宠物人兽共患病狂犬病的诊治要点.docx

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1、宠物人兽共患病狂犬病的诊治要点狂犬病是由狂犬病病毒(rabiesvirus,RV)引起的所有温血动物和人的一种急性致死性脑脊髓炎，以狂躁不安、行为反常、攻击行为、进行性麻痹和最终死亡为特征，潜伏期长，致死率几乎100%。人狂犬病的预防是世界大多数地区面临的巨大公共卫生挑战，全世界统计的每年狂犬病死亡人数3500050000人,实际发生人数为50000100ooo人。许多发达国家已经成功控制了家养动物的狂犬病，但在大多数发展中国家狂犬病仍是一种主要的健康威胁。一、病原(一)分类地位狂犬病病毒属于弹状病毒科(RhabdOViridae)狂犬病病毒属(Lyssavirus)。根据狂犬病病毒血清和抗原

2、性之间的关系，可以将狂犬病病毒分为4个血清型。血清1型指的是传统的狂犬病病毒，主要包括“街毒”(野毒)株和疫苗毒株；血清2,3,4型分别是以LagoS病毒、MOkola病毒和Duvenhage病毒为原型的狂犬病相关病毒。血清1型中的疫苗株对血清2,3,4型狂犬病相关病毒具有很弱的保护作用或无保护作用。近年来，通过分子遗传学的研究证实并进一步深化了这种分类，证明了与该4个血清型相对应的4个基因型，另外通过分子遗传学研究还鉴定出了欧洲1型蝙蝠狂犬病毒(EBI)和欧洲2型蝙蝠狂犬病毒(EB2),分别划分为血清5型和血清6型。1996年在澳大利亚又发现了澳大利亚型蝙蝠狂犬病毒。(二)形态学基本特征狂犬

3、病病毒基因组为单股负链RNA,病毒粒子呈圆柱体，底部扁平，另一端钝圆。有些病毒粒子，在其底部有一尾状结构，系病毒由胞浆膜芽生脱出的最后部分。整个病毒粒子的外形呈弹状，长130200nm,直径75nm,表面有1072-1900个突起，排列整齐，负染标本中表现为六边形蜂房状结构。每个突起长810nm,由糖蛋白组成。病毒内部为螺旋形的核衣壳，核衣壳由单股RNA及5种蛋白质(M,L,N,P,G)组成，其中糖蛋白是RV的主要保护性抗原。(三)培养特性狂犬病病毒可在鸡胚内、原代鸡胚成纤维细胞以及小鼠和仓鼠肾上皮细胞培养物中增殖，并在适当条件下形成蚀斑。此外，RV也可在兔内皮细胞系、蜂蛇细胞系、人二倍体细胞

4、如Wl-38、MRe-5和HDCS等细胞株中良好增殖，并能形成光学显微镜下可见的嗜酸性包涵体。接种狂犬病病毒于乳鼠脑内，可以获得高滴度的病毒，因此，乳鼠常被用于进行毒株的传代。细胞内培养的狂犬病病毒可以凝集鹅和1日龄雏鸡的红细胞。动物脑内的病毒不呈现血凝现象。狂犬病病毒凝集鹅红细胞的能力可被特异性抗体所抑制，故可进行血凝抑制试验。（四）理化特性狂犬病病毒不稳定，但能抵抗自溶及腐烂，在自溶的脑组织中可以保持活力710d。冻干条件下长期存活。在50%甘油中保存的感染脑组织中至少可以存活1个月，4。C数周，低温中数月，甚至几年。室温中不稳定。反复冻融可使病毒灭活，紫外线照射、蛋白酶、酸、胆盐、乙醛、

5、升汞和季胺类化合物（如新洁尔灭）以及自然光、热等都可迅速破坏病毒活力。56,1530min内,1%甲醛溶液和3%来苏儿15min内可使病毒灭活。60%以上酒精也能很快杀死病毒。真空条件下冻干保存的病毒可于4。C存活达数年。二、流行病学（一）传染来源狂犬病属于自然疫源性疾病，自然界中的一些野生动物作为狂犬病的储存宿主和传播载体保证了狂犬病的维持。目前，在欧洲大陆，红狐是狂犬病的主要载体，在北美，浣熊和臭鼬起着主要作用。在亚洲和非洲的发展中国家，尽管狂犬病也与野生动物有关，但目前犬是狂犬病的主要载体。蝙蝠是狂犬病病毒2,4,5,6基因型的主要贮存宿主，但也和基因1型的传播有关。（一）传播途径咬伤是

