专题二微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养.doc
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1、专题二微生物的培养与应用【学习导航】本专题包含三个方面的内容:课题1.微生物的实验室培养;课题2.土壤中分解尿素的细菌的别离与计数;课题3分解纤维素的微生物的别离。课题1介绍了最根本的微生物技术,是开展其他两个课题的根底。课题2和课题3要求别离某种特定的微生物,难度较大,探究性也更强。此外,本专题中所强调的无菌操作技术,将有助于“专题3植物组织培养技术的顺利完成。学生通过本专题的学习,应当掌握培养基、消毒灭菌等有关微生物培养的根底知识,应当掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等根本操作技术,并可以运用相关技术解决生产生活中有关微生物计数、微生物别离与培养等实际问题。课题1 微生物的实验室
2、培养【导学诱思】1培养基的配制原如此是。培养基可以分为和。2培养基一般都含有、四类营养物质,另外还需要满足微生物生长对、以与的要求。思考:为什么大多数培养基都需要含有四类营养物质?3获得纯净培养物的关键是。4防止杂菌污染的方法主要包括以下四个内容:5消毒是指灭菌是指思考:消毒与灭菌的一样点与区别分别是什么?6实验室常用的消毒方法是,此外,人们也常使用化学药剂进展消毒,如用、等。常用的灭菌方法有、,此外,实验室里还用或进展消毒。7制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤是,。思考:培养基灭菌后,需要冷却到50左右,才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的温度?为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?平板
3、冷凝后,为什么要将平板倒置?在倒平板的过程中,如果不小心瘵培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?8微生物接种的方法中最常用的是和。平板划线法是指。稀释涂布平板法是指。9平板划线的操作步骤如下:思考:为什么在操作的第一步以与每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作完毕时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进展划线?在作第二次以与其后的划线操作是赤什么总是从上一次划线的末端开始划线?10系列稀释操作步骤:11涂布平板操作步骤:【疑难点拨】1生物的营养营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。营养物质是指维持机体生命活动,保证发育、生殖所需
4、的外源物质。在人与动物,营养物质包括水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类;在植物,营养物质包括矿质元素、水、二氧化碳等三类;在微生物,如此有水、无机盐、碳源、氮源与特殊营养物质五类。2培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温12天后无菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否如此需要重新制备。3无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?无菌技术还能有效防止操作者自身被微生物感染。4平板冷凝后,为什么要将平板倒置?平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基外表的湿度也比拟高,将平板倒置,既可以使培养基外表的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培
5、养基,造成污染。5为什么在操作的第一步以与每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作完毕时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线完毕后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。划线完毕后灼烧接种环,能与时杀死接种环上残留的菌种,防止细菌污染环境和感染操作者。【典例解析】例1关微生物营养物质的表示中,正确的答案是解析:不同的微生物,所需营养物质有较大差异,要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项
6、,它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源,如二氧化碳;有的碳源可同时是氮源,如NH4HCO3;有的碳源同时是能源,如葡萄糖;有的碳源同时是氮源,也是能源,如蛋白胨。对于C选项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样。如二氧化碳,可作为自养型微生物的碳源;NaHC O3,可作为自养型微生物的碳源和无机盐;而NaCl如此只能提供无机盐。对于D选项,无机氮源提供能量的情况还是存在的,如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。答案:D例2下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的答案是解析:灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的,因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种,整个发酵过程不能混入其他微生物杂菌,
