柱温：室温；c）进样量：20pL;d）流动相及梯度洗脱条件：见表5;e）流速:ImL

19、/min;f）检测器扫描范围：190nm-600nm;g）测定波长：生育酪292nm,生育酪乙酸酷285nm0表5液相色谱流动相及梯度洗脱条件时间min甲醇体积分数/%水体积分数/%0752517525169010表5液相色谱流动相及梯度洗脱条件(续)时间/min甲醇体积分数/%水体积分数/%20100023100023.175255.4.2.2 定量测定以目标化合物的峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线，外标法定量。标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内，如果含量超过标准曲线范围，应用乙睛(4.2.1)稀释到适当质量浓度后分析。在上述色谱条件下，标准溶液的高效

20、液相色谱图见附录B中图B.15.4.2.3 定性确认进行样品测定时，如果检出的目标化合物的保留时间与标准物质一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收光谱与标准物质的紫外吸收光谱相一致，则可初步确认样品中存在该目标化合物o必要时，阳性样品需要第一法液相色谱-串联质谱法”进行确认。在上述色谱条件下，标准溶液的在线紫外吸收光谱见图B.2。5.4.2.4 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。5.4.2.5 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定O5.5结果计算按公式(2)计算试样中待测物质的含量X,(2)m式中：xi试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克(mgkg);P样

21、液中待测物质的质量浓度，单位为毫克每升(mgL);Po空白试验待测物质的质量浓度，单位为毫克每升(mgL);Y样液最终定容体积，单位为亳升(mL);m一一试样质量，单位为克(g)；f稀释因子。计算结果保留三位有效数字o化妆品中生育酪总含量为a-生育酪、G-生育酪、K生育酪、(5-生育酪含量之和。5.6定量限本方法对水、乳、膏霜、粉状化妆品中生育酪和a-生育酪醋酸酷的定量限分别为IOmgkg和30mgkg,对液体油状和固体蜡状化妆品中生育酪和/生育酪醋酸酷的定量限分别为20mg/kg和60mgkg5.7精密度5.7.1重复性同一操作者用同一仪器在恒定的实验条件下对同一个测定物质按正常和正确的实验

22、方法操作，获得的两个连续测定结果之间的差不大于这两个测定值的算术平均值的10%o5.7.2再现性在不同实验室，由同一人员使用相同设备，按相同的测试方法，对同一被测对象两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%。附录A（资料性）标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图见图A.1Lmmimu evf 30. O ,SulnouCtz-Sxo -IC3标引序号说明：1生育酪；2B生育酪和y生育酪；3a生育酪；4a生育酪-d6;5a生育酪乙酸酷；6总离子流.图A.1标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图附录B（资料性）标准溶液的高效液相色谱图和紫外吸

23、收光谱图标准溶液的高效液相色谱图、紫外吸收光谱图分别见图B.1和图B.20820000-0002-0006-0006300400SOO60078089810001100120013001400158160017001900XOO2100220023002400258MoO27000012标引序号说明：1生育酪；2 /3生育酪；3 Y生育酪；4a生育酪；5a生育酪乙酸酷。图B.1标准溶液的高效液相色谱图19.川9生育由0.0410.020.00420.357比生育的“0.02,、o.ol7一20.751厂生肓酚0.063”040.020.004_21. M6a-生育党0.081.4o06A.0.04、0.02X.0.001、-22. 535-生向脱乙BMft0.30-50.20-3V0.10-0.001，-296.55.3-296.5_291.7284.6220.00240.00260.00280.00标引序号说明1 b生育酪2 G生育酪3-y生育酪4 -a生育酪5 a-生育酪乙酸酷300.00320.00340.00360.00380.00nm图B2生育酪异构体和a-生育酪乙酸酷的在线紫外可见吸收光谱图