GB_T 43745-2024 饲料原料 发酵豆粕.docx

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1、ICS65.120CCSB46GiS中华人民共和国国家标准GB/T437452024饲料原料发酵豆粕FeedmaterialFermentedsoybeanmeal2024-03T5发布2024To-Ol实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会发布本文件按照GB/T1.1-2020(标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承扭识别专利的责任。本文件由余国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本文件起草单位：中国农业科学院饲料研究所、湖北邦之德牧业科技有限公司。本文件主要起草人：王建华、滕达、吴晓峰

2、、毛若雨、郝姬、杨娜。饲料原料发酵豆粕1范囹本文件规定了饲料原料发酵豆粕的技术要求、取样、检验规则、标签、包装、运输、贮存和保质期，描述了相应的试验方法。本文件适用于以豆粕为主要原料295使用农业农心部何料添加剂品种日录中批准使用的微生物菌种进行固态发酵，并经于燥制成的蛋白质饲料原料产品，2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中往日期的引用文件，仅该日期对虚的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的餐改单）适用于本文件。GB52282016品1O名发用盐基氮的测定GB/T6A32饲料中粗蛋面的测定三狮氏定氮法GB/T434饲料中粗继

3、维政杏章测定红湿法GB/T6435饲料中水分的测定GB/T6438饲料中粗灰分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验牙法GBT8170,数值修约规则与极理数值的表燃和郑定GB/T8622句料用大定围品中尿系酶GB10648饲料标签GBl3078伺料卫生标准GB/T146961饲料采样GB/T18246同料中氨基酸的测定GB/T18823何料检测驾果判定的允许误差GB/T20195动物何料、试样陶制备GB/T224922008大豆肽粉3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4技术要求4.1 原料要求相关要求见饲料原料R录。4.2 外观与性状浅黄色到棕色粉状物或颗粒物，色泽均匀，无结块

4、；无异物，无虫蛀；具有发酵的特殊味道，无异味。4.3 理化指标应符合表1的要求。1理化指标项目指标一级二级机蛋白质/%250.045.0机纤维/%7.0机灰分/%7.5水分/%12.0酸溶蚩白(占机蛋白质比例)/%8.0赖氮酸/舟2.5尿素酶/(Ug)01水苏糖/%10B-伴大豆球蛋白/(mgg80.0挥发性盐基氮(以N计)(mg100g)W80.04.4 卫生指标应符合GB13078的要求。5取样按GB/T14699.1的规定执行。6试验方法6.1 外观与性状检验从抽取的样品中，取适量倒在白纸或白瓷板上，在光线充足的条件下，观察颜色和状态，并闻其气味。6.2 粗蛋白质按GB/T6432的规定

5、执行。6.3按GB/T6434的规定执行。6.4 粗灰分按GB/T6438的规定执行。6.5 水分按GB/T6435的规定执行。6.6 酸溶蛋白按GB/T224922008附录B中B.4.1的规定执行。6.7 赖氨酸按GB/T18246的规定执行。6.8 尿索解按GB/T8622的规雀执行6.9 水苏精按附录A的规定城行。6.10 B年大夏球蛋白按附录的规定执行。6.11 挥发性盐基氮按GF5009228-20BD中一法自动凯缴定氮仪法执在10.3中票之前样品需过滤或离心，取清液。6.12 卫生指标按GB1078的规定执查7检验规则7.1 组批以同一批原料、相同生工艺、连续生产或同一班次生产的

6、间一规格的产品为一批，但每批产品不应超过100t,7.2 出厂检验所列项目中，外观与性状、粗蛋白质、水分、酸溶蛋白、尿素酶为出厂检验项目。7.3 型式检验型式检验项日为4.24.4规定的项日。在正常生产情况下，每半年至少进行1次型式检验。有下列情况之一，也应进行型式检验：a) 新产品投产时：b) 生产工艺、配方或主要原料来源有较大改变，可能影响产品质量时；c) 产品停产3个月以上，恢复生产时；d) 出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；e) 饲料行政管理部门提出检验要求时。7.4 判定规M7.4.1 所检验项日全部合格，判定该批次产品合格。7.4.2 检验结果中有任何指标不符合本文件规定

7、时，可自同批产品中重新加倍取样进行复检。若复检结果仍不符合本文件规定，则判定该批产品不合格。微生物指标不应复检。7.4.3 检验结果判定的允许误差按GB/T18823的规定执行。7.4.4 各项目指标的极限数值判定按GB/T8170中修约值比较法执行。8标签、噂、礴、8.1标签按GBlO648的规定执行。8.2包装包装材料应无毒、无害、防潮。&3运输运输中防止包装破损、H晒、雨淋，不应与有毒有害物质共运。&4贮存贮存时防止日晒、雨淋，不应与有毒有害物质混贮。8.5ftW未开启包装的产品，在规定的运输、贮存条件下，产品保质期应与标签中标明的保质期一致。附录A例范性)发酵豆粕中水苏糖含测定方法A.