6、狂犬病病毒传播的最重要的途径。98%的动物或人的狂犬病都是通过被患病动物咬伤引起的。少数病例是通过其他暴露方式如通过动物舔舐黏膜（如肛门）或溃疡表面感染，动物抓伤并污染感染性物质时也会引起感染。在极其特殊的情况下，病毒可通过尘埃或气溶胶传播。如在实验室中对感染病毒的脑组织进行匀浆化时，所造成的飞沫传播可导致人感染。在美国的得克萨斯州有两例狂犬病病人是因造访山洞感染，因为山洞中聚焦着数百万只墨西哥无尾蝙蝠，蝙蝠是狂犬病病毒的携带者，但这种传播只在极特殊的情况下才会发生。狂犬病在人群之间水平传播可能性很小，但这种传播自20世纪70年代就有报道，传播方式有：通过器官移植传播，在法国、美国、泰国、印度

7、和伊朗均报道了通过角膜移植发生狂犬病，2004年在美国报道了通过器官移植致使器官受体发生狂犬病。通过胎盘传播，迄今只有一例报道。人被咬伤或感染性唾液暴露给黏膜，在埃塞俄比亚曾有两例报道。值得注意的是，有些人狂犬病病例没有明确的咬伤史，也没有和感染狂犬病的亲戚或朋友有过任何接触的历史。这种情况在美国和前南斯拉夫发生过，是值得研究的一个课题。（三）易感动物1 .自然宿主野生动物和狼、狐、浣熊、鼬、香猫等是狂犬病的自然贮存宿主，蝙蝠也是狂犬病病毒的主要携带者，并广泛流行本病，但犬仍是最主要的发病者，而且也是感染人与其他动物的主要传播媒介，其次是猫，偶为牛、猪、马、骡和驴等家畜，家畜多由其他动物传播而

8、来。人和大部分家畜在自然情况下都不会发病，只有在被其他动物咬伤后才可能发病，因此，人和大部分家畜都应该看作是狂犬病的终末宿主。在我国狂犬病流行区，据不完全统计，外观健康的犬中，有8.3%25%的血清阳性率，说明也有较多的无症状病例或康复病例。也曾有报道，人被“健康”犬咬伤，人患狂犬病死亡，但犬仍健康存活。这就是所谓的“顿挫型感染“，是一种非典型的临床感染，病程极短，症状迅速消退，但体内仍可存在病毒。这种顿挫型感染主要见于犬，还有狐、鼬等野生动物，也见于人工接种的大鼠等实验动物。2 .实验动物小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔和灵长类动物均对狂犬病病毒敏感，其中鼠类在我国和美洲一些地区有自然感染的报道，

9、其他实验动物未见类似情况。人工感染时，所有这些实验动物均易感。（四）流行特征1 .人狂犬病流行病学特征在世界大多数地区很难做到对人狂犬病死亡进行准确的估计和统计。1993年WHO粗略统计，20世纪90年代孟加拉国每年有2000人，中国每年有1014人，印度每年有30000人死于狂犬病。拉丁美洲在19901996年共有1392人感染狂犬病病毒死亡。世界范围内每年平均死亡人数为35000-50000o除了因狂犬病而死亡的人员以外，世界上每年有数百万人接受暴露后治疗。过去在发达国家中，人狂犬病的情况与现在发展中国家狂犬病发生情况的统计结果基本相似。目前人的狂犬病在发达国家中发生很少，主要是由于可以获

10、得高质量的细胞培养疫苗和狂犬病免疫球蛋白。美国自20世纪50年代开始，人狂犬病的发生人数伴随着犬狂犬病的下降已经大幅度降低，1990年以来，每年的狂犬病死亡人数平均只有3例。狂犬病在发达国家的发生情况主要有两种，一种是野生动物储存宿主引起，主要来自各种蝙蝠和浣熊、鼬类及狐等；另外一种是由其他国家带入的，即来自犬狂犬病流行国家暴露病人。人狂犬病全年均可发生，大部分发生在春季至秋季，高发期过后，在冬季和春季主要是陆地食肉动物的狂犬病。近年来，蝙蝠相关的狂犬病变异株的出现，成了人狂犬病的主要原因之一，因此，出现了在夏末发生人狂犬病的明显趋势,这种人狂犬病的发病高峰与秋季蝙蝠狂犬病的发病高峰基本一致。

