发酵工程原理与技术_江南大学.docx

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1、第七章生产菌种的扩大培育与保藏目前工业规模的发酵罐容积已达到几十立方米或几百立方米。如按百分之十左右的种子量计算，就要投入几立方米或几十立方米的种子。要从保臧在试管中的微生物菌种逐级扩大为生产用种子是一个由试验室制备到车间生产的过程。其生产方法与条件随不同的生产品种和菌种种类而异。如细菌、酵母菌、放线菌或霉菌生长的快慢；产狗子力量的大小；及对养分、温度、需氧等条件的要求均有所不同。因此，种子扩大培育应依据菌种的生理特性，选择合适的培育条件来获得代谢旺盛、数量足够的种子。这种种子接入发酵罐后，将使发酵生产周期缩短，设施采用率提高。种子液质量的优劣对发酵生产起着关键性的作用。种子扩大培育:是指将保

2、存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培育而获得肯定数量和质量的纯种过程。这些纯种培育物称为独壬。发酵工业生产过程中的种子的必需满意以下条件：（1）菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐后能快速生长，迟缓期短；（2）生理外形稳定；（3）菌体总量及浓度能满意大容量发酵罐的要求；（4）无杂菌污染；（5）保持稳定的生产力量。第一节种子的制备过程在发酵生产过程中，种子制备的过程大致可分为两个阶段:（1）试验室种子制备阶段（2）生产车间种子制备阶段E6r杵Fr大公讣汽S冏I-砂士Ik子；e一右:K干燥君子；&-语自次4一平瓶价.味恰技停工一妹孑珞扑

3、面心讣：&一三办均不必筠界；7*s-Hz）U-常蚌始一、试验室种子的制备试验室种子的制备一般采纳两种方式：对于产狗子力量强的及狗子发芽、生长繁殖快的菌种可以采纳固体培育基培育抱子，抱子可直接作为种子罐的种子，这样操作简便，不易污染杂菌。对于产泡子力量不强或狗子发芽慢的菌种，可以用液体培育法。（一）抱子的制备1,细菌抱子的制备细菌的斜面培育基多采纳碳源限量而氮源丰富的配方。培育温度一般为37。细菌菌体培育时间一般为12天，产芽泡的细菌培育则需要510天。2,霉菌抱子的制备霉菌抱子的培育一般以大米、小米、玉米、数皮、麦粒等自然农产品为培育基。培育的温度一般为2528。培育时间一般为414天。3,放

4、线菌抱子的制备放线菌的抱子培育一般采纳琼脂斜面培育基，培育基中含有一些适合产抱子的养分成分，如戴皮、豌豆浸汁、蛋白陈和一些无机盐等。培育温度一般为28。培育时间为514天。（二）液体种子制备1,好氧培育对于产泡子力量不强或抱子发芽慢的菌种，如产链霉素的灰色链霉菌（5.griseus）产卡那霉素的卡那链霉菌（S.Kanamuceticuss）可以用摇瓶液体培育法。将抱子接入含液体培育基的摇瓶中，于摇瓶机上恒温振荡培育，获得菌丝体，作为种子。其过程如下：试管一三角瓶一摇床一种子罐2,厌氧培育对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等），其种子的制备过程如下：试管一三角瓶一卡式罐一种子罐例如生产啤酒的酵母菌一

5、般保存在麦芽汁琼脂或MYPG培育基（培育基配制：3克麦芽浸出物，3克酵母浸出物，5克蛋白月东，10克葡萄糖和20克琼脂与升水中）的斜面上，于4冰箱内保藏。每年移种34次。将保存的酵母菌种接入含IOml麦芽汁的500-IOOOmI三角瓶中，再于25C培育23天后，再扩大至含有250-500ml麦芽汁的500-100Oml三角瓶中，再于25培育2天后，移种至含有5-1OL麦芽汁的卡氏培育罐中，于1520C培育35天即可作IOOL麦芽汁的发酵罐种子。从三角瓶到卡氏培育罐培育期间，均需定时摇动或通气，使酵母菌液与空气接触，以有利与酵母菌的增殖。二、生产车间种子制备试验室制备的抱子或液体种子移种至种子罐

