EV71感染并发神经源性肺水肿与免疫功能奕化的相关性研究.docx

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1、EV71感染并发神经源性肺水肿与免疫功能奕化的相关性探讨青岛高校硕士学位论文EV71感染并发神经源性肺水肿与免疫功能奕化的相关性探讨姓名：王亚秋申请学位级别：硕士专业：免疫学指导老师：王静20110525摘要结果：脑炎并发肺水肿组患儿血清O。含量为.。.。/,较其它两义。外周血。赴。吭i甚。橹涪嬖谙灾圆钳。8。，其水肿组及单纯脑炎组患儿血清。骄横直鹤。.。舟和。.。挎，两组差异无统计学意义.8版r渴肿葩。慈7.Q8)(Me。.Oe.。挎及单纯手足口病无并发症组的。舟，差别具有显著性硕士探讨生王亚秋。庖唯。*粗。x。粗。，。.旋外Xeoe.诲。.。.。,.甑。瑁。8.”甄O电-。令o：。*。ex

2、。B。*。机一。引言引言手足口病球。玻。玲。是儿童常见的急性传染病之一，年。轮。月大范围流行于山东地区的手足口在澳大利亚、南及欧洲亦有相继的报道。由。引起的已在世界范围内引起。余次暴发与流行。近。年来，手足口病流行在东南哑呈上升趋势。年例死亡，。年。驴J音灿。2.。港兴劳。例；新加坡在。年、。年、年、。年和年均有不同程度的流行，并在年秋季发生了大规模流行。我国台湾地区分别在。年、年及。年间爆发大流行。近几年来，我国广东、福建、上海、重庆等地区均有局部流行的报道。年武汉病毒探讨所从。患者中分别出。病毒，年深圳市卫生防疫站也从在年的流行中出现了首例死亡病例，岁男童死于肺水肿、肺出血。病毒感染之后可

3、以引起散发的病例也可以引起很多疾病的爆发，主要包括手足口病、疱疹性咽峡炎及无菌性脑炎等。到目前为止，病毒的传播主要通过粪.口途径，且隐性感染者居多。感染通常属于自限性，但一旦迁延即可发展为重症感染，包括中枢神经系统受累、肺水肿等致死性并发症，几乎每次流行都能引起死亡病例【年台湾官方也报道，由引起的手足口病患儿致死的原因主要是肺水肿【。俊5fl侥壳拔V梗理。喙厥肿n1。病并发肺水肿的发病机制尚不明白，因此是目前国内外学者探讨的热点。病毒的干脆侵扰是被学术界所公认的，通过对台湾。年死亡患儿的组织免疫组化试脸显示仅在中枢神经系统的神经元、突触及炎性区域包括大脑皮层、脑干、脊髓肠病毒抗原和核酸着色阳性

4、。病毒感染后激发免疫炎症反应是存在较多争议的一种机制，病毒感染后激发机体免疫反应，释放多种细胞因子，形成风暴引起全身炎症反应，导致多脏器功材料与方法第一章材料与方法。可调式微量移液器。聘人肿瘤坏死因子.。棵喝毅侨约梁。上海森雄科技实业有限公。血清免疫球蛋白的检测取患戈，用8抗凝后取血浆备用。取己打算好的血浆，加入相应的试剂，运用同立生化分析仪分别检测免疫。，注入含肝素钠抗凝剂的玻璃管中，轻摇混匀，取干燥玻璃淋巴细胞分别液，将稀释好的全血用移液器缓慢加入有淋巴细胞分别液的试管中。Q刈殴壁诩樱俣纫B,运用水平离心机。嬲。离心。的喝芙跟。12.疵绡。分。标记羊。抗鼠。淖急福杭尤稀释运用。.。检测程序

5、单个核细胞悬液。肛。尤敕肿昂玫牡遍豢固骞茎校。湿盒ee12.湿盒。次，弃上清。.。结果检查及推断本试验采纳双抗体夹心。赳8法.用抗人细胞因子单抗包被子酶标板上，标准品和样品中的人细胞因子与单抗结合，加入生物素化的抗人细胞因子抗体，形参照试剂盒说明检测细胞因子，详细步骤如下：。.样品打算。将反应板充分混匀后置ec。洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤。次，向滤纸上印干。匏准用副昕固骞饕试验前材科与方法。IU出所需数量的板条，其余密封放回。建立标准曲线：设标准孔。祝。靠字懈骷尤昨。废鸵孔加。每孔中加入第一抗体工作液。将反应板充分混匀后置。靠准尤包孜网X；饕。妍荡从.。终止液混匀。.。结果计算与推断。全部