11、在发展中国家，即在亚洲、非洲和南美洲地区的大部分国家，犬是狂犬病病毒的主要储存宿主，同时也是人狂犬病的主要传播宿主。热带地区人的狂犬病死亡数占99%,暴露后治疗的数量占90%o通常情况下，犬和人群的密度最高时，发生狂犬病的危险就越大；公共卫生措施不当的城市中心也容易发生，和发达国家一样，20岁以下的男性狂犬病发病率最高，大部分受害者在15岁以下。狂犬病的危险性与社会经济状态有关，经济落后，社会混乱的地区更容易发生狂犬病，主要和这些地区流浪犬数量较多，免疫覆盖率较低有关。2 .动物狂犬病流行病学特征犬的狂犬病呈地方性流行。1岁以下的青年犬在犬群和暴露给人的传播中尤其重要，一是因为该年龄的犬在犬群

12、中占绝大多数，同时青年犬对狂犬病更易感，并且该年龄犬接受免疫次数少，尚未获得足够的免疫力。猫在狂犬病传播给人和其他家畜的传递链中是一个重要的环节，我国由猫引起人狂犬病的报道较少，美国有报道。患狂犬病的猫主要是那些未免疫过和通常无主人的流浪猫,大部分在1岁龄以下。因猫咬伤的人患狂犬病人群比重女性高于男性。但在犬狂犬病呈地方性流行的地区，猫的狂犬病只是相对次要的角色。牛的狂犬病具有重要的经济学意义，我国在20世纪80年代末在河南省发生过一次以“怪叫”为主要症状的流行病例，初步诊断可能与当地家鼠携带狂犬病病毒有关。在拉丁美洲如阿根廷北部至墨西哥分布有大量的吸血蝙蝠，大部分牛的狂犬病地方流行均为吸血蝙

13、蝠传播。在美国中部的牛狂犬病主要和臭鼬狂犬病病毒变异株有关，在东北部和中部地区则与浣熊适应狂犬病病毒有关，每年大约有100例病牛报道。在南部非洲地区，牛在家养动物中的狂犬病位置仅次于犬。犬和豺是牛狂犬病的主要暴露源头。在世界其他地区，牛的狂犬病呈散发。马、猪、山羊、绵羊和其他家养动物的狂犬病均呈散发。三、致病性（一）对动物的致病性犬感染狂犬病病毒后，潜伏期一般为28周，长的可达数月至数年，短的仅有1周。这主要与被咬部位、暴露类型、病毒在暴露部位的数量和机体的免疫状态等有关。犬患病时，往往改变习性，病初常有逃跑或躲避趋势，故有将狂犬病称为“逃跑病”的。病犬可能失踪数天后归来，此时体重减轻，满身污

14、泥，皮毛上可能带有血迹。主人对其爱抚或为其洗涤血迹时，往往被咬。狂躁发作时，疯犬到处奔走，远达40-60km,沿途随时都可能扑咬人及所遇到的各种家畜。病犬行为凶猛，间或神志清楚，重新认识主人。拒食或出现贪婪性狂食现象，如吞食木片、石子、煤块或金属，可能发生自咬，也常发生呕吐。经过24d的狂暴期，进入麻痹期，下颌下垂、舌脱出口外，严重流涎，后躯麻痹，行走摇摆，卧地不起。病犬最后呼吸麻痹或衰竭而死。猫的症状与犬相似。病猫喜隐于暗处，并发出粗砺的叫声，继而狂暴，凶猛地攻击人畜。病程24d。牛和羊狂犬病的平均潜伏期15d,平均发病期4d。主要临床症状包括流涎过多(100%)、行为改变(100%),鼻翼

15、颤动(80%).吼叫(70%)、有侵略行为、感觉过敏、高度兴奋(70%)和咽部局部麻痹瘫痪(60%)。牛狂躁型狂犬病占70%,羊为80%o在很多情况下，牛的狂犬病不易确定，可能在回顾性调查中才能确诊。患病牛经常会出现气闷症状(或窒息症状)，容易给人造成异物堵塞的感染。我国牛感染狂犬病的报道近年来较少，在20世纪80年代末在河南发生了一起牛的狂犬病，当地人称为“怪叫病二马狂犬病的平均潜伏期为12d,平均发病期为6d,纯种马潜伏期和发病期较短。马的症状包括鼻翼(口)震颤、咽部痉挛或麻痹、运动失调或局部麻痹和嗜眠。某些马最初表现为沉郁型，但最后的患病马发展为狂躁型狂犬病。其他动物在12d后出现急性神