6、扩大培育，种子罐的培育基虽因不同菌种而异，但其原则为采纳易被菌采用的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐等，假如是需氧菌，同时还需供应足够的无菌空气，并不断搅拌，使菌（丝）体在培育液中匀称分布，获得相同的培育条件。1,种子罐的作用：主要是使抱子发芽，生长繁殖成菌（丝）体，接入发酵罐能快速生长，达到肯定的菌体量，以利于产物的合成。2,种子罐级数的确定种子罐级数:是指制备种子需逐级扩大培育的次数，取决于：（1）菌种生长特性、泡子发芽及菌体繁殖速度；（2）所采纳发酵罐的容积。比如：细菌:生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。茄子瓶一种子罐一发酵罐霉菌：生长较慢，如青霉菌，三级发酵抱子悬浮液一一级种子

7、罐（27,40小时抱子发芽，产生菌丝）一二级种子罐（27C,1024小时，菌体快速繁殖，粗大菌丝体）一发酵罐放线菌:生长更慢，采纳四级发酵酵母:比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级种子3,确定种子罐级数需留意的问题（1）种子级数越少越好，可简化工艺和掌握，削减染菌机会（2）种子级数太少，接种量小，发酵时间延长，降低发酵罐的生产率，增加染菌机会（3）虽然种子罐级数随产物的品种及生产规模而定。但也与所选用工艺条件有关。如转变种子罐的培育条件，加速了胞子发芽及菌体的繁殖，也可相应地削减种子罐的级数。其次节种子质量的掌握一、影响布子质量的因素及掌握影响泡子质量的因素通常有：培育基、培育条件、培育时间

8、和冷藏时间等。1,培育基生产过程中常常消失种子质量不稳定的现象，其主要缘由是原材料质量波动。例如在四环素、土霉素生产中，配制产抱子斜面培育基用的熟皮，因小麦产地、品种、加工方法及用量的不同对抱子质量的影响也不同。蛋白陈加工原料不同如鱼陈或骨膝对抱子影响也不同。原材料质量的波动，起它要作用的是其中无机离子含量不同，如微量元素Mg2+、Cu2+.Ba2+能刺激抱子的形成。磷含量太多或太少也会影响抱子的质量。水质的影响：地区不同、季节变化和水源污染，均可造成水质波动，影响种子质量。菌种在固体培育基上可呈现多种不同代谢类型的菌落，氮源品种越多，消失的菌落类型也越多，不利于生产的稳定。解决措施:（1）培

9、育基所用原料要经过发酵试验合格才可使用；（2）严格掌握灭菌后培育基的质量；（3）斜面培育基使用前，需在适当温度下放置肯定时间；（4）供生产用的泡子培育基要用比较单一的氮源，作为选种或分别用的培育基则采纳较简单的有机氮源。2,培育条件（1）温度温度对多数品种斜面泡子质量有显著的影响。如土霉素生产菌种在高于37。C培育时，狗子接入发酵罐后消失糖代谢变慢，氨基氮回升提前，菌丝过早自溶，效价降低等现象。一般各生产单位都严格掌握胞子子斜面的培育温度。（2）湿度制备斜面抱子培育基的湿度对抱子的数量和质量有较大的影响。例如土霉素生产菌种龟裂链霉菌，胞子制备时发觉：在北方气候干燥地区抱子斜面长得较快，在含有少

10、量水分的试管斜面培育基下部抱子长得较好，而斜面上部由于水分快速蒸发呈干疤状，泡子稀有。在气温高含湿度大的地区，斜面抱子长得慢，主要由于试管下部冷凝水多而不利于抱子的形成。从表中看出相对湿度在40%45%时泡子数量最多，且抱子颜色匀称，质量较好。表7/不同相对湿度对龟裂链霉菌斜面生长的影响相对湿度（）斜面外观活抱子计数（亿/支）16.5-19上部淡薄、下部稠略黄1.225-36上部薄、中部匀称发白2.340-45一片白，抱子丰富，稍皱5.73,培育时间和冷藏时间（1）培育时间一般来说，年轻的抱子不如年轻的刑子，由于年轻的胞子已在逐步进入发芽阶段，核物质趋于分化状态。过于年轻的泡子会导致生产力量的

11、下降。解决措施:抱子培育的时间应当掌握在他子量多、抱子成熟、发酵产量正常的阶段终止培育。（2）冷臧时间斜面冷藏对抱子质量的影响与抱子成熟程度有关。如土霉素生产菌种抱子斜面培育4天左右即于4C冰箱保存，发觉冷藏78天菌体细胞开头自溶。而培育5天以后冷藏，20天未发觉自溶。冷藏时间对徇子的生产力量也有影响。例如在链霉素生产中，斜面抱子在6冷藏两个月后的发酵单位比冷藏一个月降低18%,冷藏3个月后降低35%。4,接种量接种量大小影响到培育基中狗子的数量，进而影响菌体的生理状况。二、影响种子质量的因素及掌握生产过程中影响种子质量的因素通常有：泡子的质量、培育基、培育条件、种龄、接种量。1,培育基种子培

