花生疮痂病菌诱导花生愈伤组织的防卫响应.docx

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1、花生疮痴病菌诱导花生意伤组织的防卫响应花生愈伤如织抵御花生疮枷病闱侵入的生理机制摘要：为深入探讨花生抗疮病病的机;W.以花生急伤织机为材料.采M比色UI法研究/接种花生抡增病法涔案后花生愈伤狙织中防而他活性、丙二亚(Miw)m,花牛.疮i病(cwrrUrathidisBiiaueourtJCnkinS)胧近年来新流行砂KIH内外研究报道较少.日本学者根岸宽山在上世e270X0填代对日本该病病原学进行了研究.明砒了病炭曲为Sphweiomaamchidii(根岸宽111等，1979).花牛.的i柄(SPhOC&nnaaraChidiSBitaucourtC1.JCnkinS)主要,古叶片和茎秆，

2、形成大M疮划状病风自19404：BiUUCOun首次在南美的巴西发现之后.日本(根母宽山等.IR9)和阿根廷(GiMhaH.1985)等国事也相缚Itt道.并在各花生产区淹行成灾.近轮来,我IH广东,广西担建、山东和辽宁等主要花生声区相继发生危害，分布广，危西爪.M典型的流行性病例.一般柄田减产“处小30%,产IBIII块攒失可达50%以上.辽宁省2009年仅在碉芦跖花生产区与41发生，时篇2年，辽宁胡芦岛ff.新和愤州多个花生产M爆发火潦行成灾.耕田率75%-100%,病株率82.6%-100%,徜叶率426%-953%,病情指数IS.1-515.发生加松出过12万hm周如军等.2013).

3、被止到2015邱夏李已径传播到辽宁北FB产区，IIa缗他金廷的均势.已成为我国花生产业持敛发跟中也侍解决的轨保ME.Wit,明确花生抗拉病病的生理机制对迭行抗抡桶病新品种具有城要立义.过筑化物椅3roxidase.POD).过气化氯解(Cata1.ase.CAT),牵内双械就显检(1.-heny1.a1.anineam-nia1.yase.PA1.)和趣算化物酸化版(SUperOXidedisaMtase,SOD)是m物晌应柄商侵袋所产生的防御蛋白，在柚物抗病性方面发挥帚(R要作用.关于防御他活性与抗他性关系的研亢已盯报道目前，对于羊果树腐烂病的研究在病侬学、发生规律及生助做旅选等方面己有较多

4、报道.(H右关该辍曲与寄主的互作机IW而次乏系统研究,而寄主与硝淡曲互作是揭示病咨发生和寄主抗性机制的雎要内容(梁军等20W0.本靖究以密啊斗:果品种富士和抗历砧木平色甜茶食伤如织为材料，测定单果树腐烂衲俱侵柒对的衣防御的活性和MM含M的效响,以明确腐烧成发生1：抗性的瓦作美系，为进步揭东花生琏斓病陷的致病机理及其Kj寄匕的互仆机制提供行价值的参考.I材料方法M材料供试田为材料：白沙1016种子采白沈阳农业大学试验出熟娘的；花生疮而衲岫1.2方法1.11无体JK耳仿IMR培养以白沙1016种子为外植体在无能条件下先川？5%乙分处理ImIn.无防水反女冲洗石用0.1%升汞消i3mn.H后用无菌水

5、冲洗4次.格沔他后的朴子接种J-MS培养延上.以无茵叶片为外出体进行念伤粗以造导，典取36节位叶片，将其沿中脓方向横切，叶片正面海上接种到愈伤组织旃导培齐基上.共配力为I2.4-D2,5mg.1.BAP3.0m隗,KTI.Smg11.块脂9g1.蔗糖3(*pHf1.5.8.在热降条件下进行念伤H1.iH的诱导，恃伤口处产生淡黄色、质地黑密的急伤讥即时转移至妙代培养及(激素含Iftat监.其余次分均与其透外培笄MH1.向)，f2周然代一次,侍食伤细织式径至1.2-1.5cm时即可进行实险.122病的按片乘用曲蛙悬浮液接种法，选界生长妗及大小均的食伤JH织，无丽条件下优于2%水琼脂YISE(Jt9

6、0mm).每皿均匀一鼓4块.雁姗精IWf1.(蛛在PDA平板上活化塔齐14天后.取曲收研眄.格苗悬液均匀深抹接种干!&彷组织上,25C恒温光照培养.以接朴PDA培养成的愈伤组出作为对照.接种瓶出痢前后林间隔24h定期取样，林0.5g作为一个样.每次劫机取3个愈愣斑织块.试验血乂三次.123g活性,定叶片称取0.5g，用含有I1.nMEDTA和5%：他一吁于)OOIxWxtrtiftjnt(11i.PPO：0.02md1.t1.5m1.00511xK1.pH6.8的碱酸线冲液1.5m1.”(Mm1.加i.对照组不诲加供液,以0.1m1.以酸缓冲液代替.:1工,水浴2nin后.测定39加吸免收的变

7、(匕点红3次，以I5冲衲A3HK变化优O1.为个能活性单位.1.,w.Mirtw11、-AK而提取液总M(Hi-)活性(Ssa01.xwx,MMff1.s11i,)CAT：取1.Sm1.的两酸煨冲/-DNg-JW用“DJMEMtMTcrvJuMc*wcepdrJfi1.c2f114ivrewinrnhwo公代中：A为反辰时间内吸光度的变化：W为样品鼾吨(g):I为反质时间mm).5m150mM4S假缓冲液(ImMbW111.ffi.ImMEDTA.2%PVP,pH7.0)2.49m1.S1.1.mM俏酸缓冲液以不加解液为对照，测定OD290变化，Imin内吸光俄变化0.01定义为一个班活力中位

8、APX他法性(U)-八V的提取.总/，.APX机口忤7)-001w,ftIIM(ni.i*ttMtn*rBmpC.Inkn-htSWXnnUkOsnu1.iMiaapnedCry1.rs)cc.Aiu1.Btiichmi1.97IJrZ7fct?.Boct3m1.反应混合液:50mMWKtttgWiftpH7.8.UmM3tffie,75EMNBT.2mM核黄素.ImMEDTA,20m1.粗陶液,核黄索取后加入，与典暗中，在光中反应Iomi1.1.后在56Onm处记录吸光度,以不光质的试管为对照.以NBT迷族受抑M50%为个佛活地位.N8设抑；W-、-A“厂X100人V“贴八124内二M定MD

9、A含J*采用僦代巴比妥显色法进行测定,定期乐集的怠怩组织样AA0.3g.加入少许石英砂和2m110%:筑乙酸，在3m1.进一步研Ift,匀浆在400QRFBSQ1.Omin,甲i1M2m1.提取液，2m1.O.6%Ki代巴比妥械，海水浴反应I5min从试件内出现小气泡时开始计时).立即将试首取出故于冷水浴中.然芯MXIOgA-I55IOWAS32为测岐值与对照值之整60()At反应液总液(4m1.)V.提取液总M(5m1.)a：显色反应系统中提取液的加入1.it(2m1.)W,植物坦炽鲜JB125防基因的衰达分析按照RN提取试河盆提取花生会伤组燃总RNA,反转液合成笫ftcDNA，以花生AC1.in然闪为内叁.对花生CN,APX.SOD.POD)取同送行RT-PCRtaa1.PCR反应程序为:95C3min.94t3(k.52t3.72-CImiii.30个福环.72C1.(hin.PCR产物用1%球心糖凝股电泳检测，柯个处理呱亚：次.2结果与分析