16、经期，可见到神经性活动，即整体兴奋性增强，对听觉、视觉或触觉刺激物等过敏，并出现突然的非激发性震颤和对有生命及无生命物体出现过度侵害行为。野生动物则会失去它们对人的注意力，家畜和其他动物则会改变它们的活动周期，寻找冷僻处，或变得更加群集，并能观察到病畜头歪，或头顶头或抵物及凝视星星等行为。动物也会出现在已知或它假设的病毒暴露部位梳理被毛或搔痒行为，很可能是对感觉改变的反应，与感染神经元的病毒兴奋作用有关。这种异常行为可能进一步发展成为自残症甚至自身消耗机体部分器官，尤其是附属器官。在雄性动物，异常舔舐阴茎。在临床期，动物可能攻击非生命物体，如笼具、木棒或动物的交通工具，其他一些动物则表现为对疼

17、痛不敏感。狂犬病的临床表现通常分为两种类型，即狂躁型和沉郁型。狂躁型狂犬病是以剧烈震颤和攻击行为为主要症状的临床形式，沉郁型狂犬病可能完全缺乏攻击行为，但麻痹为主要临床表现，同时还会出现进行性厌食、沉郁，面神经症状，出现唾液分泌增多。这两种极端的临床表现可能反映了病毒在中枢神经系统感染的特异性部位不同。某些情况下，动物个体可交替出现两种全身性症状，随着临床病程的发展，首先出现狂躁型症状，然后出现沉郁型症状，或是相反的情况。人狂犬病呈现的特征性神经症状，即真性恐水症和高空恐惧症在动物尚未见记载。(一)对人的致病性人在被狂犬病犬咬伤或创面等接触狂犬病病毒后，可能发生狂犬病，又称“恐水病”。潜伏期为

18、3060d,但也可能长达几个月或以上。患者开始时焦躁不安，不适，头痛，体温略升，随后兴奋和感觉过敏，流涎，对光、声敏感，瞳孔散大，咽肌痉挛，吞咽困难，并出现恐水症状，甚至听到流水声就发生惊恐和痉挛性发作。兴奋期可能持续至死亡，或在死前出现全身麻痹。人狂犬病除了急性行为改变以外，没有示病性或特异性临床症状。狂犬病症状的严重程度及变化可能与中枢神经系统病变的特异部位有关，也与病毒株、剂量、感染途径等有关。狂犬病的前驱期通常是在咬伤后数周内，狂犬病的早期症状为非特异的，可能包括厌食、嗜眠、发热、吞咽困难、呕吐、尿频和腹泻，在临床病程的早期还可以见到渐进性的改变。四、诊断（一）临床诊断要点1 .动物临

19、床诊断要点动物狂犬病的临床诊断虽然不能确定感染，但对下一步确定性诊断和采取有效的防治措施具有重要的意义，尤其是犬的狂犬病。感染早期，感染犬没有异常临床表现，有的表现沉郁,喜欢藏在暗处。在患病初期，感染犬往往改变习性，有躲避主人的趋势，随着病程的发展，病犬出现兴奋症状，主人抚摸犬时，往往被咬，犬吞咽困难，流涎增多，但饮水次数和饮水量可能增加，随后出现攻击行为，连续咬人及动物或物体或咬住不放，有的表现拒食现象，最后表现全身麻痹死亡。猫的狂犬病也主要表现为狂躁型，兴奋症状出现后24d出现麻痹。其他动物的狂犬病临床表现由于都是感染脑神经组织引起，均产生沉郁或兴奋症状，由于各种动物的正常行为存在着差异，

20、因此患病时临床表现也出现一定的差异。如牛患病时出现“怪叫”和磨牙；马则出现啃咬或摩擦被咬伤部位，易于惊恐；猪表现兴奋，频频拱地，继而攻击人畜。动物出现以上异常表现，并在出现临床症状以前，有过和在正常情况下不易接触到的动物接触史的，或明显看到动物被咬伤情况的，可以初步诊断为狂犬病。确诊必须通过实验室检测实现。2 .病人临床诊断要点人是狂犬病的终末宿主。人感染狂犬病后临床表现为脑炎症状，由于感染个体不同而有所差异。同时由于人的其他病毒性脑炎症状和狂犬病症状尤其是在早期容易混淆，因此仅靠临床症状不能确诊。但是通常根据问诊或主要的临床表现就可做出初步诊断。由于人患狂犬病后致死率几乎达到100%,因此在