6、。值都应减除空白值后再行计算。之。值在依据样品。值在该曲线图上查出相应人.含量。.。样品打算.样品检测试验前取出所需数量的板条，其余密封放回。，建立标准曲线：设标准孔。祝。靠字懈骷尤脖废鸵青岛人学硕士学位论文5。孔为空白比照。将反应板充分混匀后置C靠准用副听固穿.“饕。gii从逾880。终止液混匀。.。结果计算与推断/。之值在。依据样品值在该曲线图上查出相应人。丫含量。样品打算O。样品检测材料与方法。洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤次，向滤纸上印干。每孔中加入第一抗体工作液将反应板充分混匀后置C。洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤次，向滤纸上印干。处测吸光值】欤。奔涔O:照外贾卤镜灼在。.。结果计算

7、与推断。全部。值都应减除空白值后再行计算。/。之。值在依据样品值在该曲线图上查出相应人。糊含量。g鼓，标本要求无溶血，e试验结果的统计学分析婚榻。斜冉希。绶讲贩黄敏捎出J。喊。期煨桢例.。视为有统计学意义。青岛高校硕士学位论文其次章。海三组之间爰别无统计学意义，其他两组相对无并发症组无明显的上升。见表8,。仅。：圭：。：跆脑炎并发肺水肿组叩。.，。.，叩.口度B。款。/图。三组患儿血清细胞因子含量。患儿外周血Oee腐。细胞含量义。外周血。赴外吭湛。橹。活嬖谙灾。圆钮。，其e。版./。患儿血清免疫球蛋白含量在三组之间的差异有明显差异，但脑炎并发肺水肿组患儿血清掀深。阶檄猩。叩那魔啤QG线。含量在

8、三组之间无明显变更。：组忠儿血清免疫球蛋臼含量。秫。.矿、。患儿血清补体。、。含量的检测。癌，明显低于单纯脑炎纯脑炎组与无并发症组相比较，差别无统冲学意义。脑炎并发肺水肿组患儿血清O含量与其他两组相比差别具有显著性。见表图。ex资零。例。感染的手足口病患儿，依据是否并发肺水肿及脑干脑炎进行分组，循环衰竭，伴有或不伴有手足口病或急性疱疹性咽峡炎，病情进展快速，病死率高，儿8把1.瞧骄。葆宜鹦/.两组的把1.撬肺水肿组患儿血小板含量明显高于无并发症组结果表。部分病例血常规项目列表。姓名红细胞。/。由冰倩徐方鑫于立吴杨明奥干双。王家豪陈明顺王雨晴于华鹏焦宴治陶吉容于丰硕修文斌崔佳俊刘列。青岛高校硕士

9、学位论文8。年龄/。由冰倩徐方鑫于立吴杨明奥王双。脑行液常规姓名无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无。H。H。青岛人学硕十学位论文。例IlMllMlMllNIMMMIMIMIIMIf战耿一。感染的手足口病患儿娄另百西页并发肺水肿组。-.卬。M亡。挎。单纯脑炎组探讨H。年美国首次报道。病毒后，在澳大利亚、南非及欧洲亦有.相继的报道，。世纪。年头中期，世界各地相继暴发以中枢神经系统症状为主要临床特征的大流行也分别到了年，在马来西亚沙捞越州爆发，导致并发症，。名儿章死亡，并相继在。及。年间乂爆发大流行

10、，该疫情的病例总数估计有颉。闷诠混。山。人死亡。年后，在南部的基孔肯雅和印度的一些西部地区暴发大的流行。印度最大的手足口病暴发是在。以和。鳌辎。鉴于目前缺乏有效的手足口病疫苗及行之有效的治疗手段，明确手足口病并发肺水肿的发病机制对于预防和治疗手足口病具有重要意义。有探讨认为免疫反应在。引发的肺水肿中担当着重要角色，尤其是细胞免疫应答。等的探讨结果显示合并有脑炎的忠儿体内存在可变更的细胞免疫应答。针对体液免疫应答在。相关手足口病合并肺水肿中的作用尚存在较大争议，有有干脆的试验数据证明，而且对于参加体液免疫的补体分子在病程中的变更的探讨报道甚少；并且与免疫应答相关的细胞因子在疾病进程中变更的探讨争