8、1原理用水提取试样中的水苏糖，然后采用高效液相色谱法(HP1.C)测定其含量。A.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。A.2.1水：GB/T6682一级。A22乙月都色谱纯。A.23三氯乙酸。A.2.4水苏糖标准储备溶液(Iomgm1.):精确称取水苏糖0.50OOg,用水溶解并定容至50m1.。临用现配。A.2.5水苏糖标准系列溶液：分别取水苏糖标准储备溶液(A.2.4)251.、501.、751.、1001.125U1、150II1.,于HP1.C进样瓶中，分别加水至1.Oom1.,制成质量浓度分别为0.25mg/m1.、0.50mgm1.0.75mg/m1.、1.OOmg/m1.

9、1.25mgml.和1.50mg/m1.的标准系列溶液。A.3仪器设备AAl高效液相色谱仪：示差折光检测器。A.3.2分析天平：感量0.OOOlgpA.3.3超声波清洗仪。A.3.4离心机：转速不低于12000r/minoA35滤膜：水系(0.22m)(A.4样品按GB/T20195制备样品，粉碎过筛(孔径0.25mm),备用。A.5试验步骤A.5.1试样溶液的制备精确称取发酵豆粕样品2g(精确至0.0001g),加20m1.水，于超声波清洗仪中，超声提取15min,将浸提液于70水浴1h,加入0.5g三氯乙酸，混匀后，置冰浴中2h,在12000r/min条件下离心IOmin,取上清液，0.2

10、2Um滤膜过滤，样品制备后立即测定。A.5.2色谱弁考条件色谱参考条件如下：a)色谱柱：氨丙基键合固定相柱，柱长250mm,内径4.1mm或其他可分析单糖和低聚糖的性能相当的色谱柱；b)柱温：30;c)流动相：乙懵水(75+25);d)流速：1.0m1./min;e)进样量：101.A.5.3测定在仪器最佳状态下分别测定水苏糖标准系列溶液和试样溶液(A5.1)中的水苏糖含量。试样溶液重复测定2次。以色谱峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线。根据试样溶液色谱峰面积对照水苏糖的标准曲线计算样品浓度。A.6试验数据处理试样中水苏糖的含量W表示为讯样中的质量分数，以先按式(A.1)计算：式

11、中：p准曲线上查得试样溶液中水苏糖的质量浓度，单位为亳用每亳用(mgm1.);V试样熔液的体积，单位为亳升(m1.);m试的Jfi微冷位为100O一旗算系数A.7精密度在量复帽条件下，2加方测民结果最保源术平影的加绝对尽的不大于该算术更的们的附录BGR范性)发薛豆粕中B年大豆球蛋白含测定方法8.1 方法原理采用间接竞争酶联免疫法(E1.ISA法)。在酶标板上预包被B-伴大豆球蛋白抗原，样品中的B-伴大豆球蛋白和预包被的抗原竞争B伴大豆球蛋白抗体，加入酶标二抗后，用四甲基联苯胺(TMB)底色液显色，样品吸光度值与其所含B-伴大豆球蛋白的含量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数即可得出样

12、品中B-伴大豆球蛋白的含量。8.2 试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。B.2.1水：所用的水为GB/T6682中规定的二级水。B.2.2弗氏不完全佐剂。B.23包被缓冲液(0.05moV1.,pH9.6的碳酸缓冲液):准确称取1.59g碳酸钠(Na?CO3)和2.93g碳酸氢钠(NaHCO3)，将其混溶于100Om1.蒸储水中。8.2.4 封闭液：用包被缓冲液配制5%的脱脂牛奶。8.2.5 30X浓缩样品提取液：181.7gTris、73ml盐酸(HeI)和21m1.-疏基乙醉，定容至100om1.蒸储水中。8.2.6 样品稀释液：0.9%氯化钠溶液。B2.7抗体工作液：5.Og牛血清

13、白蛋白(BSA)、Iom1.PlclH300100m1.O.2mol1.pH7.44粼矍盐缓冲液(PBS)、0.05g亮蓝、B伴大豆球蛋白抗体Img。B.2.8洗液：0.3mol/1.pH7.4PBS1000m1.加4%吐温-20。B29酶标试剂：lO.OgBSA、29.4g氯化钠、K)Oml小牛血清、1.om1.Rcli30002mol/1.pH7.4PBS100ml.和0.5mg辣根过氧化物酶标记羊抗鼠抗体，定容至100Om1.蒸储水中。B.2.10显色液A:40.0g磷酸氢二钠(Na?HPO112H2()、10.Og一水柠檬酸和0.5g过氧化氢腺,定容至100om1.。R2.11显色液B

14、2Qg一水合柠檬酸、15Om1.无水甲醇、0.55gTMB和100m1.NN-二甲基甲酰胺，定容至100om1.蒸储水中。B.2.12终止液：2mol/1.硫酸溶液。B.2.13标准系列溶液：0gm1.0.2gm1.0.4gm1.1.6gm1.6.4gm1.25.6gm1.-伴大豆球蛋白。B.3仪器设备8.3.1 分析天平：感量0.0001g08.3.2 离心机：转速24000rmi11oB.3.3分光光度计。按GB/T20195制备样品，粉碎过筛（孔径0.25mm）,备用。B.5实验步募8.5.1 B-伴大豆球蛋白多克隆抗体的制备8.5.1.1 抗原制备：将低温脱脂未变性的大豆粉以1:10的