21、做出初步诊断后应立即使用高免血清单抗进行治疗。治愈成功的机会虽然较少，但无论是从医学的角度还是从人道的角度，这种治疗都是必要的。人狂犬病生前诊断的依据主要有以下几个方面：(I)具有暴露史。虽然暴露于动物的人不一定发病，但人发病必定有暴露给动物的历史，在数天、数月及至数年前曾被犬或猫或家畜或野生动物(如灌、蝙蝠等)咬伤，或被舔吮，或曾宰杀过动物尤其是犬科动物等。狂犬病的流行没有明显的季节性，任何情况下均有发生的可能。(2)临床表现相关或相同。狂犬病的临床表现有以下一些特点：动物咬伤部位出现异常感觉，或咬伤肢体出现麻木感、蚁行感；肌肉呈现消肿或毛发竖立。出现恐水、怕风、咽喉部肌肉痉挛，对声、光刺激

22、过敏，出现多汗、流涎，咬伤肢体麻木、感觉异常。沉郁型或麻痹型狂犬病可能临床症状表现及特点不明显，尤其是潜伏期较长的狂犬病,症状和表现可能比较复杂，需要综合流行病学因素全面诊断。(3)临床常规即血常规、尿常规、脑脊髓液常规及脑电图检查呈现不同程度的变化。但都源于非特异性变化，如血常规参数可能正常或显示较轻度的非特异性异常。如血细胞压积容量可能下降。尿常规最初正常，但随病程延长可出现不同程度蛋白尿、糖尿等。脊髓液常规随时间延长会出现异常，WBC计数为75300InnI2o脑电图后期呈现弥散性慢波活动，S波错乱，周期性复合性或阵发性尖长电位激发，脑水肿颅内压增高。但这些常规检测结果均无确诊意义。(4

23、)鉴别诊断。临床上狂犬病的表现经常与一些脑感染或神经性疾病相混淆，需鉴别诊断。（5）在做出初步临床诊断的前提下，对该样品的确认无论是从疾病的定性上，还是从狂犬病的报告制度方面都是必要的，因此在初步诊断后采取积极治疗的同时，应该采集病人样品送相关实验室做出特异性诊断。（二）实验室诊断要点狂犬病的确定诊断只能通过实验室检测才能获得。1 .标本采取采取濒死期动物或死于狂犬病患者尸体的延脑、海马回、脊髓和唾液腺，置灭菌容器，在冷藏条件下运送至实验室。如系唾液或者脊髓液，则应低速离心后，取上清液，加入青霉素（100OlVmL）和链霉素（IOooUgmL）,并酌量加入约2%的灭活牛血清。标本的运送和保存，

24、要求及时、冷藏，以保证诊断准确可靠。2 .压印片检查切取海马回，置吸水纸上，切面向上，用载玻片轻轻按压切面，制成压印标本，室温自然干燥后染色镜检一一检查特异包涵体，即Negri小体。Negri小体位于神经细胞浆内，呈梭形、圆形或椭圆形，呈嗜酸性着染（鲜红色），但在其中常可见到嗜碱性（蓝色）小颗粒。神经细胞染成蓝色，间质呈粉红色，红细胞呈橘红色。检出Negri小体，即可诊断为狂犬病。但是并非所有发病动物脑内都能找到包涵体，犬脑的阳性检出率为70%90%。3 .荧光抗体检查切取海马回，制成压印片，待干后，于-20。C用丙酮固定4h后应用。病料检查通常采用阻断对比法进行，即取工作浓度荧光抗体分别装于

25、2支小试管内，分别等量加入正常鼠脑悬液及狂犬病感染鼠脑悬液，37。C感作30mino中间振荡数次，此后离心沉淀，吸取上清液应用。分别滴加12滴于上述2张压印片上,37,30min。用pH7,2PBS泡洗IOInin,然后用缓冲甘油封载后镜检。如果以正常鼠脑悬液吸收的荧光抗体染色的压印片呈特异性荧光，而以感染鼠脑悬液吸收的荧光抗体染色的压印片不出现特异性荧光染色，即可确诊为狂犬病。也可以将脑组织印片或涂片或做病理切片，固定后滴加荧光标记抗体，做处理后镜检。如有翠绿色颗粒或斑块荧光即可确诊。此外，可以将特异性抗体包被在载体玻片上，用脑或唾液上清与抗体反应后，再用荧光抗体染色，镜检。还可采用间接荧光

