医学微生物学PPT课件.ppt

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1、2023/3/21,1,四体,2023/3/21,2,一 螺旋体(spirochete),概念：螺旋体是一类细长、柔软、一端或两端弯曲成螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。基本结构与细菌相似，例如有细胞壁、原始核质，以二分裂方式繁殖和对抗生素等药物敏感等主要类型：疏螺旋体属：回归热螺旋体 伯氏螺旋体 密螺旋体属：梅毒螺旋体 钩端螺旋体属：钩端螺旋体,、钩端螺旋体（Leptospira）,生物学性状,形状：一端或两端弯曲成钩状，菌体常呈问号状或C、S形。结构：柱形原生质体、内鞭毛、外膜（由内至外）。动力：常用暗视野显微镜观察，呈旋转式活泼运动。,暗视野显微镜下的钩端螺旋体,染色法：常用镀银染色法

2、，菌体呈金黄色或棕褐色。,镀银染色法染色的钩端螺旋体,是唯一能够人工培养的致病性螺旋体营养要求复杂，常用Korthof培养基适宜生长温度为2830生长缓慢，需氧或微需氧，57天半透明云雾状生长（液面1cm处最丰富）,2023/3/21,6,二、致病性与免疫性,致病物质-类似细菌内毒素与外毒素,1内毒素样物质(ELS)或称脂多糖样物质(LLS)2溶血素 3细胞毒性因子(CTF)4.细胞致病作用(CPE)物质,2023/3/21,7,钩端螺旋体病-一种人畜共患传染病,所致疾病,2023/3/21,8,免疫性,疾病后可获得抗同型钩体的持久免疫力，,体液免疫为主,2023/3/21,9,三、微生物学检

3、查法,1.病原体检测 发病10天内取血液;1周后取尿液;有脑膜刺激者取脑脊液 直接镜检（Fontana镀银染色法，暗视野查活菌）分离与鉴定 接种至Korthof培养基，置28孵育。阳性标本在2周内可见培养液呈轻度混浊暗视野显微镜检查有则用已知诊断血清鉴定其血清群和血清型。阴性标本:分离培养应连续观察4个月，仍无生长者。动物接种 幼龄豚鼠或金地鼠腹腔分子生物学方法,2023/3/21,10,2.血清学诊断,病初和发病后第34周各采血清一次。有脑膜刺激 症状者采取脑脊液方法:显微镜凝集试验(MAT)间接凝集试验 以乳胶(聚苯乙烯)或活性炭微粒为载体，吸附钩端螺旋体可溶性抗原作为指示物,2023/3

4、/21,11,四、防治原则,防：防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜的管理。在常年流行地区，对易感人群和与疫水接触者宜接种包含当地流行株在内的多价钩端螺旋体疫苗。治：首选青霉素,梅毒螺旋体,形状：两端尖直。结构：与钩端螺旋体相同。动力：移行、滚动等方式运动。染色法：与钩端螺旋体相同。培养：不能在无生命的人工培养基上生长繁殖，但可用棉尾兔上皮细胞或接种家兔培养。,暗视野显微镜下的梅毒螺旋体,镀银染色法染色的梅毒螺旋体,致病物质：荚膜样物质、黏附因子、透明质酸酶致病过程及临床特征：获得性梅毒和先天性梅毒,致病性与免疫性,获得性梅毒病程及特征：I期梅毒：外生殖器硬下疳（hard chancre），传染性强。I

5、I期梅毒：皮肤及粘膜梅毒疹（syphilid），传染性强、组织破坏小。III期梅毒：动脉瘤、脊髓痨或全身麻痹，传染性小，组织破坏大。,梅毒疹,外生殖器硬下疳,心内梅毒瘤,先天性梅毒：流产、早产或死胎，新生儿皮肤病变、马鞍鼻、锯齿牙、骨软骨炎、先天性耳聋等体征，俗称梅毒儿。,骨软骨炎,锯齿牙,免疫性：传染性免疫，以迟发型超敏反应为主的细胞免疫抗感染作用较大。,微生物学检查及防治原则,微生物学检查病原学检查：（一期）硬下疳、（二期）梅毒疹渗出液，用暗视野显微镜、直接免疫荧光法或ELISA检查。血清学检查：RPR或TRUST初筛，TPHA或TPPA确诊。防治原则预防：加强性卫生教育和性卫生，但目前尚