11、辩较多，因此本试验通过设立不同比照组的方法，对。例手足口病例分别从免疫球蛋白及补体、免疫细胞及细胞因子等方面进行免疫功能的探讨，旨在为临床治疗及疫苗的开发应用供应试验依据。青岛高校硕十学位论文本试验对。例手足口病患儿的血清免疫球蛋臼检测结果显示，脑炎合并肿水肿感染后引发的肺水肿进展中并没有大量的免疫球蛋白被释放。补体是由肝细胞产生的可以参加体液免疫应答的大分子物质，在体内补体可以通过不同途径被激活后宜接参加免疫反应及其调整，帮助清除机体循环免疫熨合物。在一些病毒或细菌感染的病例中，常出现总补体甚至是。、含量下降0.本探讨的结果显示脑炎合并肺水肿组患儿血清、。含量明显下降，与其它两组比较差异具有

12、统冲学意义。探讨提示在肺水肿的发病过程中，存在补体消耗。总之,目前对于8病毒感染引发的手足口病暴发流行尚无特异有效的预防疫苗和抗病毒药物，尤其是针对。感染引发的严峻并发症如神经源性肺水肿，其发病机制并没有彻底明确，临床治疗中只能针对症状赐予相应的处理，无法做到早预防、早治疗，导致病死率极高。因此，进一步的探讨仍需加强对相关手足口病并发症机制的探讨。本试验探讨认为细胞免疫以及某些特定细胞因子在感染后引发的手足口病合并肺水肿的进程中起了重要作用，但体液免疫应答可能并没有参加其中，并且该过程中却伴随着补体量的消耗。由于受所检测标本数量、实验指标量以及取样时间的限制，手足口病并发神经源性肺水肿更加深化

13、的发病机制有待进一步探讨明确。青岛高校硕上学位论文。20.匝撞7.7.嗡鬃榛级口丫等炎性细胞因子异样过度释放，可能是引起。病毒感染所致手足口病并发神经源性肺水肿病程进展的重要因素。乩匝撞7.7.嗡。鬃榛樽。周血。等淋巴细胞明显削减，使得患儿体内细胞免疫功能降低，进而影响到机体对。病毒的清除而使病情向纵深参考文献瓶，。矩，矩.。.。言，。.。：令.。,/.：。，。：.。，。,。.：。培。部，。甑，.。基因及临床特征，泄贝。圃乂荆008：。.，.，。令。，。,。e/.。:.-。，。，。：.近年来，我国部分地区出现手足口病的大流行，其中以年爆发于山东东部地区以及河南部分地区的手足口病最为严峻。通常状

14、况下，%的手足口病病例为H限性疾病。肠道病毒。感染是引起手足口病f录。狠。珀。的主要病原体，Hee年美国首次报道后，在澳大利亚、南非及欧洲亦有相继的报道。我国的台湾地区分别在、。及年间爆发大流行。感染通常属于自限性，多发生于婴幼儿，可引起手、足、口腔等部位的疱疹，但是一旦迁延即可进展为无菌性脑炎及脑干脑炎。并发脑干脑炎后的显著特征是高。年，在美国加利福尼亚州首次被从患有中枢神经系统疾病的婴儿粪行。世纪年头中期，世界各地相继暴发以中枢神经系统症状为主要临床特征印度最大的手足口病暴发在。在中国安徽阜阳。年爆发大流行，蒙。的传染源及传播途径。该病毒主要是通过飞沫传播，也可能通过干脆接触进行传播。该疾

15、病存在亲密计睽阅诳烧嫉椒2.s款。谛录悠碌翅肿罅鹿兄校例患洗2.；点畛盘柑。、疱疹液，脑脊液，眼拭子和组织。除脑行液标本外，其它标本在运往试验室的过程中须要病毒运输介质，并将其保存在。病毒的干脆分别可对疑似患者标本进行肠道病毒分别，它是诊断肠道病毒的金标准【1.另议在采集标本时，的好同时采集咽拭子和另外一种类型的标本，以提高标本的阳性。血清学检测血清学检测可用于回顾性诊断，所用配对血清标本取自急性期和复原期，一般。组织标本的免疫组化技术检测。技术。技术可克服上述检测方法中费时、费劲，无法满意病毒流行期间刚好处一般的由病毒性脑膜炎导致的发烧，头痛，颈项僵硬，或背部难受等类似症状通常到目前为止，。