26、免疫技术进行检测。荧光抗体检查必须设置已知阴、阳性标本对照，鉴定特异性。4 .酶联免疫吸附试验先用抗狂犬病病毒阳性血清或IgG包被ELISA反应板，加待检测脑悬液，再用标记HRP的阳性IgG进行反应；亦可采用特异性抗体作为一抗与被检样品反应，然后再与酶标二抗进行反应。同时，设阳性及阴性抗原对照，如被测样品出现特异性显色，即可诊断为狂犬病。5 .脑内接种取脑或唾液腺等材料用缓冲盐水或含10%灭活豚鼠血清的生理盐水研磨成10%乳剂，脑内接种57日龄乳鼠，每只0.03mL,每份标本接种46只乳鼠。唾液或脊髓液则在离心沉淀和以抗生素处理后，直接作接种用。乳鼠在接种后继续由母鼠同窝哺养，34d后如发现哺

27、乳力减弱，痉挛，麻痹死亡，即可取脑检查包涵体，并制成抗原，做病毒鉴定。如经7d仍不发病，可杀死其中2只，剖取鼠脑做成悬液，如上传代。如第二代仍不发病，可再传代。连续盲传三代，第一、第二、第三代总计观察4周而仍不发病者，判作阴性。也可应用3周龄以内的幼鼠，如上做脑内接种，每只0.03mLo这种日龄的小鼠通常在接种后15d内发病，主要症状是肌肉震颤，步样失调，麻痹，最后死亡。新分离的病毒可用电子显微镜直接观察，或者应用抗狂犬病特异免疫血清进行中和试验或血凝抑制试验加以鉴定。中和试验采用仓鼠肾细胞做细胞病变抑制试验或蚀斑减数试验，或者应用小鼠脑内接种法。即将标准免疫血清与新分离病毒进行试验，如新分离

28、病毒被已知狂犬病免疫血清所中和，则即证明新分离病毒为狂犬病病毒。6 ,分子生物学诊断PCR技术于1990年首次应用于鼠脑内狂犬病病毒的检测,后来用于狂犬病的诊断研究。根据被检样品PCR产物大小与设计引物间序列大小是否一致，即可确诊。如有条件，也可采用测序的方法，测出被检样品PCR扩增产物的部分序列，可更准确地做出诊断。PCR具有快速、特异、操作简单等特点，在狂犬病诊断中具有很好的应用前景。7 .狂犬病抗体测定狂犬病抗体的测定除了上面提到的可用于人狂犬病病例的生前诊断外，还可用来检测疫苗效力、动物免疫监测以及狂犬病地区流行情况。抗体检测方法可分为3类：(1)抗原结合测定。即检测狂犬病病毒抗体对吸

29、附在支持物上的抗原的结合能力，方法包括ELlSA和免疫荧光测定(IFA)。这种检测方法的特异性则由包被的抗原性质决定,或由其一种针对特异结构蛋白的标记抗体通过竞争或阻断性结合决定。通过本方法检测疫苗效力虽然在某些研究中认为具有一定的相关性，但由于疫苗的效力与病毒中和抗体的产生密切相关，因此通过这种抗原结合测定方法测定的疫苗接种免疫反应一般是不能得到认可的，但是抗原结合测定在狂犬病流行地区动物狂犬病抗体的阳转调查中具有很好的应用价值，因为抗原结合测定如ELISA方法简单，便宜，大批量样品也比较方便。(2)抗体功能测定。这类测定方法是通过补体结合或血凝抑制等进行的非病毒相关的检测方法，是在早期诊断

30、研究中建立的方法，目前已不再广泛应用。（3）抗原功能检测。这类测定方法是检测抗体阻止或封闭或破坏病毒特异性功能的方法。狂犬病病毒感染力的中和作用即最广泛应用的抗原功能测定方法。所有的病毒中和作用试验均采用固定量的病毒与系列稀释的血清进行感作。五、防控措施（一）监测1 .免疫效果监测对犬实施免疫后要进行抗体监测，评估免疫效果，根据抗体监测结果确定加强免疫时间；抗体监测方法有ELISA.间接血凝试验等。2 .疫情监测对犬类定期开展狂犬病疫情监测，掌握疫情动态，特别是狂犬病高发区要加大监测频率和抽样比例，未免疫犬可采用血清学方法进行疫情监测，免疫犬采用病毒分离、RT-PCR等方法进行病原的检测。（二