6、无疫苗。治疗：青霉素类药物长程治疗。,2023/3/21,19,二 支原体(mycoplasma),没有细胞壁的原核细胞型微生物，多形性细胞膜含固醇能通过0.45m滤菌器二分裂繁殖，含DNA与RNA能在无生命培养基中繁殖的最小原核细胞型微生物 概念：是一类无细胞壁，形态高度多形性，能通过细菌滤器，能在无生命培养基上生长的最小原核细胞型微生物,2023/3/21,20,致病类别,肺炎支原体（M.pneumoniae)人型支原体(M.hominis)生殖器支原体(M.genitalium)穿透支原体(M.penetraus)溶脲脲原体(U.urealyticum)发酵支原体（F.pneumonia

7、e),2023/3/21,21,生物学性状,形态与结构 最小，0.20.3m 多形性：球形，双球状，丝状（无细胞壁）细胞膜含有大量固醇 特殊结构：荚膜，顶端结构，微丝 繁殖方式：二分裂，出芽等 染色方法：Giemsa染色 淡紫色 革兰染色阴性,2023/3/21,22,培养,营养要求比一般细菌高 在pH7.88.0间生长，低于7.0则死亡（溶脲脲原体pH6.06.5）生长缓慢典型的菌落呈荷包蛋样 液体培养基澄清（以颜色改变作为生长现象）,2023/3/21,23,抵抗力,无细胞壁，对理化因素比较敏感对青霉素等耐药（无细胞壁）对干扰蛋白质合成抗生素敏感（红霉素等）,2023/3/21,24,致病

8、性,致病性 支原体 致病性 肺炎支原体（儿童）原发性非典型肺炎、支气管炎 表面感染人型支原体 泌尿生殖道感染 表面感染生殖器支原体 泌尿生殖道感染 表面感染穿透支原体 多见于艾滋病 入血溶脲脲原体 泌尿生殖道感染，垂直传播 表面感染发酵支原体 关节炎 表面感染,一、肺炎支原体,感染呈全球性分布，主要侵犯呼吸系统,借滑行运动穿过粘膜上皮细胞纤毛屏障，主要粘附因子为一类对胰酶敏感的表面蛋白，称Pl蛋白。,二、解脲脲原体,也称溶脲脲原体，是1954年Shepard首先从非淋菌性尿道炎(NGU)患者的尿道分泌物中分离获得，因其分解尿素的特性命名为解脲脲原体。在分类学上属人支原体科脲原体属。是人类泌尿生

9、殖道最常见的寄生菌之一，近年来研究发现，它与多种疾病有关，故引起国内外有关学者的广泛重视。,1.寄居泌尿生殖道，传播途径为性接触和母婴传播。致病机制与侵袭性酶有关。吸附后产生磷脂酶分解胞膜中的磷脂，脲酶分解尿素产氨，影响宿主细胞生物合成。产生IgA蛋白酶，破坏IgA的局部抗感染作用，有利于粘附和致病。,2.引起非淋菌性尿道炎(NGU)，上行感染，可引起前列腺炎或附睾炎；阴道炎和宫颈炎，并可导致流产。因为与人精子膜有共同抗原，对精子可造成免疫损伤而致不育。,2023/3/21,29,三 立克次体(rickettsia),共同特点,多形态，革兰染色阴性，大小介于细菌和病毒之间专性寄生(活细胞内寄生

10、，似病毒）、二分裂繁殖（似细菌）DNA、RNA及复杂酶系统，对多种抗生素敏感（似细菌）与节肢动物关系密切，寄生在吸血节肢动物体内，或为寄生宿主、或为储存宿主、或同时为传播媒介大多是人兽共患病的病原体,2023/3/21,30,一、生物学性状形态与染色,多形态性，球杆状或杆状 柯克斯体更小，多形性更明显革兰染色阴性，但不易着色姬姆萨染色（紫色）,结构与组成,细胞壁：外膜、肽聚糖、蛋白脂质多糖粘液层、微荚膜宿主细胞内排列不规则,2023/3/21,31,培养特性,动物接种、鸡胚接种、细胞培养,2023/3/21,32,1 普氏立克次体：（1）传染源：患者（唯一传染源）（2）传播媒介：人虱（3）所致