12、育基要满意以下要求：（1）养分成分适合种子培育的需要（2）选择有利于抱子发芽和菌体生长的培育基；（3）养分上要易于被菌体直接汲取和采用；（4）养分成分要适当丰富和完全，氮源和维生素含量要高（5）养分成分要尽可能与发酵培育基相近。2,培育条件(1)温度(2)通气量在种子罐中培育的种子除保证供应易被采用的培育基外，有足够的通气量可以提高种子质量。例如，青霉素的生产菌种在制备过程中将通气充分和不足两种状况下得到的种子分别接入发酵罐内，它们的发酵单位可相差1倍。但也有例外，例如土霉素生产菌，一级种子罐的通气量小对发酵有利。3,种龄种龄:是指种子罐中培育的菌丝体开头移入下一级种子罐或发酵罐时的培育时间。

13、通常种龄是以处于生命力极旺盛的对数生长期，菌体量还未达到最大值时的培育时间较为合适。时间太长，菌种趋于老化，生产力量下降，菌体自溶；种龄太短,造成发酵前期生长缓慢。不同菌种或同一菌种工艺条件不同，种龄是不一样的，一般需经过多种试验来4,接种量接种量:是指移入的种子液体积和接种后培育液体积的比例。接种量的大小打算于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度，采纳较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可削减杂菌的生长机会。但接种量过大或者过小，均会影响发酵。过大会引起溶氧不足，影响产物合成；而且会过多移入代谢废物，也不经济；过小会延长培育时间，降低发酵罐的生产率。14C

14、lE3n蠢800、LI1It13679接种显（）接种运对靛性生H诲产生的影响通常接种量，细菌15%,酵母菌510%,霉菌715%,有时2025%三、种子质量的掌握措施种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产力量。因此首先必需保证生产菌种的稳定性，其次是供应种子培育的相宜环境保证无杂菌侵入，以获得优良种子。因此在生产过程中通常进行以下两项检查。（1）菌种稳定性的检查（2）无（杂菌）检查四、种子质量标准1,细胞或菌体菌丝形态、菌丝浓度和培育液外观（色素、颗粒等）单细胞：菌体健壮、菌形全都、匀称整齐，有的还要求有肯定的排列或形态；霉菌、放线菌：菌丝粗大、对某些染料着色力强、生长旺盛、菌丝

15、分枝状况和内含物状况好。2,生化指标种子液的糖、氮、磷的含量和PH变化。3,产物生成量在抗生素发酵中，产物生成量是考察种子质量的重要指标，由于种子液中产物生成量的多少间接反映种子的生产力量和成熟程度。4,酶活力种子液中某种酶的活力，与目的产物的产量有肯定的关联。五、种子特别分析菌种生长速度，过快或过慢菌丝结团菌丝粘壁第三节实例一、谷氨酸发酵的菌种扩大培育斜面菌种一一级种子培育一二级种子培育一发酵罐L斜面菌种的培育菌种的斜面培育必需有利于菌种生长而不产酸，并要求斜面菌种肯定纯，不得混有任何杂菌和噬菌体，培育条件应有利于菌种繁殖，培育基以多含有机氮而不含或少含糖为原则。(1)斜面培育基组成葡萄糖0

16、.1%,蛋白陈1.0%,牛肉膏1.0%,氯化钠0.5%,琼脂2.02.5%,pH7.07.2(传代和保臧斜面不加葡萄糖)。(2)培育条件3334C,培育1824h2,一级种子培育一级种子培育的目的在于大量繁殖活力强的菌体，培育基组成应以少含糖分，多含有机氮为主，培育条件从有利于长菌考虑。(1)培育基组成葡萄糖2.5%,尿素0.5%,硫酸镁0.04%,磷酸氢二钾0.1%,玉米浆2.53.5%(按质增减)，硫酸亚铁、硫酸镒各2ppm,pH7.0o(2)培育条件用IOoOmL三角瓶装入培育基200ml,灭菌后置于冲程7.6cm、频率96次min的往复式摇床上振荡培育12h,培育温度3334。(3)一

