P21基因多态性及华北食管癌相关性.docx

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1、P21基因多态性及华北食管癌相关性1P21基因多态性及华北食管癌相关性作者：马玉泉，杨晓光，刘晖，李保庆，刘俊峰【摘要】目的：探讨P21基因外显子的33非翻译区(UTR)笫20碱基对的单核甘酸多态性对食管鳞状细胞癌(ESCC)发生及淋巴结转移的影响.方法：选择202例ESCC患者和265例健康比照个体，采集静脉抗凝血5m1.,同时收集病史、个人及肿瘤家族史.以蛋白酣K消化3饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA,分别采纳PCR3片断长度分析和PCR3限制性片段长度多态性(RF1.P)方法检测P21外显子的33UTK第20碱基对单核甘酸多态性基因型.结果：ESCC患者的P21基因33UTR的多态

2、性基因型和等位基因型分布与健康比照组差异无统计学意义(Pgt;0.05).ESCC吸烟组患者P21的T/T基因型频率(26.0%)显著高于健康吸烟组(12.0%,2=8.60,P=O.014).与C/C基因型相比，携带T/T基因型可增加吸烟者的ESCC发病风险(经性别和年龄校正的OR值为3.36,95(SCI=1.45-7.75).而在非吸烟的患者和健康个体中，P21的基因型及等位基因型频率均差异无统计学意义(Pgt;0.05).有淋巴结转移组的m的T/T基因型频率(26.4%)高于无淋巴结转移组(15.3乳2=6.128,P=O.013).与常见基因型C/C相比，携带T/T2基因型可增加ES

3、eC患者淋巴结转移的风险，经性别、年龄校正的OR值分别为3.11(95%Cl=I.28-7.52).结论：P2133UTR的T/T基因型可能增加中国北方吸烟人群ESCC易感性并可能增加ESCC患者淋巴结转移的风险性.【关键词】食管肿瘤；癌，鳞状细胞：基因，P21；多态现象，遗传；疾病易感性；淋巴转移【Abstract】AIM:Toexploretheinfluenceofthesinglenucleotidepolymorphismvariants(SNPs)inthe333untranslatedregion(33UTR)ofP21geneonthedevelopmentandlymphat

4、icmetastasesofesophagealsquamouscel1carcinoma(ESCC).METHODS:Thehospital3basedcase3controlstudyincluded202ESCCpatientsand265healthycontrols.GenomicDNAwasextractedbyusingproteinaseKdigestionfollowedbyasalting3outprocedure.TheSNPsofP21wereanalyaedbypolymerasechainreaction(PCR)3fragmentlengthanalysisand

5、PCR3restrictionfragmentlengthpo1ymorphismanalysis(PCR3RF1.P).RESU1.TS:TheoverallgenotypeandalIelotypedistributionsofP2133UTRpolymorphismsinESCCpatientswerenotsignificantlydifferentfromthoseinhealthycontrols(Pgt;0.05).Stratificationanalysisrevealed3thattheP21geneTTallelefrequencyinsmokingpatients(26.

6、0%)wassignificantlyhigherthanthatinhealthysmokers(12.0%,2=8.60,P=0.014).Therefore,comparedwithP21C/Cgenotype,smokersWiththeT/TgenotypesignificantlyhadahigherrisktodevelopESCC(sexandageadjusted=3.36,95%CI=I.457.75).However,P21alIelewasnotsignificantlydifferentinbothnon3smokingESCCgroupandhealthygroup

7、(Pgt:0.05).TheESCCcaseswerefurtherstratifiedaccordingtothestatusoflymphaticmetastasisatthetimeofdiagnosisandtheresultsshowedthatthep21T/Tallele(26.4%)wasmorecommoninESCCpatientswithlymphaticmetastasisthanthosewithoutlymphaticmetastasis(15.3%,2=6.128,P=0.013).ComparedwithfamiliarmonadelphoustheC/Cgen

8、otype,T/Tgenotypesignificantlyincreasedtheriskoflymphaticmetastasis(sexandageadjusted=3.11,95%CI=I.28-7.52).CONC1.USION:TheP21T/TallelemayincreasethesusceptibilitytoESCCamongsmokersinNorthChinaandtheriskoflymphaticmetastasisinESCC.Keywordsesophagealneoplasms;carcinoma,squamouscell：genes,P21：polymorp