11、疾病：流行性斑疹伤寒（虱传型斑疹伤寒）（4）传播途径：,2023/3/21,33,2 斑疹伤寒立克次体：（1）传染源：患鼠，患者（2）传播媒介：鼠虱，鼠蚤（3）所致疾病：地方性斑疹伤寒（鼠传型斑疹伤寒）（4）传播途径：,(三)微生物检验,1.标本采集(1)病人血液标本：发热期均有立克次体血症，在急性期较易检出立克次体。争取在用抗生 素前采血，立即床侧接种。(2)活检或尸检材料：肺、肝、脾、淋巴结、心 瓣膜等标本。,2.标本直接检查,(1)免疫荧光检测 用于脏器检查。制备标本片薄而均匀，组织结构清晰，固定后用荧光抗体染色,常见脾、肺及心瓣膜中有立克次体，也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。(2)核

12、酸检测 PCR敏感性高，所需样品量只需ELISA实验的15。以编码17kD蛋白的基因和编码普氏和莫氏立克次体169kD蛋白的基因作为扩增靶区。,3分离培养,(1)动物接种 选用健康雄性豚鼠接种以便观察阴囊肿胀现象。每日测体温，至40发热时采血或脏器悬液、接种鸡胚卵黄囊或细胞培养以分离立克次体；感染莫氏立克次体豚鼠在发热12日内出现阴囊红肿，解剖可见腹股沟淋巴结肿大、充血、脾大2-3倍，有腹水；有阴囊反应者，睾丸有小出血点，鞘膜充血并有浆液性渗出物等。鞘膜涂片可查到立克次体。,(2)鉴定,用免疫荧光法鉴定感染动物脏器、鸡胚卵黄囊、细胞培养物中的特异性抗原以已知抗原测定动物恢复期血清中的相应抗体。

13、必要时用补体结合试验、微量凝集试验等，作群和种的鉴定。,(3)分离株繁殖及保存,鸡胚卵黄囊培养 收获卵黄囊，经涂片染色镜检,含立克次体较多而又未发现细菌的卵黄囊膜，或将其作成适当浓度的悬液置-70冰箱保存，或冰冻干燥保藏；细胞培养：选鸡胚、成纤维、人羊膜、HeLa等细胞，接种培养、鉴定后将立克次体大量繁殖的感染细胞置-70储存。,4抗体检测,立克次体病常用的血清学诊断方法除外斐反应、间接免疫荧光(IFA)试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)外，还有补体结合(CF)试验、微量凝集(MA)试验、间接血凝(IHA)试验、胶乳凝集(LA)试验等。,(1)外斐反应,除Q热、立克次体痘及罗沙利马体感染为阴

14、性外，其他为阳性。患者OX凝集素上升较晚，在病程2周左右方出现阳性，病程中双份血清试验，若效价有4倍增长，方有诊断意义。,(2)IFA试验,为现在诊断立克次体病常用的方法。用已知立克次体抗原(感染鸡胚卵黄囊或细胞培养悬液)制片，以低稀释度的病人血清初筛，有呈典型立克次体形态的明亮荧光颗粒者，判为阳性。再将病程早期及晚期血清分别作双倍或4倍稀释以测效价，如呈48倍增长者可明确诊断。,(3)ELISA,检测IgM抗体对早期诊断有价值。立克次体抗原吸附于载体。泛影葡胺梯度离心纯化抗原为优，检出血清的抗体效价高，纸上ELISA测定抗体，方法简便。将感染卵黄囊悬液加于玻片(经氯仿甲醇洗净)上，凉干、固定

15、，加稀释血清于抗原点上，每张玻片上包括阳性和阴性对照，加酶标兔抗人IgM/G于抗原血清点作用后，将浸透新鲜配制的底物无灰滤纸覆盖在玻片上约4-6min，可见滤纸条上阳性对照点位置显紫棕色，取下滤纸条(即终止反应)，观察是否显色，与对照比较判定结果。此法简便，并可保存实验记录。,(4)CF试验,CF试验原来是立克次体病血清学诊断的经典试验，虽然敏感性不如IFA和 ELISA，但非常特异。一般在立克次体病发病一周内，血清中即有CF抗体出现，以后逐渐上升，至第3周达最高峰，然后逐渐降至较低的效价，并可保持几年不消失，但也有在病后几周即转阴性者。病人恢复期血清与斑疹伤寒群及斑点热群立克次体可溶性抗原试

