9.肉与肉制品中 L-( )-谷氨酸含量的测定（报批稿）.docx

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1、ICS67.120.10CCS22G日中华人民共和国国家标准GB/TX202x/ISO4134：2021肉与肉制品中1.-(+)-谷氨酸含量的测定Determinationof1.+)-g1.utamicacidcontentinmeatandmeatproducts(ISO4134：2021.MeatandmeatproductsDeterminationof1.-(+)-g1.utamicacidcontentReferencemethodJDT)-X-XX发布X-X-XX实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和

2、起草规则的规定起草.本文件等同采用6。4134：2021肉与肉制品1.-（+A谷氨酸含量的测定参考方法.本文件做了下列最小限度的塘步性改动：一为与现有标准协调，将标准名称修改为肉与肉制品中1.Y+）谷赛酸含量的测定.请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由中国商业联合会提出.本文件由全国肉禽蛋制W标准化技术委员会（SAC/TC399）归口.本文件起单单位：华测检测认证集团股份有限公司、安徽国泰众信桧测技术有限公司、谙尼测试集团四川有限公司、福建中桂华日食品安全枪测有限公司.广州检物检测认证集团有限公司.合肥工业大学、山东鼎科检测技术有限公司、中山洪力健

3、质食品产业研究院有限公司、利诚检源认证集团股份有限公司.广州质监督洛洲研究院、中国肉类食品综合研究中心.上海微谙检遗认证有限公司,味斯美食品科技（安吉）有限公司,深圳市虹彩桧测技术有限公司.青岛元信检测技术有限公司,实朴检测技术（上海）股份有限公司、厦门泓益检测有限公司、南京市食品药品监&检验院、台州市食品药品检验研究院、田庆市华测检测技术有限公司、中国商业联合会.本文件主要起草人刘文秋、际洪周、场柳、冉光芝、陈桂友、温文娟、王志英、癖、陈新文、卷除、王守伟、赵冰、赵燕、W,花逢超、黄胜明,雒飞飞、金宙.赵叶旗、胡文彦、JSM丽、赵铮、魏杰、脱刘扬、赵彦远、刘振宇.鲁振.肉与肉制品中1.-(+

4、)-谷氨酸含量的测定1范围本文件描述了21定肉与肉制痣中游原！-(+)-谷氨酸含量的分光光度法和光吸牧的标法.本文件适用于肉与肉制品.2规货性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，具最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.ISO648实验空玻国器In1.单容量吸量险(1.aboratOryg1.aSSWareSing1.e-vo1.umepipettes)S：GB/T12808-2015实劲空/璃仪耨fett三tt(!SO648：2008.NEQ)ISO1042实验室装璃器皿单标线容

5、量瓶(1.aboratoryg1.asswareOne-markvo1.umetricf1.asks)2：GB/T12806-2011实验空破璃仪IHi单砥线容II1.SaSoIo421998.NEQ)ISO1442肉和肉制品水分含量的测定尊窿法(MeatandmeatproductsDeterminationofmoisturecontentReferencemethod)S:GBS009.32016食肺安全B1.iR标准食品中水分的8!定(IS。1442:1997.NEQISO3696分析实版室用水规范和试SS方法(WaterfOrana1.ytiCa1.IaboratoryUSeSpec

6、ificationandtestmethods)注：GB/T66822008分析交给京用水规格和试蜿方法(】S。3696:1987.MOD)ISO8655-2活塞式容量测量仪第2部分：活塞式移液器(Piston-operatedvo1.umetricapparatusPart2:Pipettes)3术语和定义下列术语和定义适用于本文件.3.1游福1-(+)-谷氨酸free1.-()-9utamicacid以游88态存在于肉与肉制痣中的1.-(+)-谷21酸和谷强酸斑.4原理用高懿酸溶液提取测试样品中的游离1.-()-谷原酸(GH,N。,).提取液陶心.过谑，加水稀释至合适浓度，调节PH至10.

