药物制剂微生物检验.ppt

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1、药物制剂微生物检验,目录,1、微生物检验分类2、药品微生物限度检测的基本条件3、非灭菌制剂的微生物限度检查4、灭菌制剂的无菌检查法,一、微生物检验分类,无菌检查,凡直接进入人体血液循环系统、肌肉、皮下组织或接触创伤、溃疡部位而发生作用的制品或要求无菌的材料、灭菌器具都要进行无菌检查。注射用制剂：注射剂、输液、注射粉针等；眼用制剂：滴眼剂、眼用膜剂、凝胶剂、软膏剂等；植入型制剂：植入片等；创面用制剂：溃疡、烧伤及外伤用溶剂、软膏剂及气雾剂等手术用制剂、止血海绵、骨蜡等,二、药品微生物限度检测的基本条件,二、药品微生物限度检测的基本条件,二、药品微生物限度检测的基本条件,由于某些供试品具有抗菌活性

2、，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。,二、药品微生物限度检测的基本条件,1.检测用量,2.检测量,二、药品微生物限度检测的基本条件,二、药品微生物限度检测的基本条件,第三节 药品微生物限度检测方法,微生物检验基本流程,1、领取并配制培养基2、擦拭工作台及墙壁3、开启紫外灯灭菌1h4、进行微生物实验5、实验完成后再次擦拭工作台,二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,1、平皿法,二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,封闭式薄膜过滤器,传统开放式薄膜过滤器,二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,二、

3、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,细菌总数平均菌落数稀释倍数,二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,当有两个相邻稀释级的菌落数在30-300之间比值2时，则以2个稀释级的平均值报告。比值2时，则以低稀释级的平板菌落数乘以稀释倍数报告。,高稀释级的平板菌落数*稀释倍数,比值=,低稀释级的平板菌落数*稀释倍数,细菌总数检查表,培养温度：30-35培养基名称：营养琼脂培养基（批号：14040901）,特殊药品微生物限度检验,三、控制菌检查检查项目,（1）阴性对照试验：取稀释液10ml按相应供试品控制菌检查法检查，应无

4、菌生长。（2）阳性对照试验：供试品+10100CFU 阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。（3）供试品控制菌检查：依相应的检查方法进行。,三、控制菌检查检查流程,三、控制菌检查检查流程,三、控制菌检查检查流程,三、控制菌检查检查流程,三、控制菌检查检查流程,三、控制菌检查检查流程,三、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌,三、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌检查意义,大肠埃希菌为条件致病菌，当人体免疫力低下或是侵入肠外组织、器官，可引起肠外感染，乃至败血症。也可随人和动物的粪便排出体外，污染环境，一旦食品、药品、水等物品中检出该菌，说明已受粪便污染，可能存在其他肠道致病菌和寄生虫卵，人们饮

5、用或服用它们则可能引起消化道传染病。,三、控制菌检查大肠埃希菌检查,乳糖胆盐培养基,伊红美蓝琼脂培养基,靛基质试验,紫黑色金属光泽,玫瑰红色液面,麦康凯琼脂培养基：大肠杆菌呈桃红色。,I M Vi C试验 大肠埃希菌+(或-）+-产气杆菌-+,吲哚（靛基质）,甲基红,二乙酰,枸橼酸盐利用,三、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌检查结果报告,MUG阳性:紫外光下管内培养物呈现蓝白色荧光,三、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群检查意义,大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随粪便排出体外后可直接污染药品，若产品中检出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，以此作为粪便指示菌比大肠

6、埃希菌更具广泛卫生学意义。,三、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群检查流程图,三、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群检查结果报告大肠菌群MPN表,根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。,三、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌,三、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌检查意义,三、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,最终结果判断,增菌培养,供试液的制备,书写检验记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,铜绿假单胞菌检查流程图,30-35,1824h,30-35,1824h,十六烷三甲基溴化铵平板,胆盐乳糖

7、培养基,黄绿色菌膜,灰白色湿润,氧化酶试验,粉红/紫红色,绿脓菌素试验,盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色,硝酸盐还原产气试验,N2,明胶液化试验,明胶培养基（高层）,明胶液化,三、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,金黄色葡萄球菌,三、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,革兰染色、镜检 生化试验:血浆凝固酶试验,最终结果判断,增菌培养,供试品的处理,书写检验记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,30-35,30-35,18-24h,24-72h,金黄色葡萄球菌检查流程图,卵黄氯化钠琼脂,金黄色，有乳浊圈,甘露醇发酵试验,血浆凝固酶试验,血浆凝块,液态血浆,三、控制菌检查白色念珠菌检查,白色念

8、珠球菌检查意义,三、控制菌检查白色念珠菌检查,革兰染色、镜检芽管试验,有特征菌落,1%聚山梨酯80-玉米培养基,小结,对于外用药品，不得检出铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌及白色念珠球菌；对于口服药品，不得检出大肠埃希菌；对于原药材，控制大肠菌群数量。,第四节、无菌检查方法,第四节、无菌检查方法,阳性对照试验=阳性对照菌液+供试品,金黄色葡萄球菌（无抑菌作用或抗G+菌）大肠埃希菌（抗G-菌为主的供试品）生孢梭菌（抗厌氧菌的供试品）白色念珠菌（抗真菌的供试品）,阳性对照菌选用原则,阴性对照试验：以无菌检查所用稀释剂做阴性对照，不得长菌,一、直接接种法,二、薄膜过滤法,50ml硫乙醇酸盐流体培养基,50ml改良马丁培养基,阳性对照,303514天,232814天,三、结果判断,阴性对照管应澄清无菌生长,阳性对照管细菌应生长良好,供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。,供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。,谢 谢！,