胃癌患者外周血CD4+T细胞lncRNA心肌梗死转录本表达水平及其意义.docx

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1、胃癌患者外周血CD4+T细胞IncRNA心肌梗死转录本表达水平及其意义胃癌发病率和死亡率在所有恶性肿瘤中位于前列，因其早期症状不明显，很多患者就诊时已发展到晚期，预后差1。临床上广泛用于辅助胃癌诊断及评估预后的血清肿瘤标志物有癌胚抗原(CarCinoen1.bryoniCantigen,CEA)和糖类抗原(CarbOhydrateantigen,CA)199,但灵敏度低，诊断效能不高。因此，需要更加可靠、敏感和特异的胃癌分子诊断标志物。CD4+T淋巴细胞是一类辅助型T细胞，在协调机体引发针对肿瘤的细胞免疫和体液免疫中起关键作用，其中调节性T细胞(regu1.atoryTCe1.1.,Treg)

2、越来越受到广泛关注2。近年的研究表明，胃癌患者的外周血Treg细胞水平高低与肿瘤患者的预后密切相关，其水平越高预示着临床分期越晚、预后越差，并可作为判断胃癌预后的独立因素3o长链非编码RNA(Iongno-codingRNA,IncRNA)心肌梗死转录本(myocardiaIinfarctio-associatedtranscription,MIAT)在多种肿瘤中异常表达，参与肿瘤的发生发展，并且能够在患者血清中检测到，可以作为潜在的肿瘤生物学标志物4,5,6o此外，InCRNAM1.AT在肝癌组织浸润的Treg细胞中高表达，参与了肝癌细胞的免疫逃逸7。胃癌细胞中，InCRNAM1.AT发挥癌

3、基因的作用促进癌细胞增殖和侵袭转移8,9;胃癌患者血清中，IncRNAMIAT水平显著升高，在胃癌的诊断和预后评估中具有一定的价值10o本研究通过检测分析了IncRNAMIAT在124例胃癌患者，90例胃良性疾病患者和80名健康对照者的外周血CD4+T细胞内的表达情况，评价其作为胃癌生物学标志物的可行性，为胃癌的临床辅助诊断提供依据，探索其与胃癌患者病情发生发展的关系。对象与方法一、对象1.胃癌组：收集2019年1月至2021年4月在江苏省泰州市人民医院就诊的124例胃癌患者，其中男84例，女40例；年龄(65.6511.49)岁。纳入标准：取材前患者尚未接受抗肿瘤治疗；经病理组织学确诊为胃癌

4、；无其他部位肿瘤。2 .胃部良性病变组：选取同期诊治的胃部良性病变患者90例，其中男51例，女39例；年龄(62.799.68)岁，其中慢性浅表性胃炎11例，糜烂性胃炎21例，萎缩性胃炎12例，胃溃疡18例，胃息肉26例，胃良性肿瘤2例。3 .健康对照组：选取同期80名本院体检中心的体检健康者作对照组，其中男45名，女35名；年龄(63.210.1)岁。健康志愿者均行胃镜检查，排除胃恶性肿瘤和良性病变。3组性别(2=3.84,P=O.147).年龄(F=2.292,P=O.103)等一般资料比较，差异无统计学意义。本研究经泰州市人民医院医学伦理学委员会批准（KY2019123）,所有受试者知情

5、同意。二、方法1.仪器与试剂:1.ightCyCIer480I1.实时荧光定量PCR仪（瑞士Roche公司）;i2000SR全自动化学发光仪（美国雅培公司）；转录试剂盒ReVertAidTM第一链CDNA合成试剂盒（美国Thermo公司）；MIAT和内参3-磷酸甘油醛脱氢酶（gIyceraIdehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH）荧光定量PCR上、下游引物（上海生工生物工程股份有限公司）；i2000SR全自动化学发光仪（美国雅培公司）；人淋巴细胞分离液（美国GE公司）；磁力架、CD4+磁珠及试剂盒、MS分离柱（德国Mi1.tenyiBiOteC公司）；Ch1

6、.P试剂盒（美国UpstateBiotechnoIogy公司）；抗m6A抗体（美国EMDMi1.1.iPOre公司）；ACS溶血素、单抗、鼠抗人CD4-多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物（CD4-Peridinin-Ch1.OrOPhy1.1.-PrOteincompIex,CD4-PerCP）、单抗、鼠抗人CD25-藻红蛋白（CD25-phycoerythrin,CD25-PE）、单抗、鼠抗人CD127-异硫氯酸荧光素（CD127-fIuoresceinisothiocyanate,CD127-FITC）以及其同型对照鼠抗人免疫球蛋白G-藻红蛋白/免疫球蛋白G-异硫氯酸荧光素（IgG-PE/Ig