7、烟酰胺腺阴吟二核音酸(NAD)在谷氨酸税氢酶的存在下被1.-(卜谷氨酸还假，见公式(1).所得到的还原态烟酷胶原噤吟二核甘酸(NADH)在心肌黄酹的存在下与硬硝基氧化四氨建蓝(INT)反应，见公式(2),在490nm波长下测量所得甲澳的含量，升计曾测试样品的游离1.-(+)-谷氨酸含量.4M膛氧AbC5HoNO4NADH6OiNADHNH1NADH+1NT+H.”“黄入AD+申面.5抽样抽取200g以上的有代表性样品.如果不立即分析，应在0sC-4工或-18C及以下储存.6试样制备用适当的设笛（见7.2.1）均质化试样.制备时试样的温度不超过25如果使用坟肉机，至少处理2次.将制备好的试样装入

8、合适的密封容器中,应在均质后24h内分析.如果不立即分析,应在0C4-C或-18（及以下储存.7分光光度法7.1 试剂除非另有说朗，本方法所用试剂均为分析纯，水为ISO3696规定的二级水或一级水.除无机化合物溶液（7.1.1和7.1,2）外,所有溶液应存放在洁净的具塞捺色玻璃瓶中.7.1.1 高敏酸溶液:C=1.OmOI/1.警告:离氯酸与质化物、易燃物、脱水剂、还原剂接触会导致火灾或煨炸，使用者应知悉以危险性，只体请参阅附录A中列出的安全措德.量取高氨酸（70%0。=1.67gm1.）8.6m1.,用水稀释至100m1.7.1.2氮氧化押溶液：c=4mo1.1.2mo1.1.,0.5mo1

9、./1.和0.02mo1.1.的224K复化”州适R水部学冷却后山水修修至K）Om1.，=4疝1儿.M112化*JIiR水溶冷却后I用水*杵至1m1.EC编号是指国场生物化学联合会,EnzyEenodatureWIsevienAmsterdaE,196S中恰出的86分类境号.井混匀.该溶液在0P6下避光储存,有效期1周.7.4.5 溶液R3：氨化硝硝基四哇(INT)溶液，2-(4-碘笨幕)-3-硝基笨的-5-笨基氧化四理，p=0.6mg/m1.称取6mgINT于具塞的棕色小瓶中，加入IOOm1.水溶料井泯匀.该溶液在06下避光储存,有效期4周.7. 1.6溶液R123：溶液R1.溶液R2和溶液

10、R3的混合溶液量取6m1.溶液R1.2m1.溶液R2和2m1.溶液R3于具圣的愎色顼调瓶中，并在测试前溜匀.该溶液在室温下避光储存可稳定1h.8. 1,7谷氨酸脱氮的(G1.DH)溶液(Eu1.4.1.3),不低于9001Um1.标取Iomg(约900IU)的冻干谷氨酸脱氢酶(G1.DH)于具室的小瓶中，加入ImuK溶解井泯匀.该酹悬浮在疣酸筱、乙二胺四乙酸(EDTA).谷瓢酰胺陵溶液中时，在OP6P下储存，有效期12个月.9. 1.81.-(+)-谷氨酸标准储备溶液：P=100OmgZ1.林取约50.0mg-(+)-谷氨酸储确至0.0001g),溶研于约25m1.zK中，用2mo1.氢运化钾

11、溶液(7.1.2)两节PH至5-6.用0.02mo1./1.氢氧化押溶液(7.1.2)缓慢调节PH至7.0,并用水稀释至50m1.混匀该溶液在0。(：6OC下储存,有效期6个月.10. .91.-(+)谷敏酸标准溶液：P=100mg/1.量取5.Om1.1-(+)-谷叁酸标准储备溶液(7.1.8)于50m1.容量瓶(7.2.8)中，用水稀释至刻度并混匀.该溶液现配现用.11. ,101-(+)-谷氨酸系列标准溶液：p=5mg1.10mg1.15mg1.20mg1.30mg1.和40mg1.分别量取0.50m1.、1.00m1.1.50m1.2.00m1.3.0Om1.和4.0Om1.1.-(+