7、所以是正确的;B是错误的,因为灭菌的目的是防止杂菌污染,但实际操作中不可能只消灭杂菌,而是消灭全部微生物。C是正确的,因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌;发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的,灭菌必须在接种前,如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。答案:B例3右表是某微生物培养基成分,请据此回答:编号成分含量粉状硫10gNH42SO4K2HPO4MgSO4FeSO4CaCl2H2O100ml1右表培养基可培养的微生物类型是。2假如不慎将过量NaCl参加培养基中。如不想浪费此培养基,可再参加,用于培养。3假如除去成分,参加CH2O,该培养基可用于培养。4表中营养成分共有类。5不论何种培养基,在
8、各种成分都溶化后分装前,要进展的是。6右表中各成分重量确定的原如此是。7假如右表培养基用于菌种鉴定,应该增加的成分是。解析:对于一个培养基,它能培养何种微生物,要看它的化学成分。当然这只适用于合成培养基,如果是一个天然培养基就不能从培养基的成分上区分它是培养何种微生物的。分析化学成分要从营养物质的类型出发。右表中的营养物质有水、无机盐、氮源三类,缺乏碳源和特殊营养物质。对特殊营养物质,有的微生物是不需要的,但没有微生物是不需要碳源的。该培养基中没有碳源,说明培养的微生物是从空气中获得碳源的,即可培养的微生物就是自养型微生物了。该培养基中参加了过量食盐,就可以成为金黄色葡萄球菌鉴别培养基,但金黄
9、色葡萄球菌是异养型微生物,这个培养基就还需要参加有机碳源。该培养基假如参加CH2O,培养基中就有了碳源,但除去成分,却使培养基中没有了氮源,这时就只能用于培养固氮微生物了。对于菌种鉴定,往往用的是固体培养基,而表中没有凝固剂,需要参加常见的凝固剂琼脂。答案:自养型微生物 含碳有机物 金黄色葡萄球菌 固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂或凝固剂【课堂演练】一、选择题 1有可能作为异养微生物碳源的是A牛肉膏 B含碳有机物 C石油 D含碳无机物2根瘤菌能利用的营养物质的组别是ANH3,CH2O,NaCl BN2,CH2O,CaCl2C铵盐,CO2,NaCl DNO2,CO2,CaC
10、l23配制培养基的表示中正确的答案是A制作固体培养基必须参加琼脂 B参加青霉素可得到放线菌C培养自生固氮菌不需氮源 D发酵工程一般用半固体培养基4自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差异是A碳源 B氮源 C无机盐 D特殊营养物质5下表是有关4种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的概述。其中正确的答案是(C)生物硝化细菌根瘤菌酵母菌谷氨酸棒状杆菌能源氧化NH3N2的固定分解糖类等有机物光能碳源C02糖类糖类糖类氮源NH3N2NH4+、NO3-尿素代谢类型自养需氧型异养需氧型异养兼性厌氧型自养需氧型 A根瘤菌、谷氨酸棒状杆菌 B硝化细菌、酵母菌 C酵母菌、谷氨酸棒状杆菌 D硝化细菌、根瘤菌6甲、
11、乙、丙是三种微生物,下表、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在种正常生长繁殖;甲能在中正常生长繁殖,而乙和丙都不能;乙能在中正常生长繁殖,甲、丙都不能。如下说法正确的答案是 C 粉状硫10gK2HPO44gFeSO4蔗糖10gNH42SO4H2O100mlMgSO4CaCl2+-+-+A、甲、乙、丙都是异养微生物B、甲、乙、丙都是自养微生物、丙是异养微生物C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物7微生物除病毒外需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。如下有关微生物营养的说法正确的答案是A乳酸菌与硝化细菌所利用
12、的碳源物质是一样的B微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长因子C培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利D生长因子一般是酶或核酸的组成成分,微生物本身合成这些生长因子的能力往往不足。8某一种细菌株要从环境中提取现成的亮氨酸20种氨基酸中的一种才能生长,此菌株对链霉素敏感。实验者用诱变剂处理此菌株,想筛选出表中细菌菌株类型。根据实验年目的,选用的培养基类型是注:亮氨酸链霉素“参加“不参加B如:不加亮氨酸:参加链霉素选项筛选出不需要亮氨酸的菌株筛选出抗链霉素的菌株筛选出不需要亮氨酸的抗链霉素的菌株9要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌别离出来,应将它们接种在A参加氮源和杀菌剂的培