9、hism,genetic：4diseasesusceptibility;lymphaticmetastasis0引言P21基因是近年来发觉的细胞周期蛋白依匏性激醯抑制剂(CyCIin3dependentkinaseinhibitor,CDKD家族中的重要成员.P21基因的多态性与一些恶性肿瘤的易感性有关1.但P21基因的多态性与食管癌易感性的探讨尚少见报道.我们采纳病例3比照探讨方法，以探讨P21基因型与食管癌发病及淋巴结转移的关系.1对象和方法1.l对象2003/2005选择河北医科高校第四医院行胃镜检查或住院手术治疗，经病理组织学证明的食管鳞状细胞癌（es。PhUgealSqUamonSc

10、ellcarcinoma,ESCO患者202(男145,女57)例，年龄3375(56.58.5)岁，其中185例有相关淋巴结转移资料记录的ESeC患者均经过外科手术.健康比照265(男198,女67)例，年龄3369(55.97.4)岁，为同期在河北医科高校第四医院健康查体人员或河北省血站的献血员，无肿瘤及遗传病史.全部患者及健康比照均来自石家庄市或相邻市县，并均为汉族、无血缘关系.ESCC患者的年龄、性别、吸烟状态、家族史、病理类型及淋巴结转移状况均来自住院病历：健康比照人员的以上信息由2名特地人员询问并记录.曾经吸烟或现在吸烟，每日5支以上并持续2a以上者被定义为吸烟个体.家5族中1名以

11、上一级亲属或2名以上二级亲属患者属食管癌/贲门福/胃福者被定义为上消化道肿病(uppergastrointes3tinalcancers,UGIO家族史阳性.两组间性别和年龄构成比均差异无统计学意义(Pgt0.05).45例健康比照和7例ESCC患者无相关吸烟资料记录.在有相关吸烟资料记录的探讨对象中，ESCC组吸烟者比例(49.2%)与健康比照组(49.1%)相比差异无统计学意义(2=0.01,P=O.98).168例健康比照个体无UGIG家族史记录或记载不清.ESCC患者中UGIG家族史阳性者比例26.2%,高于比照组(4.1%,2=20.49,P=O.000).因此，UGIG家族史增加E

12、SCC的发病风险，经年龄、性别调整后的OR值为8.475(95%CI=2.85-25).185例ESCC患者有临床资料,病理结果报告87人有淋巴结转移，98人无淋巴结转移，没有远处转移.1.2方法抽取外周静脉血5m1.,经枸椽酸钠抗凝，于4C冰箱保存，并于采血后Iwk内提取外周血白细胞DNA.P21基因型检测按PCR3RF1.P方法进行.P21SNP扩增引物553GTTTGCCGTTGGGTCG335（上游引物）和553AGGAGAACACGGGATGAGGAG335（下游弓I物）.33UTR发生一个CT的替代，从而产生一个PStI限制性酶切位点，T等位基因存在该识别位点PCR反应体系均为25

13、1.,其中模板）N100ng,IOPCR缓冲液2.51.,Taq3DNA6聚合酶（北京博大泰克生物基因技术有限责任公司）2.5U,MgC121.5mmol/UdNTPs0.211unol1.,上、下游引物各0.2mol1.P21PCR反应条件为:94C预变性5min,94C变性45s,64C退火45s,72C延长60s,35个循环后，72接着延长5min.取PCR产物81.进行限制性内切南消化，经30g1.琼脂糖凝胶电泳分析基因型P21基因的PCR产物为868bp（64C）,经限制性内切醯PstI37过夜消化后,T/T纯和基因型表现为133bp和735bp两个DNA片段,而C/C纯和基因型表现

14、为133,256和479bp三个DNA片段，C/T杂合型表现133.256,479和735bp四个片段（图1）.每一批PCR反应均以蒸储水替代DNA作为阴性比照.1/10的DNA标本进行了2次分型以证明分型方法的牢靠性.统计学处理：采纳SPSS12.0软件包进行，应用2检验进行基因型频率的视察值与预期值的Hardy3Hcinbcrg平衡检验.ESCC组与比照组的基因型和等位基因型分布比较均采纳2检验.以非条件1.ogistic回来法计弊经性别和年龄校正的比值比及其95%的可信区间.PltiO.05为差异具有统计学意义.2结果2.1P21基因SYP分布全部ESCC组与健康比照组的DNA标本均经P