12、)-谷氨1酸标准溶液(7.1.9)于6个Iom1.8于瓶个.2.8)中,用水稀释至刻度并混匀.该溶液现配现用.7.2仪器和设备1.1.1 1择品均质化设笛，包括高速旋转切割机,或袋有孔径不超过4.0mm板的绞肉机.1.1.2 混匀器：搅拌器或雅荡器.1.1.3 商心机：配备50m1.三Jc100m1._离心管.1.1.4 分析天平:感量0.001g、0.0001g.1.1.5 恒温干煤箱.1.1.6 PH计.1.1.7 注绥:直径约15cm,快速或中速.7.2. 8单标容量瓶：容量为10m1.、50m1.和100m1.,应符合ISO1042的B圾标准.7.2.9 单标移液管，容量为50m1.2

13、5m1.和1m1.应符合ISO648的B级标准.7.2.10 单通道或多通道移液器和吸头：5m1.1000U1.2001.和1001.,符合ISO8655-2的要求.7.2.11塑料抹刀或盖子：用抹刀搅拌比色皿或挂前盖上盖子的比色Dn来混匀内容物.7.2.12版外分光光度计:配符在波长为490nm处具有最大透射率的泄光片或光谙仪.7.2.13比色皿：1Omm光程长度.7,3潴定步舞7.3.1通则如果需要检食是否达到可壬且性要求，则应进行2次单独的测定.7.3.2试样称取制备好的试样约25g或其他适合的质量(mJ，精确至0.001g.7.3.3提取7.3.3.1 向试样中加入50m1.商旅酸溶液

14、(7.1.1),用混匀器(7.2.2)混匀.7.3.3.2 将匀浆后的样品转移至离心营(7.2.3)中,在IoCC的温度下，以约200Og的径向加速度或等效速度(例如3S00rmin至4000rmin)离心IOmin.嘏去脂肪层，将上清液通过遮纸(7.2.7)4入100m1.锥形瓶中，弃去前10m1.的送液.7.3.3.3 用移液管(7.2.9)吸取25m1.溶液至离心管(7.2.3)中，用4mo1./1.氢家化钾溶液(7.1.2)调节pH至78,然后用2mo/1.和0.5mo/1.氮氧化钾溶液亿1.2)缓慢调节pH至10.0.以约200Og的径向加速度或同等速度(例如3500r/min至40

15、00rmin)离心3min.注：如果PH络高于10.0,可用高氨酸洛浓(7.1.11朽其调同所需的pH.7.3.3.4 所有上清液转移至50m1.容加超中(7.2.8),用水稀降至刻度并混匀.7.3.3.5 将溶液在冰中冷却IOmin,并通过海及(7.2.7)过海,并去前IOm1.的混液.7.3.3.6 吸取5m1.或其他适当体积(VJ的注液到50m1.容量？5(7.2.8)中，用水稀释至刻度并混匀.所得溶液将用于测定试择中游圈1.-(卜谷叁酸的含量.宜选择体枳心,使得溶液中的1.-(+)谷氨酸含量介于8mg1.和40mg/1.之间.7.3.4测定7.3.4.1 物测仪器的准备设置分光光度计(

16、7.2.12),预热达到平衡条件.将检测波长设置为490nm,用纯水蠲零设备基线.7.3.4.2 1.-(+)-谷氨酸试样液吸光度测定73.4.2.1将溶液R123(7.16)、水和1.(+)-谷氨酸试择液(7.3.3.6)的温度保持在20X-25X.移取1.Om1.溶液口123(7.1.6)于比色皿(7.2.13)中并加入2.01.所得溶液为空白溶液.移取1.OmI溶液R123(7.1.6)1.8m1.K和200UH+)-谷瓦酸试样液(7.3.3.6)于另一个比色皿中.所得溶液为试样液.用抹刀或盖子(7.2.11)将溶液混匀，放入分光光度计中，读取490nm波长处试样液的吸光度A1和空白溶液