13、养基上 B不参加氮源和不加杀菌剂的培养基上C参加氮源,不加杀菌剂的培养基上 D不含氮源和杀菌剂的培养基上10酵母菌培养液中常含有一定浓度的葡萄糖,但当葡萄糖浓度过高时,反而抑制微生物的生长,原因是A碳源供给太充足 B细胞会发生质壁别离C改变了酵母菌的pH值 D葡萄糖不是酵母菌的原料11含C、H、O、N的某大分子化合物可以作为A.异养微生物的氮源、能源 B.异养微生物的碳源、能源C.自养微生物的碳源、氮源、能源 D.异养微生物的碳源、氮源、能源二、非选择题12培养蘑菇时常使用的原料为棉花壳、花生粉饼、朽木等,再喷洒适量的水,参加一定量的尿素等。请回答如下问题:1按化学成分分类,该培养基为培养基,
14、按物理性质分类该培养基为培养基。2培养过程中发现培养基上长出了其他杂菌,经鉴定为细菌,细菌与蘑菇的关系为,在培养基上施用适量的即可抑制细菌生长。3蘑菇的代谢类型为在生态系统的成分中属于。121天然 固体 2竞争 青霉素 3异养需氧型 分解者1322分下表为一种培养液的配方。成分含量NH4HCO3KH2PO4CaSO4FeCl2维生素少许H2O1000mL请据表中内容回答:1该配方假如用于培养微生物,如此该生物的同化作用类型是_;假如用该配方来培养圆褐固氮菌,如此应参加_和_,并可以除去的成分是_。在培养圆褐固氮菌之前需对培养基进展灭菌,否如此会有其他杂菌生长,圆褐固氮菌与其他杂菌的关系为_。2
15、假如从自然界别离得到的样品中含有谷氨酸棒状杆菌、圆褐固氮菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等,现欲筛选出金黄色葡萄球菌,如此简便的方案是_。3将大肠杆菌的质粒取出,连接上人生长激素的基因以后,重新置入大肠杆菌细胞内,然后,用这种带有人生长激素基因的工程菌进展发酵,就能得到大量的人生长激素。在大规模生产中,需要将选育的工程菌菌种经过屡次扩大培养,再进展接种,扩大培养选用_期的细菌,并通入无菌空气;假如把大肠杆菌接种到葡萄糖和乳糖的培养基中,只有葡萄糖全被消耗后才合成半乳糖苷酶来利用乳糖。这一事实说明半乳糖苷酶属于_,该调节方式的意义是_,增强了大肠杆菌对环境的适应能力。13. 共22分1每空2分,共10
16、分自养型有机碳化合物或碳源生长因子氮源NH4HCO3竞争24分配制普遍培养基后参加高浓度食盐3对数期诱导酶各2分既保证微生物代谢的需要,又不浪费物质和能量4分14谷氨酸是生物体内一种重要的有机小分子,谷氨酸钠是它的钠盐,是味精等调味品的主要成分。目前利用微生物发酵生产的氨基酸中,谷氨酸是产量最大的种类之一。1谷氨酸的R基为CH2CH2COOH,其结构式为_。2如果在蛋白质合成过程中,携带谷氨酸的转运RNA为GAG,可知谷氨酸的密码子为_。3我国微生物发酵工程生产谷氨酸常用的菌种有棒状杆菌、谷氨酸棒状杆菌和黄色短杆菌等,如下生物中与这些菌种在结构上存在明显区别的有_。A噬菌体 B人类免疫缺陷病毒
17、HIV C禽流感病毒 D肺炎双球菌E酵母菌 G硝化细菌 H乳酸菌4谷氨酸发酵的培养基成分,主要有葡萄糖、氨水、磷酸盐、生物素等,发酵装置如下列图。可以判断谷氨酸棒状杆菌的新陈代谢类型是_型。某厂用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸,结果代谢产物中出现了大量的乳酸,其原因很可能是_。5谷氨酸发酵生产过程中,需要添加氨水,它不仅是细菌生长所需的_,而且起到调节培养液_的作用,所以应该分次参加。6某厂的发酵液曾不慎被噬菌体污染,菌群死亡殆尽,但人们却幸运从中获得了少数可抵抗噬菌体的新菌种,细菌这种新性状的产生来自于_。7如下列图连续培养的方法,以一定的速度不断添加新的培养基,同时又以同样的速度放出旧的培养
18、基,此工艺流程可以大大提高生产效率,试阐述其原因_。1422分2分2GAG2分3ABCE2分4异养、需氧通气量不足4分5氮源 pH4分6基因突变或突变2分7保证微生物对营养物质的需求排出局部代谢产物使微生物保持较长时间的快速生长。6分课题2 土壤中分解尿素的细菌的别离与计数【导学诱思】1尿素只有被分解成之后,才能被植物吸收利用。2以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象,要达到的两个主要目的是:;。3PCR是一种在体外将。此项技术的自动化,要求使用耐高温的DNA聚合酶。思考:怎样找耐高温的酶呢?4实验室中微生物的筛选应用的原理是:人为提供有利于生长的条件包括等,同时抑制或阻止其他微生物生长。5选择培
19、养基是指。6常用来统计样品中活菌数目的方法是。即当样品的稀释度足够高时,培养基外表生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在的平板进展计数。另外,也是测定微生物数量的常用方法。7比拟教材中两位同学的操作方法,哪位同学的结果接近真实值?你认为这两位同学的实验需要改良呢?如需要,如何改良?8一般来说,统计的菌落数往往比活菌的实际数目。这是因为。因此,统计结果一般用而不是活菌数来表示。9设置对照实验的主要目的是,提高实验结果的可信度。10对照实验是。11实验设计包括的内容有:、和,具体的实验步骤以与时间安排等的综
20、合考虑和安排。12不同种类的微生物,往往需要不同的培养和培养。在实验过程中,一般每隔24小时统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以。13无菌操作应注意什么问题?14在进展多组实验过程中,应注意做好标记,其目的是。思考:应标记哪些内容?怎样操作更有利于实验的进展?15对所需的微生物进展初步筛选,只是别离纯化菌种的第一步,要对别离的菌种进展一步的鉴定,还需要借助的方法。思考:有哪些方法可以对菌种进展鉴定?【疑难点拨】1选择培养基选择培养基的含义是:在培养基中参加某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中别离所需要的微生物。在培养基中
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