7、G-FITC）抗体均为美国BD公司产品；流式上样管及FACSCa1.ibur型流式细胞仪均购自美国BD公司。2 .CD4+T淋巴细胞分选和鉴定：清晨空腹采集患者和健康者外周血各Ion1.I,加入淋巴细胞分离液，采用密度梯度离心法，分离患者和健康者外周血单一核细胞(peripheraIb1.oodmononucIearce1.Is,PBMC)o按照CD4+磁珠分选试剂盒产品说明书分选PBMC中的CD4+T淋巴细胞，分选后的每管细胞均采用流式细胞仪进行鉴定，其分选纯度均大于95%。3 .CD4+CD25+CD1271.ow-Treg检测：100I抗凝全血管内依次加进5I的鼠抗人CD4-FITC、C

8、D25-APC以及CD127-PE单抗，充分混匀，避光放置12min,加进1m1.溶血素10min,离心(500g5min)弃上清，加入300I的磷酸盐缓冲盐溶液(phosphatebufferedsa1.ine,PBS)悬细胞,放入流式细胞仪中开展检测。分别加进同种型号的鼠抗人CD4-FITC.IgGI-APC以及IgGI-PE单抗当作阴性对照。Treg水平采取CD4+CD25+CD1271ow-Treg于CD4+T细胞内的占比表示。4 .实时荧光定量聚合酶链反应检测：M1.AT上游引物为5,-Ggacgttcacaaccacactg-S,下游引物为5-TCCCACTTTGGCATTCTAG

9、Gy;GAPDH上游引物为5,-TgatgacatCAAGAAGGTGGTGAAG-3,下游引物为5,-Tccttggaggcccagtgggccat-S,。采用1.ightCyCIer480进行荧光定量PCR检测。反应体系：SYBRGreen1.荧光染料10I,cDNA3I,上游引物1I,下游引物1I,H205I,总体积20IoPCR反应条件为：95,5min,1个循环；95,15s；60,30s；72,30s,共40个循环。每个样本设2个复孔，结果取其均值。用2-AACt来表示MIAT的相对表达量，其中ACt二实验组(CtMIAT-CtGAPDH)-对照组(CtMIAT-CtGAPDH)。

10、5 .染色质免疫共沉淀联合定量聚合酶链反应(chromatinimmunoprecipitationquantitativepoIymerasechainreaction,Ch1.P-qPCR):使用Ch1.P-QPCR检测胃癌患者外周血与健康者外周血CD4+T细胞m6A与IncRNAM1.AT基因之间结合活性的变化。外周血CD4+T细胞甲醛固定后甘氨酸终止反应，裂解细胞后用超声破碎仪进行破碎，将染色质打断成2001000bp的片段。按照Ch1.P试剂盒的说明将裂解液与稀释缓冲液和蛋白A琼脂糖进行预孵育，留取对照放4冰箱保存备用，剩余部分分为2份，1份加入IgG抗体，另一份则加入等量的抗m6A

11、抗体，置于4C摇床颠倒混匀过夜。第2天，经过吸附、洗涤以及洗脱后进行逆交联，获得DNAo抽提纯化洗涤后，所得DNA溶于去离子H20中。定量PCR检测，所用引物为：上游引物5,-TGCACTGCTCCTGGATTCTG-3,下游引物5-CTGCTCTCTTGCAAACGCTG-3,。用2-ACt来表示m6A与M1.AT基因结合的水平,其中AACt=(Ctm6A-Ct1.nput)(CtIgG-CtInput)o6 .血清癌胚抗原(careino-embryonicantigen,CEA)和糖类抗原(carbohydrateantigen,CA)199含量检测：采用全自动化学发光仪发光法检测CEA

12、和CA199o7 .统计学分析：采用SPSS22.0软件进行统计分析和受试者工作特征(receivoroperatingcharacteristic,ROC)曲线生成。年龄等计量资料，符合正态分布的，用均数土标准差表示；3组间比较采用方差分析，其组内采用1.SD法进行两两比较；不符合正态分布的，用M(Q1,Q3)表示，3组间比较采用KrUSkaI-Wa1.IisH检验，胃癌、胃良性病变及健康对照各组外周血CD4+T细胞中MIAT的相对表达量其组内两两比较采用Bonferroni进行校正。胃癌组外周血CD4+T细胞中MIAT的相对表达量与临床病理特征间的相关性分析用X2检验，外周血CD4+T细胞