17、级种子质量要求种龄：12h,PH值：6.40.1光密度：净增OD值0.5以上残糖：0.5%以下无菌检查：(-)噬菌体检查：(-)镜检：菌体生长匀称、粗大，排列整齐革兰氏阳性反应。3,二级种子培育为了获得发酵所需要的足够数量的菌体，在一级种子培育的基础上进而扩大到种子罐的二级种子培育。种子罐容积大小取决于发酵罐大小和种量比例。(1)培育基组成培育基组成()T6-13B9T738AS1.299水解糖2.52.52.52.5玉米浆2.5磷酸氢二钾0.150.150.20.1硫酸镁0.040.040.050.04尿素0.40.40.50.5Fe(ppm)2222Mn(ppm)2222pH6.8-7.0

18、7.0(2)培育条件接种量：0.81.0%培育温度：3234C培育时间：78h通风量：50L种子罐1:0.5搅拌转速340r/min；250L种子罐1:0.3搅拌转速300rmin500L种子罐1:0.25搅拌转速230rmin(3)二级种子的质量要求种龄：78hpH：7.2左右OD值净增0.5左右无菌检查(-)噬菌体检查(-)二、啤酒酵母的扩大培育一般可采纳三级扩大培育，扩大倍数：第1级到第2级为8-10倍，第2级到第3级为46倍。1,试验室扩大培育斜面原种斜耐舌化一眶Wml麦根管一加废W三角鞠养一25C34天25匕243625t,24h30Oml麦归角踊养300Om凌汁三角懒养-IOL耕卡

19、氏睇养(容量15L)22-25tf24h2022匕24h1820t,2436h2,车间扩大培育II沃生城IOOL,火於麦汁UOLI1476七III2-ak.20kPfl1介去J-消渣60L沉淀解36QI次奇友汁*如kPa卜OOL天窗,麦；I-余20L1。-12七，培养23天I 回L培养液种r球存1簧： 20ka1个月1416C培养24b繁效球IOOoiX有O犬的麦汁300LI1214t,培养24h追加灭菌麦汁600LIIO-Ia七.陪养Ml繁殖耀4500L(有低)加麦汁40OaL19Ut:,培养24h20m，双肝解加龙汁至IQmaI81】P.始养24bI麦汁绐20?8T”薛7-8天U代酹母第三

20、节生产发酵罐的无菌接种生产规模发酵罐的接种，包括两个方面：从试验室摇瓶或抱子悬浮液容器中移种入一个种子罐；从一个种子罐移入另一个生产发酵罐中。（1）从试验室摇瓶或抱子悬浮液容器接种通常有两种方式袍子怒浮液笠器生产发群输、2,从种子罐接种第四节菌种的保藏与复壮一、菌种的保藏1、菌种保藏的意义菌种是从事微生物学以及生命科学讨论的基本材料，特殊是采用微生物进行有关生产如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学讨论和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不致死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。2、菌种保藏的原理菌种保藏主要是依据菌

21、种的生理生化特点人工制造条件使抱子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以削减其变异。一般可通过保持培育基养分成分在最低水平缺氧状态，干燥和低温，使菌种处于“体眠”状态，抑制其繁殖力量。一种好的保藏方法首先应能长期保持菌种原有的优良性状不变，同时还需考虑到方法本身的简便和经济，以便生产上能推广使用。3、菌种保藏的方法(1)斜面低温保藏法将菌株接种于合适斜面培育基上，待生长好后置于4冰箱保藏，每隔肯定时间进行移接培育后再将新斜面连续保娥。这种保藏方法简洁，存活率高，易于推广，常常使用的菌种可采纳这种方法。其缺点是菌种仍有肯定强度的代谢活动条件，保存时间不长，而且传代多，因此菌种客易产生变异。（2）石蜡油

22、封保藏法将生长好的新奇斜面在无菌条件下倒入已灭菌的液体石蜡，油层要高出斜面上端ICnb使之与空气隔绝，然后垂直放于室温或冰箱内保藏即可。这种方法也比较简便，且保臧时间一般可长达1年以上。适于保存部分霉菌、酵母菌、放线菌，但对细菌效果较差，对某些能同化煌类的微生物则不适用。（3）砂土管保藏法将胞子悬浮液转移至灭过菌的砂土管中，于真空干燥器内用真空泵抽干，再转至有干燥剂的容器中，密封低温保臧。本方法是用人工方法模拟自然环境使菌种得以栖息。适用于细菌的芽胞、霉菌和放线菌胞子的保藏，不适于对干燥敏感的无芽抱的细菌和酵母菌。主要包括砂土制备和真空抽干两步。（4）冷冻干燥法此法的原理是在低温下快速将细胞冻

