第六章体液葡萄糖检验.ppt.ppt

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1、,第六章 体液葡萄糖检验,第一节 糖代谢及调节,血糖的概念,血糖是指血液中的糖,正常人血液中的糖主要是葡萄糖,且测定血糖的方法也主要是检测葡萄糖,血糖是指血液中的葡萄糖。参考值:3.9-6.1mmol/L,（一）、血糖的来源与去路,胃肠,肝脏,血糖3.9-6.1mmol/L,肾,消化,吸收,肝糖元分解,糖异生,其他单糖转化,组织摄取,有氧氧化,无氧酵解,合成糖元,转化成脂类,氨基酸和其他糖类或衍生物,供能,合成,转化,糖尿,超过肾糖阀8.9mmol/L,来 源,去 路,（二）、血糖浓度的调节,神经系统的调节作用激素的调节作用肝脏在糖代谢调节中的作用,神经系统,激 素,肝 脏肌 肉脂肪等组织,酶

2、活性改变,神经调节,部位 1、下丘脑 2、自主神经（交感和副交感神经）方式：1、直接作用于肝脏；2、调节激素的分泌而影响血糖。,激素调节胰岛素,是一种胰岛细胞分泌的蛋白质激素降低血糖浓度的激素胰岛素胰岛素样生长因子升高血糖浓度的激素胰高血糖素肾上腺素生长激素皮质醇 甲状腺激素,肝脏调节,转运调控：肝细胞膜G 载体可允许G 快速转运，达到平衡时，肝内外G 浓度几乎相等。酶的双向调控功能途径：从器官水平通过神经-激素的作用，使肝细胞内各种糖代谢的酶活性改变。升糖调节1：具有活性很高的葡萄糖-6-磷酸酶，可促进肝糖原水解，补充和升高血糖。升糖调节2：肝脏具有活性高且易诱导的糖异生酶类，禁食或饥饿时能

3、将非糖物质转化为糖（占55-90%）。降糖调节：促进组织摄取葡萄糖，促进肝糖原合成、抑制肝糖原分解、抑制糖异生。,（三）糖代谢紊乱,糖尿病是一组由于胰岛素分泌不足或/和胰岛素作用低下而引起的代谢性疾病，其特征是高血糖症。糖尿病的长期高血糖将导致多种器官的损害、功能紊乱和衰竭，尤其是眼、肾、神经、心脏和血管系统。,尿糖：若血糖浓度高于肾糖阈值9.0mmol/L，即超过了肾小球滤过率，出现尿糖。,代谢紊乱症候群,典型症状：“三多一少”疲乏无力,多尿多饮多食体重减轻,临床表现,多 食,多 尿,皮肤干燥,饥 饿,视力下降,疲 倦,临床表现,糖尿病的分型,（根据2001年WHO“糖尿病专家委员会”关于糖

4、尿病分类的规定）,1 型糖尿病,2 型糖尿病,其他特殊类型的糖尿病,妊娠期糖尿病,糖尿病的病因学分类（2001年）,1型糖尿病 细胞破坏，导致胰岛素绝对不足-自身免疫性（占80%以上）-特发性2型糖尿病-胰岛素抵抗伴胰岛素分泌不足-胰岛素分泌不足伴/不伴胰岛素抵抗-特殊类型的糖尿病,1型和2型糖尿病的特点的比较,糖尿病的病因学分类（2001年）,特殊型糖尿病细胞功能基因异常胰岛素作用基因异常胰腺外分泌疾病内分泌疾病药物或化学制剂所致感染免疫介导的罕见类型可能伴有糖尿病的其他遗传综合征,妊娠期糖尿病(GDM)是指在妊娠期间任何程度的糖耐量减退或糖尿病发作，不论是否使用胰岛素治疗，也不论分娩后这一

