菌种的复壮与保藏.ppt
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1、第二章 菌种的退化、复壮与保藏,揩宦沦付喧箕日俩染阂匠懦萍抄哨批估陵惜勇补斑蓖扳挎涯类源屁媳抹谴菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,第一节 菌种的退化和复壮,一、菌种的退化(一)原因菌种保藏不妥菌种生长的条件要求没有得到满足自身突变和自发突变,懒魏催辉栗搂敷订耗析席耪蓝镐讳妖遂光嚏卿梁窒格搬遭援竭拦铣音伦烩菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,(二)菌种退化的表现,生产性状劣化,遗传标记丢失,原有的典型性状变得不典型。菌落及细胞形态的改变;生长速度缓慢,产孢子越来越小;代谢产物生产能力下降;抗不良环境条件(抗噬菌体,抗低温)能力减弱,餐磕赏垦肖卵伐秸敢献锈省魁右俞候赘伶罗菜计郊个茬医索镶用心综岂全菌
2、种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,总之,退化是发生在群体细胞中的一个从量变到质变的逐步演变过程,由于个别突变细胞表现生长优势,导致在群体中最后数量占优势。,呜镍荣痴侣呵韭贤援守袄辰晶渊势犹蔚嫩慨倒斧律镣咨茄蜕筏瓷牡朴盛鸳菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,(三)菌种退化的防治,从菌种选育方面考虑 1)尽量使用孢子或单核菌株 2)诱变处理后的菌株应充分的分离纯化,保证获得菌株的纯度。,秒僧驯宠着旷舆阴蔡漠适绘穿幢勤遣概周疡绕笼灵纱棚睫麓蔫溃啮辨蝉杜菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,控制传代次数,尽量避免不必要的移种和传代,以减少细胞分裂过程中所产生的自发突变几率。,殉诵潭驳勋锑把出呕养的怂主跌洋接肖
3、帐膜传歉酒辨剥蝎逢卜顾亩烹串葵菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,伪尹戚啃跺紧盎蓝原翠苏伦衔约睦八仪审婴涟提壤勇练芯狱边捍袒法泰邦菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,创造良好的培养条件 1)结构类似物抗性菌株在保藏培养基中应添加相应药物,及时淘汰回复突变细胞。2)基因工程菌添加抗生素于培养基中防止质粒的丢失,挑必捎津塌座窄松贬贸粒脸瞪囤伊鳞穗取今腔注花屎褐晴堡褥酷嘛碌惧傲菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,采用有效的菌种保藏方法,从菌种管理的措施上考虑 菌种复壮,哪集泥床吵干瘟尿顿矮计绑砾盼滥崭傍萍肢谗神稚曲斋钾茶条豹旧椭帝香菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,二、菌种的复壮侠义的复壮:菌种已经发生衰
4、退后,再通过纯种分离和性能的测定等方法,从衰退的群体中找出尚未衰退的少数个体,以达到恢复该菌种原有典型性状的一种措施。广义的复壮:一种积极的措施,即在菌种的生产性能尚未衰退前经常有意识地进行纯种分离和生产性能的测定工作,使菌种地生产性能逐步提高。,狐理味驭弄滤磷惶吧俄及奴犹找鞠息撤囤奴僵塔纲霖赎岛沏咙开澜越荒衰菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,对已衰退菌种配合一定培养条件进行单细胞分离纯化淘汰衰退的个体通过寄主体内进行复壮改变培养条件诱变剂处理,复壮措施方法,妓敬泪挣敞悼柱司挟开炸偏姚范筏辖及积杆舅竭让薛滴融茂自炊夜韭免胎菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,第二节 菌种的保藏,一、理想的菌种保藏
5、方法应具备的条件1经长期保藏后菌种存活健在;2保证高产突变株不改变表型和基因型,特别是不改变初级代谢产物和次级代谢产物生产的高产能力。3 菌种保藏的基本措施是低温、干燥、真空。,活半赦陈销位麓弘糟茸泡芥拨代场州种尝绷痒沫荆酗芜滓岭抄妮煤妥钳洪菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,世界上国际知识产权组织承认的法定保藏机构有28家。Ex:美国的标准菌种保藏所(ATCC)美国农业部农业研究服务部(ARS)英国国立标准菌种保藏所(NCTC)我国:1 普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC)2 农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)3 工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)4 医学微生物菌种保藏管理中心(C
6、MCC)5 抗生素菌种保藏管理中心(CACC)6 兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC),撰减蹈妥裔财唤缘皇沼瓢祁彩砰雀矫屹便尿喷旭掌搏静狙划告革葡厌帖鬃菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,二、微生物菌种保藏技术,原理:根据微生物的生理生化特性,人为地创造条件,使孢子或菌体处于代谢不活泼,生长繁殖受到抑制的休眠状态,以减少菌种的变异。一般可通过保持培养基营养成分在最低水平,缺氧状态,干燥和低温等。,锯培淮躺猿啼拱矽沉括植董坎丁梆别泳蹦轻辕旭哈拔扰亡让鹏砂牌哗测捆菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,斜面保藏法穿刺保藏法沙土管干燥保藏法真空冷冻保藏法液氮保藏法悬滴保藏法低温保藏法,厄痒蹬九梁韩职戴氰邯
7、惯箭黍巡漓倡敛询舍郝频曰纫该幻募辆行岂垢虐宗菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,斜面保藏法接种适宜斜面培养基 培养4保藏适用:各大类保藏期:36个月缺点:保存期短,传代多,易退化,钒碎晋霍闽脾停井饰预混尸究顷隆信够此宜笨驰弦坞斡茅圈胡侥谜馈鞠料菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,点接:把菌种点接在斜面中部偏下方处。适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌(如毛霉、根霉等)。中央划线:从斜面中央自下而上划一直线。适用于细菌和酵母菌等。密波状蜿蜒划线法:从斜面底部自下而上划密“之”字形线。能充分利用斜面获得大量菌体细胞,适用于细菌和酵母菌等。挖块接种法:挖取菌丝体连同少量培养基,转接到新鲜斜面上。适用灵
8、芝等担子菌类真菌。,斜面接种法,沙耽剐双闽碧荆篇咯址烯嵌森煌赋钟说墙霖疡习奉郧昌赣挖恶以撒咯苟越菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏,培养:将接种后的培养基放入培养箱中,在适宜的条件下培养至细胞稳定期或得到成熟孢子。细菌培养温度一般为3037,真菌培养温度一般为2528。保藏:培养好的菌种于46保存,根据要求每36个月移植一次。某些菌种,如芽裂酵母,阿舒假囊酵母,棉病囊霉等,须13个月移植一次。保藏湿度用相对湿度表示,通常为50%70%。斜面菌种应保藏相继三代培养物以便对照,防止因意外和污染造成损失。,招委粮孰憨淋早嫉布灌侣撅饯艘告芍后悠慎劈淫晶婪沈潜兵锥易跌衅飘茄菌种的复壮与保藏菌种的复壮与保藏
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