23、结以保持细胞结构的完整，然后在真空下使水分升华。这样菌种的生长和代谢活动处于极低水平，不易发生变异和死亡，因而能长期保存，一般为510年。微生物在此条件下易死亡，所以需加入一些物质作爱护剂，一般常用的是脱脂牛奶、血清等。该法存活率高，变异率低，并能广泛适用于细菌（有芽泡和无芽抱的）、酵母、霉菌抱子、放线菌狗子和病毒等，因此是目前广泛采纳的好方法。其缺点是手续麻烦，操作简单，要求严格，并需有肯定设施条件。（5）超低温保臧法由于现在超低温冰箱的使用己较普及，所以菌种的超低温保藏法在生产企业和讨论机构已得到广泛应用。该方法的要点是：将要保藏的菌种置于10%甘油或二甲基亚飒爱护剂中，密封于试管或安能管

24、中，然后将其放入超低温冰箱中于-70下保臧。该法简便易行，而且保臧效果较好。二、发酵工业微生物菌种的衰退与复壮微生物具有生命活动力量，其世代时间一般是很短的，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此常常造成工业生产菌种的退化，并有可能使优良菌种丢失，所以,如何保持菌种优良性状的稳定是讨论菌种保藏的重要课题。（一）微生物菌种的衰退菌种退化通常是指在较长时期传代保娥后，菌株的一个或多个生理性状和形态特征渐渐减退或消逝的现象。常见的菌种衰退在形态上表现为分生抱子的削减或菌落颜色的转变。在生理上常指菌种发酵力量的降低，有些菌的抗噬菌体力量下降。对诱变育种而获得的高产变异株则常表现出恢复野生型性状等。但菌种

25、的真正退化必需与由于环境缘由变化而引起菌种形态、和生理上的变异区分开来。如培育基中微量元素缺乏会导致抱子数量削减，也会引起抱子颜色的转变。此外，温度、pH、不同碳氮源都会导致菌种变化。但只要一旦恢复正常条件，这些现象就会消逝。此外，杂菌污染也会造成菌种退化的假象。因此，必需正确推断是否退化，才能找出正确的解决方法。一般菌种退化是从量变到质变渐渐发生的，同时也是整个群体中产量降低及其相联系的种种特性的变化，而不是指单个细胞的转变。引起菌种退化的缘由主要有：1、基因突变菌种退化的主要缘由是有关基因的负突变。假如掌握产量的基因发生负突变则会引起产量下降，假如掌握抱子生成的基因发生负突变则他子性能就会

26、下降。当然,这些负突变都是自发形成的。常常处于旺盛生长状态的细胞比休眼状态细胞发生突变的机率大得多。在发酵生产中常用养分缺陷型突变株，如缺陷型发生回复突变就会使产量水平下降。如粘质赛氏杆菌（SeZTZ彷marcescens）H-2892菌株生产力为18gL组氨酸，经5次传代后因回复突变型增多，产量下降至4gL很多抗生素生物合成、产生气生菌丝和色素等性状都部分或全部受质粒基因掌握。当菌株连续传代、菌体发生质粒脱落而消失大量光秃型菌落，则生产力量也显著下降。2、变异菌株性状分别变异菌株性状分别也会引起高产型状的丢失。在菌种筛选工作中常常遇到初筛摇瓶产量很高，复筛产量渐渐下降而被淘汰的现象，在霉菌中

27、更为常见。这是一种广义的退化现象。当诱变的单菌落是由一个以上抱子或细胞形成，而其中只有一个抱子或细胞是高产时，在移接传代过程中，这个高产菌株数量削减，当然产量也就下降。即使菌落是由一个抱子或单个细胞形成，只要它是多核细胞，在诱发突变中核的变化不会都一样，随着菌种传代和核的分别也会使性状表现多样化，产量也会随之变化，即使是单核抱子发生突变时，假如双链DNA上仅一条链上某个位点发生变化，经移殖后也会消失性状分别。因此一个较稳定的变异株的获得必需经过多次分别纯化。为了得到较多纯种，有人考虑提高诱变剂量，使单核细胞DNA双链中一条链的某一点发生突变，另一条链完全失活不再复制来提高纯菌产生率。通过试验得