16、验的阳性结果，只能说明该群立克次体的感染。,2023/3/21,44,3 恙虫病立克次体：（1）传染源：携带病原体野鼠，家鼠（2）传播媒介：恙螨（3）所致疾病：恙虫病（4）传播途径：,一类严格细胞内寄生，具有独特发育周期，并能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。对人类致病的衣原体 沙眼衣原体 肺炎嗜衣原体 鹦鹉热嗜衣原体,四 衣原体,衣原体的发育周期 原体（Elementary body,EB）：小而致密的颗粒结构，是发育成熟的衣原体。具有强感染性，无繁殖能力。当进入宿主易感细胞后，原体增殖成为网状体。Giemsa染色呈紫色，Macchiavello染色呈红色。网状体（reticulate bod

17、y，RB)亦称始体（Initial body）：大而疏松的结构，无胞壁，以二分裂方式繁殖，增殖成许多子代原体。网状体是衣原体发育周期中的繁殖型，不具感染性，Macchivello染色呈蓝色。,包涵体(inclusion body)衣原体在宿主细胞内增殖后形成的网状体和子代原体的空泡，经染色后可在光镜下观察到，被称为包涵体。包涵体经Giemsa染色后呈深蓝色，经碘染色呈褐色。,2023/3/21,48,原体和网状体的比较,培养特性 鸡胚卵黄囊 组织细胞培养Hela细胞、McCoy细胞等抗原结构属特异性抗原：脂多糖种特异性抗原：位于主要外膜蛋白(MOMP)型特异性抗原：也存在于MOMP上,二、致病

18、性与免疫性,致病机制借助表面脂多糖和蛋白质吸附于易感细胞。能产生类似G菌内毒素的毒性物质，能抑制宿主细胞代谢，直接破坏宿主细胞。MOMP能阻止吞噬体与溶酶体融合。MOMP表位易变异，在体内可逃避特异性抗体的中和作用而继续感染细胞。热休克蛋白（HSP）能刺激机体巨噬细胞产生TNF-、IL-1、IL-6等炎症性细胞因子。,免疫性 感染后机体产生特异性细胞免疫和体液免疫，以细胞免疫为主，但保护性不强，维持时间短，故常造成持续感染、反复感染和隐性感染。,2023/3/21,53,致病性,1 沙眼衣原体沙眼亚种 沙眼：眼 眼，眼 手 眼传播 包涵体性结膜炎：婴儿产道感染，成人性传播，手 眼，污染的泳池水

19、 泌尿生殖道感染：性传播疾病 2 性病淋巴肉芽肿亚种：男性：腹股沟淋巴结化脓性炎症 慢性淋巴肉芽肿 女性：会阴，肛门，和直肠形成肠皮肤瘘管 3 肺炎衣原体：主要引起青少年急性呼吸道感染,四、防治原则,预防重点是注意个人卫生，避免直接或间接的接触传染。治疗药物选用强力霉素、罗红霉素、阿奇霉素、加替沙星等。,真菌(fungus)：真核细胞型微生物特点：核膜和核仁(细胞核)完整的细胞器(胞浆)单细胞（少数）或多细胞（多数）生存方式：腐生或寄生繁殖方式：有性或无性,概 述,分布广泛、种类繁多多数有益少数有害：医学（病原）真菌400种 常见的有50100种目前真菌病呈明显上升趋势：抗生素、抗肿瘤药物、免

20、疫抑制剂等的滥用器官移植、介入性治疗等新型技术的开展艾滋病、糖尿病、恶性肿瘤等疾病造成宿主免疫功能低下,第一节 真菌的生物学性状,形态：多种多样 有典型的核结构和细胞器按形态、结构分为两类：单细胞真菌多细胞真菌,形态与结构,圆形或椭圆形包括：酵母型真菌：无菌丝，母细胞以芽生方式繁殖，菌落与细菌的菌落相似。类酵母型真菌：母细胞以芽生方式繁殖，出芽产生的芽生孢子持续延长，但不断裂、不与母细胞脱离，产生相互连接成藕节状较长的细胞链，可伸入培养基内，称假菌丝（pseudohypha）。,单细胞真菌,基本结构：菌丝和孢子菌丝（hypha）：孢子生出嫩芽，称为芽管管逐渐延长呈丝状，称为菌丝。孢子（spor