5、情况是否持续。但糖尿病伴妊娠者不属此组。在分娩6周后，均应按复查的血糖水平和糖尿病诊断 标准重新确定为：糖尿病；空腹血糖损伤（IFG）；糖耐量减退（IGT）；正常血糖。其中多数GDM妇女在分娩后血糖可恢复正常。,妊娠期糖尿病,糖尿病的诊断标准（2001年）,二、血糖的测定方法及评价,标本的采集及处理1.标本类型：全血Glu血浆Glu浓度10-15%静脉Glu动脉Glu7%毛细血管Glu=静脉Glu（空腹），进食后则不一致建议：测定静脉血浆葡萄糖较为方便可靠,标本的采集及处理,2.采集时间、部位 可取空腹血，餐后2小时血，或随机血，但意义不同。对于住院病人尤其要注意采集部位,标本的采集及处理,3

6、.标本处理静脉血+2mg/ml草酸钾（EDTA或肝素）（抗凝）+2-5mg氟化钠/ml血（阻止糖酵解）新鲜采集的全血室温下最初酵解7%，以后的酵解则减慢，有白细胞增多或细菌时酵解增加。分离出的血清，25下稳定8小时，4下稳定72小时。建议：无防腐剂的全血必须在1小时内分离出血清或血浆，并及时测定。,使用不同的标本应采用不同的参考值,测定方法,1.氧化还原法(化学法)原理：葡萄糖的还原性而建立例如：铜还原法缺点：灵敏度差、特异性性差，易被干扰，现已被淘汰。2.缩合法原理：在热酸性溶液中，葡萄糖的醛基与芳香伯胺的氨基反应生成糖基胺，后者脱水生成蓝绿色希夫氏碱的衍生物，在630nm有最大吸收峰，其吸

7、光度大小与葡萄糖含量成正比，故可用于葡萄糖的定性分析。例如：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法等缺点：强酸溶液具有腐蚀性，芳香伯胺具有致癌性，故已少用。3.酶法原理：利用酶促反应专一性高、反应速度快等特点建立的血糖定性分析方法。例如：己糖激酶法（昂贵，少用）、葡萄糖氧化酶法优点:操作简单、试剂价廉，现被临检中心推荐。,酶法,1.己糖激酶法（法）原理：葡萄糖ATP 葡萄糖-磷酸ADP 葡萄糖-6-磷酸NADP G-6-PD-磷酸葡萄糖内酯+NADPH+H+NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。2.葡萄糖氧化酶法(GOD)原理：葡萄糖O2 GOD 葡萄糖酸内酯2O2

8、（1）氧速率法（2）葡萄糖氧化酶偶联比色法22O2+4-氨基安替比林+酚 POD 红色醌类化合物+2O+O2评价：操作简单，特异性较高，是血糖测定的首选方法但溶血、GSH、Vc、胆红 素，GSH可引起测定结果负偏差。,第二节 血清葡萄糖测定,【原理】,葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。,葡萄糖氧化酶法,葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡

9、萄糖,试剂组成:10.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)2酶试剂 3酚溶液 4.酶酚混合试剂512mmol/L苯甲酸溶液 65mmol/L葡萄糖标准液 7.100mmol/L 葡萄糖标准贮存液,操作步骤1 自动分析法 按仪器说明书的要求进行测定。2 手工操作法取试管 3 支，按下表操作。,混匀，置37水浴中，保温15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。,【计算】,【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 6.11mmol/L。,【临床意义】,1 生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。2 病理性高血糖(1)糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛

10、素绝对或相对不足的糖尿病患者。(2)内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引 起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素 增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。(3)颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。(4)脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。3 生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动。4 病理性低血糖(特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等)(1)胰岛 细胞增生或胰岛 细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和 甲状

11、腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。(3)严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调 节血糖。,葡萄糖氧化酶法,注意事项溶血标本血红蛋白的浓度达10g/L，黄疽标本胆红素浓度达342mol/L，维生素C小于30mg/L，均不影响测定结果。氟化钠浓度达2g/L不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达46.7mmol/L，尿酸浓度达2.95mmol/L，肌酐浓度达4.42mmol/L。半胱氨酸浓度达3.30mmol/L，甘油三酯浓度达5.6mmol/L，胆固醇4.40 mmol/L，对测定结果均无显著影响。,葡萄糖氧化酶法,方法评价:本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式