17、的吸光度M.7.3.4.2.2移取501.G1.DH溶液(7.1.7)于每个比色皿中,用抹刀或盖子(7.2.11)将溶液混匀.棒置Iomin15min后，读取490nm波长处试样液的吸光度AJ和空白溶液的吸光度At,每2min读取一次包至达到恒定的吸光度.取恒定吸光度Ifi作为测试结果.宜尽可能避免反应溶液不露在光线下，溶液温度宜保持在20eC250C.7.3.4.31.-(+)谷麴酸标准溶液吸光度测定三97.3.4.2.1的操作,但将K+)-谷氨酸试样液(7.3.3.6)替换为1-(+)-谷轨酸系列标准溶液(7.1.10).读取1-(+)-谷氨酸标准溶液的吸光度Au和空白溶液的A=,.然后中

18、复7.3.4.2.2中的探作.读取(+)-谷氨酸标准溶液的吸光度AJ和空白溶液的吸光度At./.注；如果7342和7.3.43在同一依次检测73.4.3的空白溶液海定能审谿,百接取A14的伯为A”及A”的值为Aoi,.7.3.44试样水分测定按ISO1442规定的方法测定试样的水分含量.7.4结果计算和表述7.4 .11.-(+)-谷我S5标准溶液的吸光度差伯按公式(3)计算！-(+)-谷氨酸标准溶液的吸光度差：A,=(A,-A,1)-(AbZ-Abz)(3)式中：AA“一!-()谷氨酸标准溶液的吸光度差；A-标鹿溶液的吸光度,按7.3.4.3测定；A11一标准溶液的吸光度，按7.3.4.3测

19、定；一空白溶液的吸光度，按7.3.4.3测定；Ajj一空白溶液的吸光度，按7.3.4.3测定.7.4.2 1.Y+)-谷氨酸试样液的吸光度差值按公式(4)计算1-(+)-谷露酸试样液的吸光度差：A1=(Ai-Aj)-(Ab1.-Ab1.)(4)式中：A1-1.-C)-谷氨酸试样液的吸光度差；AJ-试样液的吸光度,按7.3.4.2测定；A1一试样液的吸光度，按7.3.4.2测定；A=J-空白溶液的吸光度，按7.3.4.2测定；A11一空白溶液的吸光度，按7.3.4.2测定.7.4.3 1.Y)-谷敏酸标准曲线的线性回归方程以1.-CA谷氨酸系列标准溶液亿1.10)的浓度为X坐标箱，以AAU(7.

20、4.1)为y坐标轴绘制1.-谷氨酸标漱曲然.1.-(+)谷氨酸标准曲战的线性回归方程如公式(三)所示：y=a+d(5)式中：y(+)-谷轨酸系列标准溶液的吸光度差：a一方程的系数，将数值四舍五人至1接近的OOOo1；1.(+)谷氨酸系列标准溶液的质量浓度，单位为塞克每升(mg1.);d一方程的系数.7.4.4 !-()谷敬酸试样液的浓度按公式(6)计算试样液(7.3.3.6)中1-(+)-谷氨黑的浓度：,-谷叁酸试样液(8.3.2)的温度保持在20aC-25X.移取3001.溶液R123(7.1.6)和600M水于带善的棕色玻璃小瓶(8.2.4)中.通过倒我或爆修摇动小瓶混匀溶液.所得溶液为空