16、感染导致肺水肿的发病机制尚不明确，病毒的干脆侵扰是被学术界所公认的，通过对台湾年死亡患儿的组织免疫组化试验，运用单克隆鼠抗。抗体检测，仅在中枢神经系统的神经元、突触及炎性区域包括大脑皮层、脑干、脊髓肠病毒抗原和核酸着色阳性【】。电镜下脊髓显示包含散在小核糖核酸病毒样颗粒及病毒包含体的高空泡状神经元，提示有病毒干脆侵扰。神经源性肺水肿是目前探讨的热点，探讨认为，脑脑炎造成视丘下部和延髓孤束核功能紊乱，机体的应激反应导致交感神经兴奋，血中儿茶酚胺。签舷假亍f咨缪眩假氐。含量显著增高，进而全身血管收缩，血流淌力学急剧变更，动脉血压急剧增高，体循环内大量血液进入肺循环内，一方面肺毛细血管床有效滤过压急

17、剧增高，大量体液淋留在肺组织间隙，从而形成肺水肿：另一方面血流冲击造成血管内皮细胞损伤，司时体内血管活性物质。缱梢泛突杭马牡大量释放，使血管通透性增加，大铭议的一种机制，病毒感染后激发机体免疫反应，释放多种细胞因子，形成风暴引起全身炎症反应，导致多脏器功能衰竭。在脑干脑炎患儿中，发生神经系统细胞因子。IIY椭卵滓尿西灾搀R餐、肿瘤坏死因子.旺。朦。组的水平与正常比照组相比显著增高。鉴于上述的探讨结果，认为感染引起的神经性肺水肿可能与炎症性细胞因子的大量释放行关，有必要对。感染患儿进行相关细胞因子的检测。探讨认的结果，认为血液动力学因素与肺水肿无关，与细胞免疫休戚相关，相关的活性淋要作用。有学者

18、发觉一些先天免疫球蛋白缺乏症患者在感染肠道病毒后也可发展为致命的并发症，因此认为体液免疫并没有参加相关的免疫应答反应，但是目前并没有探讨明确发觉。感染患儿体内无体液免疫的发生。大多为自限性疾病，目前治疗尚缺乏特异、高效的抗病毒药物。治疗主要是对症处理，针对发烧运用退热药。缙巳认。：针对皮肤的疮痛赐予止痛处理。缴适。陋。，对于年龄较小的患儿，因为发生口腔溃疡而比较苦痛，应赐予适当的干预，如冷饮喂养通常比较简单接受，同时母亲应赐予更多的关照。另外比较症状较轻时很少须要住院治疗，除非患儿发生神经系统的并发症。类似的患儿一引，。口服汲取好、副作用小，其机制可能为通过阻挡病毒与宿主细胞受体的结合而抑制病

19、毒复制。探讨认为预防手足口病的有效方法之一就是研制相应有效的疫苗，但目前尚无青岛高校硕十学位论文。见镜娜沼闷芳笆尘叩染。荆级啾慵芭判刮镉。漂白粉澄清液浸泡，衣物置阳光下暴晒，室内保持通风换气；加强物品消毒，用碘酒或者氧化剂都可以杀灭病毒，比如。消毒液。：另外还可通过紫外线照耀、高温晒蒸煮来杀灭病毒。加强饮水和食物的消毒。和其他一些肠道病毒耐酸，对胃酸有极强的反抗力，所以当水源被污染后就比较简单出现大的肠道传染病流行：患病儿童接触，削减被感染机会；。医院加强预诊，设立特地诊室，严防交叉感染：中枢神经系统损害及脑音液变更金奇编.医学分子病毒学。北京：科学出版社，：.，,。，.。，。镀。獴。.。：，

20、。培，。-。，。狰。：瓶。8。：。：。瓶eeeeeeee：新。，.0.吴艳.。例手足口病流行病学分析。泄却窖Beeeeexe.。.。青岛人学硕士学位论文令令.。e,。,。.,*，。.。.。，e。,。瑙。班。.。峰。两。ee狠-。，.。,。：*，.令。,。.。，。.疯。：。.。，H，。，。8。的。.。：丹。.。调。*。眶，。，,.。城，,。0.。一。.。.88,。裳。,8。青岛高校硕上学位论文攻读学位期间的探讨成果平的变更.齐鲁医学杂志，。：.。.致谢致谢值此论文完成之际，诚心感谢导师王静老师的悉心指导，她严谨的治学看法，科学的思维方式，敏锐的科研洞察力，深深感染了我，使我受益匪浅。向全部关切我、帮助我的老师和同学致以最真挚的谢意。感谢青岛高校医学院免疫教研室各位老师和同学在试验过程中赐予我的帮助。感谢青岛市妇女儿童医疗保健中心的领导、同事及我的家人在我工作和课题完成过程中赐予我的大力支持和帮助。