21、e）：真菌的生殖结构，由生殖菌丝产生。,多细胞真菌,菌丝体（mycelium）：菌丝交织成团根据功能不同分为：营养菌丝（vegetative mycelium）气生菌丝（aerial mycelium）生殖菌丝（reproductive mycelium）,菌 丝,真菌的有隔、无隔菌丝（400）,根据隔膜的消长分为：有隔菌丝（大部分病原性丝状菌）无隔菌丝,根据形态不同分为：单纯菌丝 球拍状菌丝 破梳状菌丝 螺旋状菌丝 结节状菌丝 鹿角状菌丝等,鉴别和分类的依据,真菌的各种菌丝,生殖结构，由生殖菌丝产生，是鉴定和分类的主要依据。无性孢子 不经两性细胞配合而产生的孢子。病原性真菌大多数产生无性孢子

22、。有性孢子 细胞间配合（质配和核配）后产生，绝大多数为非致病性真菌所具有。,孢 子,接合孢子 子囊孢子 担（子）孢子,有性孢子,叶状孢子（thallospore）芽生孢子（blastospore）关节孢子（arthrospore）厚膜孢子（chlamydospore）分生孢子（conidia）大分生孢子（macroconidia）小分生孢子（microconidia）孢子囊孢子（sporangiospore）,无性孢子,真菌的叶状孢子,真菌的大分生孢子,真菌的小分生孢子,真菌的子囊及子囊孢子,依靠孢子及菌丝进行繁殖繁殖方式：无性繁殖真菌的主要繁殖方式 有性繁殖,（二）真菌的繁殖与培养,无性繁殖

23、主要包括：芽生 母细胞发芽产生。常见于酵母型和类酵母型真菌。裂殖 母细胞二分裂产生。如裂殖酵母。芽管 萌发芽管，伸延形成菌丝。隔殖 分生孢子梗形成一隔膜，原生质浓缩形成新孢子。,培养特性培养基：营养要求不高，常用沙氏葡萄糖琼脂（沙保弱）培养基（SDA）、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、察氏培养基（Czapek-Dox Agar）、脑心浸膏琼脂培养基（BHI）温度：37（酵母型和类酵母型真菌）2528（丝状真菌）最适pH：4.06.0 生长速度：多数病原性真菌生长缓慢,SDA培养基上，可形成3种类型菌落：1.酵母型菌落（yeast type colony）芽生孢子，无菌丝。如新生隐球菌2.类酵

24、母型菌落（酵母样菌落）（yeast-like type colony）呈藕节状细胞链的假菌丝。如白假丝酵母3.丝状型菌落（filamentous type colony）菌落形态和颜色可作为鉴定、分类的参考依据。见于大多数丝状真菌,第二节 真菌的致病性与免疫性,真菌感染 真菌性超敏反应 真菌毒素中毒肿瘤,致病性,真菌病（mycoses）：由真菌引起的感染，并表现临床症状原发性感染：致病性真菌 球孢子菌（coccidiodes）皮炎芽生菌（blastomyoes dermatitidis）组织胞浆菌（histoplasma）马尔尼菲青霉（penicillium marneffei）等继发性感染：机会致病性真菌 机体免疫功能显著下降时发生,真菌感染,按性质分类：感染性超敏反应：感染，型 接触性超敏反应：吸入或食入，型按部位分类:皮肤超敏反应 呼吸道超敏反应 消化道超敏反应,真菌性超敏反应,来源：真菌代谢产生毒素，存在于农作物、食物或饲料中表现：1.肝、肾、神经、造血系统等损伤2.致癌（黄曲霉毒素等）,真菌毒素中毒,非特异性免疫 皮肤粘膜屏障作用正常菌群拮抗作用（白假丝酵母菌）吞噬作用特异性免疫 细胞免疫体液免疫,免疫性,