13、中MIAT的相对表达量与Treg细胞水平之间的相关性用Spearman检验。使用ROC曲线评估CD4+T细胞中MIAT对胃癌的诊断能力。P1.511(0.916,1.855)和0.963(0.729,1.432),3组间差异有统计学意义(H158.25,P0.001)。胃癌患者外周血CD4+T细胞中IncRNAMIAT的表达水平较胃良性疾病患者以及健康对照组明显上调，差异有统计学意义(Z=100.63,145.14,P均0.001)o胃良性疾病患者与健康对照者MIAT的相对表达量差异亦有统计学意义(Z=44.52,P=O.002)o二、胃癌组、胃良性病变组和健康对照组外周血CD4+T细胞m6A

14、与M1.AT基因结合活性的比较取健康者外周血CD4+T细胞基因组DNA,应用m6A抗体进行ChIP检测。CD4+T细胞中，m6A能够与所设计的MIAT基因片段相结合(图1)。进一步取胃癌组早期患者(I期)和晚期患者(IIIV期)各5例外周血CD4+T细胞基因组DNA.胃良性病变组5例患者外周血CD4+T细胞基因组DNA.健康对照者5例外周血CD4+T细胞基因组DNA,ChIP-QPCR检测m6A与MIAT基因结合情况。胃癌早、晚期患者CD4+T细中m6A与M1.AT基因启动子的相对结合活性分别为(8.5901.483)和(4.2740.425),差异有统计学意义(t=6.255,P=O.002

15、)；胃癌早、晚期患者m6A与M1.AT基因的结合活性显著低于胃良性病变患者(17.2673.106)和健康对照组(27.6373.945)(t=-7.331、-12.832,P均0.001)。bp2OOO1000750500250100注：1为DNA标准带，2为对照，3为IgG,4为m6A.m6A示6-甲基腺瞟岭；目的条带113bp图1m6A与MIAT基因启动子结合三、胃癌患者外周血CD4+T细胞MIAT相对表达量与临床病理特征的关系124例胃癌患者MIAT相对表达量与年龄(X2=0.000,P=1.000)、性别(2=0.000,P=1.000).CEA水平(2=0.6481二0.421)和

16、。A199水平(*2=1.554,P=0213)无关,在不同TNM分期(2=23.571,P=O.002)、不同肿瘤大小(2=9.443,P0.01).有无淋巴结转移(X2二45.248,P0.01)中差异有统计学意义，见表1。相关性分析表明，MIAT相对表达量与年龄之间(r2=0.0022,P=O.602)、MIAT相对表达量与CEA水平(r2=0.0004,P=O.798)均无相关性，MIAT相对表达量与CA199水平(r2=0.0783,P=O.002)呈正相关。表工胃癌患者外周血CD4+T细胞M1.AT的相对表达量与临床病理特征的关系临床病理特征例数M1.AT相对表达量M(Q1.,)X

17、2值年龄0.0001.00060322.839(2.208,4.260)60岁922.849(2.126,3.802)阚0.0001.00055842.849(2.144,3.682)女402.963(2.124,4.750)TNM分期23.5715cm553.394(2.467,4.918)淋巴结转移45.2480.01无492.126(1.673,2,653)有753.562(2.839,4.676)瘦胚抗原0.6480.4215g1.902.805(2.118,4.394)5g1.342.929(2.278,3.480)1.5540.21343k1.1052.814(2.126,4.05

18、0)43k1.193.289(2.441,4.282)注：CD4+T细胞为CD4阳性T淋巴细胞，M1.AT为心肌梗死转录本，TNM为肿瘤临床分期四、胃癌患者外周血CD4+T细胞M1.AT相对表达量与Treg细胞水平的相关性胃癌患者、胃良性疾病患者、健康对照者外周血CD4+CD25+CD1271.ow-Treg细胞占CD4+T细胞的比例分别为8.82(7.73,12.08)%,6.63(5.26,8.08)%和5.70(4.85,6.34)%,3组间差异有统计学意义(H=I32.85,P0.001)o胃癌患者外周血CD4+C外5+CD1271.ow-Treg细胞占CD4+T细胞的比例较胃良性疾病