15、CR3RF1.P方法胜利检测出P21基因的多态性基因型，经重爱检测标本的基因型与原始结果100%吻合.P21基7因型分布在ESCC组及比照组中均符合HardyBHeinberg平衡(Pgt;0.05),ESCC组和比照组P21等位基因T,C的频率分别为42.3%,57.7%和39.1%,60.9%；TT,CT,C/C基因型频率分别为18.8%,47.0%,34.2%和14.4%,49.4%,36.2%.P21等位基因型及基因型总体分布在ESCC组和健康比照组之间均无统计学差异(Pgt：0.05).P21的T/T基因型频率在ESCC吸烟组(26.0%)显著高于健康吸烟组的(12.0%,2=8.6

16、0,P=O.014,表1)与C/C基因型相比,携带T/T基因型可使吸烟人群ESCC的发病风险增加3倍，经性别和年龄校正的OR值为3.36(95%CI=I.457.75).而在非吸烟的患者和健康个体中，P21的基因型及等位基因型频率差异均无统计学意义(P0.05).2.2P21基因SNPs与淋巴结转移的关系有淋巴结转移组的P21的T/T基因型频率(26.4%)高于无淋巴结转移组(15.3%,2=6.128,P=O.013,表2).与常见基因型C/C相比，携带T/T基因型可使ESCC患者淋巴结转移的风险增高3倍，经性别、年龄校正的OR值为3.11(95%Cl=1.287.52).表1P21基因SN

17、P分布分析表2P21基因SNPs与淋巴结转移的关系3探讨8食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一，其发生与性别、年龄、种族有关.大多数食管癌患者年龄在5559岁之间，35岁以下的青年人很少发生，70岁以后发病率渐渐降低，男女发病比例约为2:1.降低食管癌发病率、死亡率最有效的途径就是预防，尤其是病因预防.近年探讨表明，抑癌基因、代谢酶基因、DNA修复基因等基因的多态性与个体对食管癌的易感性有关2-6.P21基因是近年来发觉的CDKT家族中的重要成员，在很多肿瘤的发生发展中扮演着抑癌基因的角色.探讨发觉,在胃癌、结肠癌、膈胱癌、卵巢癌和胆管癌中P21基因的表达与肿痛的预后明显相关7.P21基因的多态性确

18、定了个体的差异性,在不同的环境因素作用下，可以表现出对疾病的不同易感性P21基因的多态性与一些恶性肿瘤如肺癌、乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺癌1的易感性有关.我们的探讨结果显示，病例总体分析并未发觉P21基因33UTR第20碱基对的多态性与ESCC的易感性相关.然而，依据吸烟状况分层分析发觉，P21的T/T基因型频率在ESCC吸烟组(26.0%)显著高于健康吸烟组(12.0%,2=8.60,P=O.014),与C/C基因型相比，携带T/T基因型可使吸烟人群ESCC的发病风险增加3倍,经性别和年龄校正的OR值为3.36(95%CI=1.45的75).而在非吸烟的患者和健康个体中，P21的基因型及等位

19、基因型频率均无显著性差异(P90.05).这说明T/T基因型可增加吸烟者患ESCC的风险，表明T/T基因型的过量表达可能与吸烟所诱导的代谢变更相互作用，从而影响ESCC的易感性.我们发觉，与C/C基因型相比，携带T/T基因型可使ESCC患者淋巴结转移的危急性增高3倍.这表明携带T/T基因型的ESCC患者更简单发生淋巴结转移，提示携带该基因型的ESCC患者在临床治疗时应尽可能进行淋巴结清扫，并进行相应的术后综合治疗，以削减淋巴结转移病灶的残留.综上所述，P21基因33UTR的多态性分析可作为预料中国北方吸烟人群ESCC易感性的分子指标之一，并可能用于ESeC患者淋巴结转移风险的预料.【参考文献】

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