12、中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。,第三节 葡萄糖耐量试验,概念适应证操作方法临床意义,糖耐量试验,概念 耐糖现象、糖耐量增加、糖耐量降低糖耐量试验：口服或注射一定量葡萄糖后，每间隔一定时 间测定血糖水平，称为糖耐量试验。（GTT）,口服葡萄糖耐量试验（OGTT）静脉葡萄糖耐量试（IGTT）,适应症,（1）空腹血糖浓度在6.17.0mmol/L且疑为糖尿病患者（2）诊断为妊娠性DM（3）诊断糖耐量减退（4）临床上

13、出现肾病、神经病变和视网膜病而又无法作出 合理解释者。,操作方法,（1）病人准备：a.正常饮食，正常活动，试验前3天，每日饮食含糖不低于150g。b.试验前三天停服影响糖代谢的药物（咖啡因、速尿、氟哌啶）。c.试验前应空腹1016h。d.试验前和试验中，病人精神和身体都处于休息状态。e.整个试验期间，不可吸烟、喝咖啡和进食等。,（2）葡萄糖负荷量,成人将75g葡萄糖溶于250ml的温开水中，于5min内饮入；妊娠妇女用量为100g；儿童按1.75g/kg体重给予，最大量不超过75g,同样于5min内服完。,（3）标本的收集,试者在服糖前静脉抽血测空腹血糖。服糖后，每隔30min抽血样一次，共4

14、次。若疑为反应性低血糖症的病例，可酌情延长抽血时间（口服法延长至6h）。于抽血同时，每隔1h留取尿液作尿糖试验。,（4）参考值,空腹血糖6.1mmol；服糖后3060分钟血糖升高达峰值，一般10mmol；服糖后小时内恢复至空腹血糖水平。同时测定上述各时间的尿糖均为阴性。,临床意义,（1）糖尿病性糖耐量,a.空腹血浆葡萄糖浓度7.0mmol/Lb.葡萄糖峰值超过11.1mmol/L；尿糖（）c.延迟（2h以后）回复到空腹水平。此时重要的判断指标是服糖后2h血糖浓度仍然高于空腹水平。DM患者糖耐量曲线的最大特征是耐糖曲线延迟恢复到空腹水平。,（2）耐量增高型,其特点:为空腹血糖浓度正常或低于正常。

15、服糖后，血糖浓度在整个试验期间变化不大，不见血糖浓度以正常形式增高，呈平坦型耐量曲线。可见于:粘液性水肿、肾上腺皮质功能减退、垂体功能减退、胃排空延迟以及小肠吸收不良等。,（3）肾性糖尿,由肾小管重吸收功能降低，肾糖阈下降，致肾小球滤过液中正常浓度的葡萄糖不能完全重吸收，由此出现糖尿称肾性糖尿,第四节 糖化血红蛋白测定,糖化蛋白的测定,测定糖化蛋白可为较长时间段的血糖浓度提供回顾性评估，而不受短期血糖浓度波动的影响。因此，糖化蛋白浓度主要用于评估血糖控制效果，并不用于糖尿病的诊断。,GHb的形成,糖化血红蛋白（glycated hemoglobin,GHb）：在红细胞生存期间，HbA与血中已糖