19、患者以及健康对照组明显上调，差异有统计学意义(Z=87.66,134.88,P均0.001)o相关性分析结果显示，胃癌患者外周血CD4+T细胞M1.AT相对表达量与Treg细胞水平呈正相关(r2=0.76,P0.001),见图2、3o干。SSOO 0080s0302sIx IA 1 1200r0.,800 1 0 IO0 10 IO2 IOsCD4-FITCIO0IO01.0l IO2 IO5CD25-APCIO4100041Q4=IOSS2000.2004 600 800 1 000 IO0 10, IO2FSC-H CD4-FITCWIoa(1 ZI8,IO0104IO0 IO1 IO2

20、IO3 IO4方CD25-APC 200400 600 800 1 000 FSC-H00000086 4干OSSIO010 IO2 IO3 CD4-FITCIo2Io1g3zoo1.IO010, IO2 IO3 IO4 CD25-APC汪：2A2C为胃Ie组；2D2F为胃良性JS变组；2G2为健康对照组图2胃癌组、胃良性病变组和健康对照组外周血中CD4+CD25+CD1271ow-Treg表达水平Y=O.3492X-0.3487产二076“hWNIOP0.OO1.n=124O510152025Treg细胞水平()注：MIAT示心肌梗死转录本，Treg示调节性T细胞图3胃癌患者MIAT相对表达

21、量与Treg细胞水平的相关性五、ROC曲线分析胃癌患者、胃良性疾病患者、健康对照者血清CEA水平分别为3.02(1.81,5.14)、2.04(1.47,3.15)和1.49(1.15,2.18)g1.,胃癌患者、胃良性疾病患者、健康对照者血清CA199分别为7.97(4.09,25.02)、5.71(3.09,8.79)和5.39(3.85,7.35)k1.o将胃癌患者、胃良性疾病患者、健康对照者外周血CD4+T细胞MIAT相对表达量、CEA和CA199分别作ROC曲线。胃癌组和健康对照组比较，M1.AT最佳临界值为1.900,曲线下面积(theareaundertheCUrVe,AUC)为

22、0.953,95%CI为0.9250.80,敏感度和特异度分别为86.29%和95.00%；CEA的临界值为2.605g1.,AUC为0.784,敏感度和特异度分别为56.45%和90.00%;CA199的临界值为7.885g1.,AUC为0.598,敏感度和特异度分别为42.74%和85.00%,3项指标联合检测AUC为0.962,敏感度和特异度分别为87.90%和97.50%,见图4。胃癌组和胃良性疾病组比较,MIAT最佳临界值为2.078,AUC为0.879,95%CI为0.8330,925,敏感度和特异度分别为81.45%和84.44%；CEA的临界值为2.615g1.,AUC为0.6

23、35,敏感度和特异度分别为56.45%和68.89%；CA199的临界值为8.68g1.,AUC为0.611,敏感度和特异度分别为40.32%和80.00%；3项指标联合检测AUC为0.898,敏感度和特异度分别为83.87%和83.33%,见图5。-MIAT-CEA-CA1993项指标联合参考线0.20.40.60.81.01-特异度0.80.6蚂德懈0.40.2注：RoC曲找为受试者工作特征曲戊，M1.AT为心肌梗死转录本，CEA为唐胚抗原，CA199为糖类抗原199图4胃癌组和健康对照组比较各指标ROC曲线00.20.40.60.81.01-特异度注：RoC曲筏为受试者工作特征曲缘M1.

24、AT为心肌粳死H录本，CEA为癌胚抗风CA199为M类抗原199图5胃癌组和胃良性病变组比较各指标ROC曲线胃癌组和健康对照组诊断效能比较发现，单项指标中CD4+T细胞M1.AT相对表达量的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值和AUC最高；MIAT联合CEA检测敏感度最高；3项指标联合检测特异度和AUC均高于单项指标和两项指标联合检测，见表2。胃癌组和胃良性疾病组诊断效能比较发现，单项指标中CD4+T细胞M1.AT相对表达量的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值和AUC最高；MIAT联合CEA检测特异度最高，MIAT联合CA199检测敏感度和准确度最高；3项指标联合检测AU