21、白溶液.移取300M溶液R123(7.1.6),S401.水和60口|(+)-谷氨酸试样液(8.3.2)于棕色玻璃小瓶(8.2.4)中.通过倒我或浚慢摇动小瓶混匀溶液.所得溶液为试样液.移取3001.溶液R123(7.1.6),5401.水和60JJ1.1.(+)-谷氨酸系列标准溶液(7.1.1.o)于恰色玻潴小瓶(82.4)中.通过倒转或缓慢摇动小瓶混匀溶液.所得溶液为标准溶液.8.3.322吸取200U1.空白溶液、标准溶液和试样液(8.3.3.2.1)到同一岗孔板(8.2.3)的不同孔中.将微孑1.Ot入光吸收酶标仪中摆动Ss10s.读取49Onm波长处空白溶液的吸光度A.1.-(十)-

22、谷轨酸系列标准溶液的吸光度Ae和1.-(+)-谷凝酸试样液的吸光度A,.8.3.3.2.3移取101.G1.DH溶液(7.1.7)于每个稼色玻璃小瓶中(8.3.3.2.1),通过倒转或缓慢娓动小瓶混匀溶液.取出货孔板(8.3.3.2.2),从每个粽色城园瓶中分别吸取200P1.溶液到不同的孔中.每期建议测定3次，取平均值作为测试结果.将微孔板放入光吸收解标仪中摆动5s10s,10min-15min后，读取490nm波长处空白溶液的吸光度At.1.(卜谷烈酸系列标准溶液的吸光度Ay和1.-(+)谷氨酸试样液的吸光度AJ,每2min读取一次口至达到恒定的吸光度.取恒定吸光度俏作为测试结果.如果姆个

23、拣色玻澧瓶进行了3个微孔测定，则取3个弹孔恒定吸光度的平均值作为测试结果.直缓慢地移取或混匀以避免气泡，尽可能避免反应溶液般露在光线下，溶液温度直保持在20P250C.8.3.3.3试样水分测定同7.3.44.8.4结果计算和我述8.4. 11.-(Q-谷氨酸标准溶液的吸光度爰值按公式(8)计蚣1.(”谷氨酸标准溶液的吸光度差值：Au=(Aut-A4j)-(Ab-Abj)(8)式中：A,?一()-谷氨酸系列标准溶液的吸光度差；Ac标准溶液的吸光度,按8.3.3.2.3测定；N一标准溶液的吸光度，按8.3.3.2.2测定；AM一空白溶液的激光度,按8.3.3.2.3测定；Abs一空白溶液的吸光度

24、，按8.3.32.2测定.8.4.2 1.(+)谷氨酸试样液的吸光度差值按公式(9)计籁1-(+)-谷氨酸试样液的吸光度差：A.=(Az,-Aj-(Ab-Abj)(9)式中：A?一(-()-谷炽酸试样液的吸光度差；A2!-(+)-谷钗酸试样液的吸光度，技8.3.3.2.3测定；A,一!-(+)-谷赛酸试样液的吸光度，技833.2.2测定；Aw一空白溶液的吸光度，按8.332.3测定；A.,一空白溶液的吸光度，按8.3.3.2.23定.8.4.3 1-(+)-谷奴酸标准曲城的燃性回归方程以1.Y+)-谷茶酸系列标准溶液(7.1.10)的浓度为X坐标轴，以AA。为丫坐标轴绘制1-(+)-谷石故标准

25、曲线.1-(+)-谷氨酸标准曲线的线性回归方程如公式(10)所示：Y=A*D(10)式中：Y1.-(+)谷酸系列标准溶液的吸光度差；A一方程的系数，将数值四舍五人至最接近的OOOO1；X!-()-谷氨酸系列标准溶液的质浓度，单位为塞克每升(mg/1.)；D一方程的系数.8.4.4 1-(+)-谷氨酸试样液的浓度按公式(11)计算(+)-谷氨酸试样液(8.3.2)中1-(+)-谷凝酸的浓度：(11)式中：S+谷氨酸试样液(8.3.2)的质量浓度，单位为亳克每升(0)9八);A；8.4.2中1.Y+)-谷炽酸试样液的吸光度差；一8.4.3中方程的系数,一8.4.3中方程的系数.8.4.5 试样的！