28、到下表所示数据。不同剂量紫外线处理裂殖酵母时不纯菌落百分数剂量（以存活率计，%）菌落总数突变菌落数突变频率（突变菌落103）不纯菌落（%）纯不纯IOO（对比）1216510.0880-10012060131224360-8085534620273020-604922651716.7211-2098841952822.613诱变突变株的稳定性和诱变剂作用机制有关，一般认为诱发DNA碱基转换或颠换时不稳定菌株消失较多，而诱发缺失交界时不稳定菌株消失较少，由于缺失是不能回复的。3、连续传代连续传代也是菌种退化的直接缘由。个别细胞性状转变不足以引起菌种退化，经多次传代，退化细胞在数量上占优势，于是退化

29、性状表现逐步明朗化，最终成为一株退化菌株。以芽泡杆菌的黄喋吟缺陷型在斜面上移殖代数对回复突变率和产量的关系为例，如下表所示。产腺背的黄喋吟缺陷型菌株在接种传代过程中产量和回复子数量间的关系试抬移接代数每代斜面保存时间（天）回复子比数腺昔产量（gL）1O1471/4.5IO613.522133,141/2.4XlO614.93647,3,9,3,71,141/2.2XlO510.74747,3,9,3,13,58,141/3.5IO513.15947,3,9,3,13,8,3,47,41/5.3X108.161247,3,9,3,13,8,3,4,14,6,6,311/1.OXIO37.4由上表

30、可见，虽菌种总的保存时间都是147天，但随着移植代数的增加，回复突变率也增加，腺营产量下降。这也说明，退化并不突然明显，而是当退化细胞在繁殖速率上大于正常细胞时，每移植一代，使退化细胞的优势更为显著，从而导致退化。4、其它因素其它如温度、湿度、培育基成分及各种培育条件都会引起菌种的基因突变。例在保藏菌种中基因突变率就随温度降低而削减，又例在产腺昔的黄膘吟缺陷型中，若在培育基中加入黄喋吟、鸟喋吟及组氨酸和苏氨酸可降低回复突变的数量。（二）防止菌种衰退和退化菌种的复壮1、防止菌种衰退防止菌种衰退的方法有：（I）掌握传代次数基因的变化往往发生在复制和繁殖过程中，繁殖越颇繁，复制的次数越多，基因发生变

31、化的机会也就越多。因此应当尽量避开不必要的接种和传代，把传代次数掌握在最低水平，以降低突变机率。一般状况下，斜面每移植一代，霉菌、放线菌、芽胞杆菌在低温下可保藏半年左右，酵母可保臧3个月左右，无芽抱细菌可保藏1个月左右。为此，生产菌种每移植一代，最好同时移植较多的斜面，以供一段时间生产之需，这样移植次数就可削减。（2）选择合适的培育条件培育条件对菌种衰退有肯定的影响，选择一个适合原种生长的条件可以防止菌种衰退。此外，生产上应避开使用陈旧的斜面菌种。（3）采用不同类型的细胞进行传代在放线菌和霉菌中，由于它们的菌丝细胞常含有很多核，甚至是异核体，因此用菌丝接种时就会消失衰退和不纯的子代。而抱子一般

32、是单核的，采用抱子来接种，可以达到防止衰退的目的。但是这也必需留意到微生物细胞本身的特点。对构巢曲霉来说，采用它的分生泡子传代易发生衰退而用它的子囊胞子移种则不易退化。（4）选择合适的保臧方法采纳有效的菌种保藏方法也可以防止菌种的衰退。由于菌种衰退的状况不同，对有些衰退缘由还不甚了解，因此要切实解决详细问题，需依据实际状况，通过试验正确地加以运用。2、退化菌种的复壮使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性，称为复壮。常用的方法是对已退化菌株用肯定培育条件进行单细胞分别纯化。从而限制退化菌株在数量上占优势，最终淘汰已退化菌落而使原菌株得得以复壮。例如用高剂量UV或再配以低剂量NTG对退化菌株进行处理，可得到较多的纯菌落，又如选择一一种对退化型菌株细胞核具有更大杀伤力的诱变剂亦可使原菌株得到复壮。但这工作量不亚于新突变株的诱变育种，此外，用遗传方法选育不易退化的稳定菌株或采纳双缺、三缺菌株及削减传代次数等方法，都可防止菌种退化，保存稳定菌株。