25、C高于单项指标和2项指标联合，见表3。胃癌组和非胃癌组（健康对照组与胃良性疾病组合并）诊断效能比较发现，单项指标中CD4+T细胞M1.AT相对表达量的敏感度、准确度、阳性预测值、阴性预测值和AUC最高；MIAT联合CA199检测阴性预测最高；2项指标联合以及3项指标联合检测的敏感度均最高，3项指标联合检测AUC高于单项指标和2项指标联合，见表4。表2健康对照组各指标与胃癌诊断效能的比较标志物敏感度（%）特异度（%）准确度（“）阳性预测值（）阴性预测值（%）曲或下面枳MIAT86.2995.0089.7196.4081.720.953CEA56.4590.69.6189.7457.140.784

26、CA19942.7485.0059.3181.5448.920.598MIAT+CEA89.5295.96.5796.5286.870.965MIAT+CA19987.9097.5091.6798.2083.870.9603项指标联合87.9097.5091.6798.2083.870.962注：M1.AT为心肌梗死转录本，CEA为施胚抗原，CAI99为塘类抗原199表3胃良性疾病组各指标与胃癌诊断效能的比较标志物敏感度（）特异度（%）准确度（%）阳性预测值（%）阻性颈测值（%）曲或下面积MIAT81.4584.4486.7687.8376.770.879CEA56.4568.8964.717

27、1.4353.450.635CA19940.3280.0059.8073.5349.320.611MIAT+CEA81.4584.4486.7687.8376.770.879MIAT+CA19985.4882.2288.2486.8980.430.8953项指标联合83.8783.3387.7587.3978.950.898注：MIAT为心肌慢死转录本，CEA为癌胚抗原，CA199为糖类抗原199表4非胃癌组各指标与胃癌诊断效能的比较标志物敏唠(%)特异度(%)准确度(%)阳性预测值()阴性预测值(%)曲线下面积MIAT91.1363.5375.1764.5790.760.914CEA58.8

28、770.5965.6559.3570.180.705CA19950.0062.3557.1449.2163.100.605MIAT+CEA94.3554.1271.0960.92.930.924MIAT+CA19994.3554.7171.4360.3193.000.9263项指标联合94.3554.1271.0960.92.930.928注：MIAT为心肌梗雌录本，CEA为鹿胚抗原，CA1.99为猜类抗原199讨论胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，其发生发展除了与基因、遗传以及环境因素有关外，还与患者自身的免疫状态密切相关。机体的免疫系统对肿瘤发生具有“监视”作用，能及时清除发生恶性转化的细胞，防

29、止肿瘤形成；肿瘤形成后，机体免疫系统能够识别肿瘤抗原，引发非特异性和特异性免疫反应，从而抑制肿瘤的生长和转移。机体针对肿瘤引发的免疫反应包括细胞免疫和体液免疫，CD4+T细胞在协调这两种免疫反应中发挥关键作用11o在胃癌发生过程中，往往出现调节性CD4+T细胞的免疫抑制功能过强，导致肿瘤细胞的免疫逃逸12o近些年来的研究表明，有多种IncRNAs在CD4+T细胞分化中发挥重要作用，从而参与机体抗肿瘤的相关免疫反应:如IncRNAP0U3F3.IncRNARP11-323N12.5YAP1以及IncRNARP1.1.-357H14.17通过促进CD4+T细胞向调节性T细胞分化，发挥免疫抑制和促胃

30、癌生长的作用13,14,15。因此，与CD4+T细胞相关的IncRNA在胃癌发生发展的作用受到广泛关注。Ir1.CRNAM1.AT最先在心肌梗死的患者中发现，其表达异常增加患者心肌梗死的易感性4o近年来的研究发现，InCRNAM1.AT在多种肿瘤中异常表达，参与肺癌、胰腺癌等肿瘤的发生发展5oM1.AT通过吸附微小RNA发挥癌基因的作用，促进胃癌细胞增殖和侵袭转移16,这与文献报道相一致8,9o吴波等10研究表明，胃癌患者血清中MIAT水平显著升高，不仅与TNM分期和组织学类型相关也与患者生存期相关，在胃癌的诊断和预后评估中具有一定的价值。此外，胃癌患者的血清外泌体MIAT水平亦显著升高，治疗