26、()谷氨酸含，技公式(12)计肾试样中的1.Y+)-谷瓦酸含量：.W.50+TwrWt12)J10010OOOXzh1V12S6x法式中：W：一试样中1.(+)-谷氨酸的含量，单位为克每百克(g100g);Q1.Y+)-谷电酸试样液(8.4.4)的质髭浓度，单位为亳克每升(mg1.)；m1.一试样(7.3.2)的质量，单位为克(g);WC一水分的含量(8.3.3.3),单位为克每百克(g100g);V1-7.3.3.6中所取i液的体积，单位为亳升(m1.)；V,50-7.3.3.6中速液稀释系数；25/50-25”为7.3.3.3中用于调节PH的注液的体积,单位为东升(m1.),*50”是7.

27、3.3.4中溶液的体积，单位为毫升(m1.).将结果修约至小数点后2位.8.S精密度8.5.1 实验室间测试该方法的精街度是通过与ISO572S1和ISO57252一致的实筠室间测试来建立的.从这些测试中得出的值可能不适用于给定以外的浓度范囹和基质类型.8.5.2 重装性样品中1-(+)-谷氨酸含量为0.1577g100g0.2987g100g时,在重复性条件下获得的2个测试结果之间的绝对差异在95%的置信区间下,不超过0.43%.8.5.3 再现性样品中！(+)-谷低酸含量为0.1577g/：1.oog-0,2987g1.Oog时,在再现性条件下获得的2个测试结果之间的绝对差异在95%的置信

28、区间下，不超过1.10%.8.6检出限当WM8.33.3中试样水分含量)为70、%50(7.336中取波液稀释系数)为1/15时,1-(+)-谷氨酸含量的检出限为0.02g100g.9检测报告检测报告应注明：一样品信息；一使用的标准编号；一抽样方法（适用时）；一检测方法；一本文件中未规定或短视为可选的所有操作细节，以及可能影组检测结果的任何密件的细节；一获得的检测结果，或者如果屯复性已经过桧百，则获得的2个枪测结果；一与步骤的任何偏差；一观察到的任何异常特征；一检测日期.附录A（资料性）安全实践处置高集酸（Hc1.O,）的安全实践应包括以下内容.a）去除溢出的HCI0，,应立即用大量水彻底清洗

29、.b）用于去除HCIOc蒸气的革子、管道和其他装置应由化学悟性材料制成，并设计成可以用水彻底清洗的结构.琲气系统应排放到安全位置,风扇应易于清洁.C）避免在使用HC1.Ch的通风稿或其他除烟装窗中使用有机化学品.d）使用护目溢、防护罩和其他必要的个人保护装置.使用聚钢乙幅,不要使用像胶、手套.e）在使用HC1.d迸行湿燃烧时，除非另有说明，否则应首先用硝酸处理样品以破坏易新化的有机物.不要蒸发至干.f）HCIO与五筑化二膜或浓硫酸等演脱水剂接触会生成无水HC1.Ck与有机物和还原剂发生爆炸性反应.需要将HCIO.与此类试剂一起使用时，在分析操作时要特别小心.HCIO1质量分数为72g/100g

30、时对摄击和热极为敏蟾.注：取自参考文*113.参考文献(11ISO57251Accuracy(Iruenessandprecision)Ofmeasurementmethodsandresu1.ts-Pan1:GeneraIprincip1.GSanddefinitions(2 ISO5725-2Accuracy(Iruenessandprecision)OfmeasuremGntmethodsandresu1.ts-Part2Basicmethodforthedeterminationofrepeatabi1.ityandreproducibi1.ityofastandardmeasurementmethod(3 AOACOfficia1.MethodsofAnaIysis.1.aboratorySafety.AppendixB.1995,p.3