15、料水质量比分散于温度为40C50、pH8.（）11.0lmol/1.氢氧化钠（NaOH）调制的水中，除去非可溶性成分；分散过程在机械搅拌或超声波处理的条件下处理45min;调整溶液离子强度为0.051.0,pH5.06.0（35与HCI调制），在4000rmin-7000r11in离心，得到的上清液用酸调PH至4.05.0（35%HCI调制），然后在2000rmin4000r/min离心，得到的沉淀物为B-伴大豆球蛋白。8.5.1.2 抗体制备：适量弗氏不完全佐剂和纯他的伴大豆球蛋白混匀，在旋涡振荡器上乳化。免疫2只新西兰白兔，采用6周免疫稽序,兔子先适应性喂养1周,兔子免疫前先于一侧耳缘抽取

16、2m1.静脉血，4C静置过夜，取血两作阴性对照。对脊柱两侧进行多点背部皮市注射（剂量为每只100Hg免疫原）；初次免疫后第1天，再用弗氏不完全佐剂抗原腹腔静脉加强兔疫1次工周1次，共3次。免疫后的第25天和第3天取血，间接E1.ISA法测定抗体效价，Westernbkl离观察角疫反应条带，检测免疫效果。效价达到要求居，用无佐剂抗原免疫1次，免疫第3天后颈动脉采血收集血情，3000r/min离心20min）,收表的抗血清用甘油1:1稀释，于一20C保存-8.5.2 预色被掠原酶标板的制叁B521包被用包被缓面液将间流而中伴太理球重从稀称日起证上征致度，用移夜枪准确移至酶标板，每个孔100U1.,

17、密封1面变。B.5.2.2封间：用洗液溅系治次，每次90（的称“洗深心下同），然高角事。每个孔加入200U1.封闭液，37C温育1h,洗涤重长，公疫拍干，放火你封袋中得C干煤保有8.5.3 样品的制备R5.3.1称样：称取0.306仇品于附2提取：装有样盘的50m离心管中西加人区样品据取工作液2提取16h。8.5.3.1 离心：振荡后静置2min,取上层液体于离心机中4000r/min离心min,8.5.3.2 稀释：取上清液用IX样品稀释工作液稀释70倍（为减小误差分两步稀释：先取上清100Il1.加600H1.IX样品硫释工作液混匀，再取混合液100Il1.加900P1.l样品稀牌工作液混

18、匀），待测。8.5.4 测定步爆8.5.4.1 将所需试剂和酶标板从下G冰箱中取出，回温至20-025C,试剂使用前摇匀。8.5.4.2 编号：将样品和对照品对应防标板微孔按序编号，每个样品和对照品做2孔平行，并记录对照品孔和样品孔所在的位置。8.5.4.3 加样：将对照品16（0Ug/m1.、0.2gm1.x0.4gm1.1.6gm1.6.4gml.及25.6gm1.）以及待测样品各取501.加至对应的酶标板微孔中，再加入抗体工作液501.孔，轻轻振荡混匀。盖上盖板膜，37C避光反应30min08.5.4.4 洗板：小心揭开盖板膜，倒掉微孔中液体，加入洗涤工作液3001.,浸泡IoS后倒掉，

19、重复洗涤4次，于吸水纸上拍干。8.5.4.5 加酶标试剂：加入酶标试剂100U17孔，盖上盖板膜，37C,避光反应30min,取出洗板。8.5.4.6 显色：将等体积显色液A与显色液B混匀（显色液现用现混，5min内用完，混匀时请勿剧烈振荡）；每孔加入混合液100U1.,盖上盖板膜，37C,避光反应15min。8.5.4.7 终止：每孔加入终止液50U1.,轻轻振荡混匀，立即于450nm630nm双波长下读取吸光度值。8.6 试驶数据处理8.6.1 百分吸光率计算对照品或样品的百分吸光率等于对照品或样品的吸光度值的平均值（双孔）除以对照品1的吸光度值的平均值，再乘以100%。8.6.2 标准曲

20、线的绘制与计算以对照品百分吸光率为纵坐标，以B-伴大豆球蛋白对照品浓度的对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样品的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样品所对应的浓度，乘以其对应的稀释系数即为样品中-伴大豆球蛋白的实际浓度。8.7 精密度在重复性条件下，2次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的12乐参考文献1饲料添加剂品种目录.中华人民共和国农业农村部.2023.2饲料原料日录.中华人民共和国农业农村部.2023.中华人民共和国国家标准饲料原料发酥豆粕GB/T437452024英中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100o29)北京市西城区三里河北街16号(100O45)网址cn总编室：(OlO)68533533发行中心：(010)51780238读者服务部：(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷店经销开本880X12301/16印张1字数19千字2024年3月第一版2024年3月第一次印刷书号：1550661-75427定价31.00元如有印芸差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：(010)68510107