16、（主要是葡萄糖）缓慢、连续的非酶促反应产物，为HbA合成后化学修饰的结果。形成特征：形成是不可逆的。浓度与红细胞寿命(120天)和该时期内血糖 平均浓度有关。,糖化血红蛋白,（四）糖化蛋白测定,HBA1a1*HbA(90%)HBA1a HBA1a2*Hb HbA1(7%)HBA1b HbA2(2.5%)HBA1c*为主 HbF,1、糖化血红蛋白A1,糖化血红蛋白A1为血红蛋白中2条链N端的缬氨酸与葡萄糖非酶化结合而成,其量与血糖浓度呈正相关,且为不可逆反应.,多种方法可用于GHb的测定：根据电荷差异，可用离子交换层析，高效液相色谱，常规电泳和等电聚焦电泳等方法：根据结构差异，可用亲和层析和免疫

17、测定法；基于化学分析技术，可用比色法和分光光度法。无管什么方法，结果都表示为GHb占总Hb的百分比。其中，化学分析技术已经使用很少。其他大多数方法都有良好的精密度，但存在测定组分上的差异。从简便实用出发，临床上常以Hb A1反映总的GHb水平。,GHb测定方法,层析法阳离子树脂交换层析法*：常规方法，精密度高、操作简便、受HbF正干扰；GHb 5-8%亲和层析：常规方法，灵敏度高、操作简便、高度特异、干扰少；GHb 5-8%、GHbA1 3-6%HPLC：参考方法,GHb测定方法,电泳琼脂糖凝胶电泳：快速、简便易行，受HbF正干扰等电聚焦电泳比色法化学比色法免疫透射比浊法*,GHb的参考范围,

18、临床意义：,、Hb反映测定前周内血糖的平均水平，故可作为糖尿病长期控制的良好指标。、可鉴别糖尿病性高血糖及应激性高血糖，前者 Hb水平多增高，后者正常。,第五节 血清糖化清蛋白测定,糖化血清白蛋白(GSP),形成机制与糖化血红蛋白相似，蛋白质的糖化主要发生在赖氨酸的-氨基上，糖化的白蛋白和其他蛋白质即称为果糖胺。,GSP测定方法,层析法：柱层析、亲和层析比色法：,临床意义：血清白蛋白比血红蛋白半衰期短，约为19天，测定Alb可有效反映患者过去23周内平均血糖水平，是糖尿病近期控制的一个指标。,第六节 其他体液葡萄糖测定,一、尿液葡萄糖（1）摄入性糖尿：摄入增多：摄入大量的糖类食品、饮料、糖液时

19、，可引起血糖短暂性增高而导致糖尿。输入性增多：静脉输注高渗葡萄糖溶液后，可引起尿糖增高。（2）应激性糖尿：由于情绪激动、脑血管意外、脑溢血、颅脑外伤等情况下，出现暂时性高血糖和一过性糖尿。（3）代谢性糖尿：由于内分泌激素分泌失常，糖代谢发生紊乱引起高血糖所致。最常见的是糖尿病。所以还得结合血糖检测，才能判断是否真的是糖尿病。,尿液葡萄糖测定方法,1.己糖激酶（HK）法2.葡萄糖氧化酶（POD）,注意事项,尿标本容易污染，其容器应在24h尿液收集前加入5ml冰醋酸或5g苯甲酸钾或双氯苯双胍乙脘+0.1%叠氮钠+0.01%氯化苯甲乙氧胺，并应4贮存。,二、脑脊液葡萄糖测定,脑脊液中含有一定量的葡萄糖，它相当于血糖的50%80%左右。当发生某些疾病波及到神经系统时，脑脊液中葡萄糖含量将发生相应变化。,脑脊液葡萄糖测定方法,葡萄糖氧化酶（POD）,临床意义：,（1）增多：多见于尿毒症、脑肿瘤，病毒性脑炎、乙型脑 炎、脊髓灰质炎、脑水肿、糖尿病等。（2）减少：多见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、流行性 脑脊髓膜炎、脑脓肿、梅毒性脑膜炎、低血糖等 参考值：成人：2.54.5mmol/L儿童：2.84.5mmol/L,注意事项,脑脊液可能会含细菌或其他细胞，因此应立即进行测定，否则标本离心后应冷藏于4或-20。,THE END,2009-02,