31、后其水平明显降低，但在复发病例中则升高；血清外泌体M1.AT被确定为胃癌的独立预后因素17o然而，目前还无胃癌患者外周血CD4+T细胞中MIAT表达情况的报道。本研究对124例胃癌患者、90例胃良性疾病患者和80名健康对照者外周血CD4+T细胞MIAT相对表达量进行检测，结果显示胃癌患者M1.AT的相对表达量显著高于胃良性疾病患者和健康对照者，3组间差异有统计学意义(H158.25,P0.001)o以前的研究表明，MIAT基因受到r6A(6-甲基腺喋吟)修饰，从而对其表达起了调控作用18oCD4+T细胞中m6A能够与MIAT基因启动子结合。进一步检测结果显示，胃癌早期患者CD4+T细胞中m6A

32、与MIAT基因启动子结合活性高于晚期患者(P0.01);胃癌早、晚期患者r6A与M1.AT基因的结合活性显著低于胃良性病变患者和健康对照组（P均0.01）O已知DNA的m6A甲基化修饰能够抑制靶基因的表达19,20o由此推测，胃癌患者M1.AT表达量显著高于胃良性疾病患者和健康对照者，可能是r6A对其基因启动子甲基化修饰降低造成的。CD4+CD25+调节性T细胞（regu1.atoryTce1.1.,Treg）是具有免疫抑制功能的T细胞亚群，通过免疫逃逸促进肿瘤的生长和侵袭转移12o虽然目前未见M1.AT在胃癌患者Treg细胞中作用的报道，但已有研究表明MIAT在肝癌组织浸润的Treg细胞中高

33、表达，参与了肝癌细胞的免疫逃逸7。本研究亦显示，胃癌患者外周血CD4+T细胞M1.AT相对表达量与CD4+CD25+CD1271ow-Treg细胞水平呈正相关（图2）。已知胃癌患者免疫功能状态与其体内Treg水平密切相关，胃癌患者外周血中Treg细胞水平与健康者相比明显升高，且肿瘤恶性程度越高的患者其外周血Treg水平就越高，预后越差3。由此说明，外周血CD4+T细胞MIAT可能与Treg细胞分化和活化相关，其在胃癌免疫逃逸中可能扮演重要的角色。国内已有血清、胃癌组织中M1.AT与胃癌相关性的研究报道10,16,17,但尚无外周血CD4+T细胞中M1.AT与胃癌预后的相关性研究。本研究显示，外

34、周血CD4+T细胞M1.AT相对表达量在不同年龄、性别、CEA水平、CA199水平的胃癌患者之间差异无统计学意义（2值分别为0.000、0.000、0.648和1.554,P均0.05),CD4+T细胞中M1.AT的表达水平在不同肿瘤直径、TNM分期、淋巴结有无转移患者之间差异有统计学意义(2值分别为23.571、9.443、45.248,P均0.05),提示CD4+T细胞中M1.AT表达水平可成为胃癌患者恶性程度、疾病进展的辅助观察指标，并对预后判断有一定意义。ROC曲线分析，外周血CD4+T细胞M1.AT的诊断效能优于血清CEA和CA199,敏感度和特异度均高于传统指标CEA和CA199o

35、当MIAT与CEA两项指标联合或者MIAT、CEA和CA199联合检测时，敏感度和AUC均高于单项指标。此外，本研究发现外周血CD4+T细胞M1.AT相对表达水平能有效区分胃癌与非胃癌，其诊断效能(AUC=O.914)高于血清M1.AT水平(AUC=O.865)和血清外泌体M1.AT水平(AUC=0.798);CD4+T细胞M1.AT相对表达水平能有效的区分胃癌与健康者，其诊断效能(AUC=O.953)高于血清MIAT水平(AUe=0.875)和血清外泌体M1.AT水平(AUC=0.856);CD4+T细胞MIAT相对表达水平能有效区分胃癌与胃良性病变者，其诊断效能(AUC=O.879)高于血

36、清MIAT水平(AUC=O.850)和血清外泌体M1.AT水平(AUC=0.741)。进一步提示外周血CD4+T细胞MIAT对胃癌的辅助诊断有较高价值。综上所述，CD4+T细胞中MIAT的表达水平与胃癌的发生发展有一定关系，提示M1.AT可能成为一种重要的生物标志物，并且M1.AT的高表达与TNM分期、淋巴结转移、Treg细胞水平相关，预示着MIAT可作为胃癌预后的潜在分子标志物。胃癌中MIAT表达水平的升高与启动子m6A甲基化修饰下降有关，但具体机制仍需进一步研究。M1.AT是作为胃癌的特异性指标，还是作为一种广谱的肿瘤标志物，需要扩大标本量进一步的研究。本研究为进一步明确CD4+T细胞中MIAT在胃癌中的作用机制奠定了基础。