人皮肤反应因子炎性因子(SRFIF)ELISA试剂盒操作步骤.docx

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1、人皮肤反应因子/炎性因子(SRF)F)EIJSA试剂盒试验原理：SRF/IF试剂盒是固相夹心法陶联免及吸附实胎(EUSA),已知SRFZIF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测.先将SRF/IF和生物素标记的抗体同时温育”洗涤后，加入亲和素标记过的HRP,再经过温育和洗涤.去除未结合的防结合物.然后加入底物A、B1和物结合物同时作用，产生颜色，厥色的深浅和样品中SRF/IF的活性浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份(2-8C。保存)96孔配置48孔配置配制96/48份醐标板1块板(96T)半块板(48T)囿用型SS科股板差1块半块即用型标准品400ngml1瓶(0.6m

2、l)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型标准品稀稗缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素标记的SRF/IF抗体1瓶(6ml)1瓶(30ml)即用型亲和链施素-HRP1瓶(IoEI)1瓶(5.0ml)即用型洗涤缓冲液1瓶(20ml)底物A1(6.0ml)底物B1通(6.0ml)终止液1瓶(6.0ml)1瓶(IOml)按说明书进行稀释1瓶(3.0ml)即用型1瓶(3.0ml)即用型1瓶(3.0ml)即用型自备材料1.蒸饵水.2力口样器：53、IOuk50uK100uk200、5ul,100OuU3振荡器及磁力搅拌器等。安全性1避免直接接触

3、终止液和底物A、B,.一旦接触到这些液体.请尽快用水冲洗.2实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品.3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。人皮肤反应因子/炎性因子(SRF)F)EUSA试剂盒操作注意事项1试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温，稀稀过后的标准品应丢弃.不可保存。2 .实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存.以免变质。3 .不用的其它试剂应包装好或美好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用.4使用一次性的吸头以免交叉污染.吸取终止液和底物A、B液时.避免使用带金属部分的加祥器。5 .使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品，6 ,洗涤陶标板时应充分拍干，

4、不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水.7底物A应挥发,避免长时间打开盖子.底物B对光敏感.避免长时间暴露于光下“避免用手接触.有毒，实验完成后应立即读取OD值。8 .加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9 -按照说明书中标明的时间、加液的及顺序进行温育操作。人皮肤反应因子/炎性因子（SRFIF）EuSA试用盒样品收柒、处理及保存方法1、血清操作过程中避免任何细胞剌激，使用不含热原和内寄素的试管：收集血液后.10g陶心10分钟将血清和红细胞迅速，匕地分禹.2、血浆一一-EDTA,柠掾酸盐、肝素血浆可用于检测.1。OoXg离心30分钟去除颗粒-3、细胞上活液-100OXg离心1

5、0分钟去除粒粒和聚合物，4、保存如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70U保存.避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血I旨血.如果血清中大颗粒.检测前先离心或过滤。不要在37C。或更高的温度加热解冻，应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1标准品：标准品的系列稀稀应在实胎时准备，不能储存。稀释前将标准品振疹混匀。林科比例按下表中进行：4OOngZmI200ngml100ngZmI（6号标准品）（5号标准品）（4号标准SI）原倍浓度不用稀桂直接加入50ul,100uI的原倍标准品加入100uI的标准品稀稀液100uI的5号标准品加入100ul的标准品稀译液50ngml（3号标准品

6、）100uI的4号标准品加入100Ul的标准品稀释液25ngml（2号标准品）100uI的3号标准品加入100Ul的标准品稀释液12.5ngml（1号标准品）100uI的2号标准品加入100Ul的标准品稀释液OngZmI（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入503。2洗涤线冲液（50）的稀释蒸储水50倍稀释。人皮肤反应因子/炎性因子（SRFIF）EUSA试荆盒操作步骤1使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡.产生加样上的误差。2.根抠待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数：每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复

7、孔。3加入稀释好后的标准品503于反应孔、加入待测样品503于反应孔内,立即加入50Ul的生物素标记的抗体：篮上膜板,轻轻振荡混匀,370;温后1小时。4甩去孔内液体每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液.用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5每孔加入80Ul的亲和链酹素HRP,轻轻振荡混匀,37CO温育30分钟.6嵬去孔内液体.每孔加湎洗涤液,振荡30秒.甩去洗漆液.用眼水纸拍干。更爱此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7.每孔加入底物A、B各503,轻轻振荡混匀，37C。温自10分钟.避免光照“8取出施标板.迅速加入50Ul终止液.加入终止液后应立即测定结果一9在45Onm波长处测定各孔的OD值，性能1 .灵敏度最小的检测浓度小于1号标准品稀释度的线性,，样品线性回归与预期浓度相关系数R值为OMO92 .特异性：不与人其它细胞因子反应。3承复性：板内、板间变界系数均小于Is6。4.局限性：6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果.结果判断与分析1.仪器值：于波长45Onm的酶标仪上读取各孔的OD伯2、以吸光度OD值为纵坐标(Y)1相应的SRF/IF标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的SRF/IF含员可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度：3、检测值范围:0-400ngml4、敏感度：rOngZmI