31、）预防1 .控制动物传染源（1）免疫。对犬等动物做预防接种。目前动物所用的常规疫苗分活疫苗和灭活苗两大类。目前我国在犬实际应用中最为广泛的是弱毒活疫苗。我国使用的兽用疫苗，20世纪50-80年代先后采用了羊脑固定毒减毒疫苗、Semple型疫苗和FluryLEP疫苗。80年代初从国外引进了ERA株，在BHK-21细胞上进行生产，其对马、牛、羊和犬的免疫力可达Ia以上。灭活苗安全，效果确实，发达国家目前一直使用这类灭活苗。在我国灭活疫苗由于制备成本昂贵，因此未在犬中推广应用。用石炭酸灭活的绵羊或山羊脑疫苗，对犬和其他动物都有较好的免疫保护力，免疫期长达Ia左右。如利用某些灭活疫苗在3月龄时给犬和猫

32、免疫，Ia后再次加强注射1次，就可以获得3a期的保护力。以后可每年或每%加强一次免疫。(2)饲养管理。加强犬的饲养管理是预防狂犬病的重要措施，养犬要实行登记备案制度和免疫标识制度；制订城市和农村养犬管理办法，饲养环节实施拴养和免疫规定，流通环节实施凭免疫证交易和凭检疫证运输规定，监督环节对养犬者遵守养犬有关规定严格执法，组织消灭流浪犬，防止养犬伤人。2 .人群预防人狂犬病的预防首先要从防止暴露着手，动物饲养人员、相关动物从业人员和实验室相关研究人员应当进行暴露前免疫；作业时应当穿戴必要的防护服装。一般情况下，人在暴露后免疫，用于人狂犬病预防的疫苗包括Semple脑组织灭活苗、新生动物脑组织灭活

33、疫苗、鸭胚培养灭活疫苗和细胞培养灭活疫苗4类。但目前较多应用的人狂犬病疫苗主要是细胞培养的灭活疫苗。WHO推荐的质量好、接种次数少的疫苗有人二倍体细胞疫苗、VerO细胞疫苗、鸡胚细胞纯化疫苗和鸭胚纯化疫苗，它们具有副反应轻、抗体产生早等特点,7IOd出现中和抗体，免疫持续时间在Ia以上。在被犬咬伤后，首先要对伤口及时处理，主要采用挤压伤口、清洗暴露伤口，严禁做一般伤口包扎处理。24h内要尽快进行暴露后疫苗注射。（三）疫情处置1.动物疫情处置（1）疫情报告。发现疑似疫情，及时向当地动物防疫监督机构报告。动物防疫监督机构接到疫情报告并确认后,按动物疫情报告管理办法及有关规定及时上报。（2）疫情处理

34、。发现疑似狂犬病动物后，畜主应立即隔离疑似患病动物，限制其移动，并立即向当地动物防疫监督机构报告。动物防疫监督机构接到报告后，应及时派人员到现场诊断，包括流行病学调查、临床症状检查、病理剖检、采集病料、实验室诊断等，并根据诊断结果采取相应防治措施。在动物饲养地，确诊为狂犬病后，当地县级以上人民政府畜牧兽医行政管理部门应当划定疫点、疫区、受威胁区；县级以上地方人民政府根据需要组织有关部门和单位采取隔离、扑杀、销毁、消毒、限制易感动物和动物产品及有关物品出入等控制、扑灭措施。若呈暴发流行时，由当地畜牧兽医行政管理部门，及时报请同级人民政府决定对疫区实行封锁，逐级上报国务院畜牧兽医行政管理部门。县级以上人民政府根据需要组织有关部门和单位采取隔离、扑杀等强制性控制和扑灭措施，并迅速通报毗邻地区。2.治疗由于狂犬病发病人和动物几乎无例外地死亡，因此狂犬病不存在病后免疫问题。怀疑或确定动物发生狂犬病时，一般不进行治疗，可对动物实施安乐死。人出现狂犬病症状后，进行治疗一般不会治愈。狂犬病高免血清通常在咬伤严重时用于暴露后紧急治疗，但在发病后使用无效。