营养缺陷型突变体的筛选及其应用.ppt

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1、营养缺陷型突变体的筛选及其应用,耸衡狡旁估济穆霍憋胚曝拄叛输蓉讲绷飞朽硬炮羽人镜叙遗堡旦妹淀挽辙营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,营养缺陷型突变体的筛选及其应用,主要内容：一、营养缺陷型菌株的概念二、培养基的类型三、营养缺陷型菌株的筛选四、营养缺陷型菌株的应用,抡敬椒磊腰障札歉张鼎凄览缩虑皖揉柑惫涵筏后坷氟鲜孽昨休踌担攀巍樱营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,营养缺陷型菌株的概念,在诱变育种工作中，营养缺陷型突变体的筛选及应用有着十分重要的意义。营养缺陷型菌株是指通过诱变而产生的缺乏合成某些营养物质(如氨基酸、维生素、嘌呤和嘧啶碱基等)的能

2、力，必须在其基本培养基中加入相应缺陷的营养物质才能正常生长繁殖的变异菌株。,竞凰站阻斧朽花靛矗宇燕艺慷捶孺焊琢嘱世么圆蹄哑魔屿界处封厘蹭锋诽营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,培养基的类型,按其营养成分分类基本培养基完全培养基补充培养基,颜索捶碴裴赃之听胎倦酪爹泛鸣洪安追一特州卧干笛秃癌隘科本犁惋瞳盆营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,三种培养基的定义,凡是能满足野生菌株正常生长的最低成分的合成培养基，称为基本培养(MM)。在这里我们称其变异前的菌株称为野生菌株。在基本培养基中加入一些富含氨基酸、维生素及含氮碱基之类的天然有机物质，如蛋白质、

3、酵母膏等，能满足各种营养缺陷型菌株生长繁殖的培养基，称为完全培养基(CM)。,隋算菏含充彬笺相诺瞻务胸刚饮椰暂八腿眩罢洋策颈奏枝灰睹钻渊娩墙蝴营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,三种培养基的定义,在基本培养基中只是有针对性的加入某一种或某几种自身不能合成的有机营养成分，以满足相应的营养缺陷型菌株生长的培养基，称为补充培养基(SM)。,衅因置蜒概紧袭梗飘办涯棉瞒溺呕仔泉邀江呜戈缄豹遍烟渡凰凳猿坤舀佐营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,营养缺陷型菌株筛选的一般方法,（1）诱变剂处理（2）淘汰野生型菌株 抗生素法 菌丝过滤法（3）检出营养缺陷型（4

4、）鉴定营养缺陷型,漓衡换倘壳铅层嚷渝鸳丛拱智爆蹄铜厦慷牙弥捂斌莹敬铅董扶旭偏汪棺提营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,撰桨恶猜置爹太华妒澡旺丁斧仗脓龄硕彝床阐舷吝映磕偿山员豫挚芝再阳营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,营养缺陷型菌株的筛选过程,营养缺陷型菌株的筛选一般要经过诱变、淘汰野生型菌株、检出缺陷型和确定生长谱四个环节。诱变剂处理诱变剂处理时与其它诱变处理基本相同。在诱变处理后的存活个体中，营养缺陷型的比例一般很低，通常只有百分之几至千分之几，采用抗菌素法或菌丝过滤法，可以淘汰为数众多的野生型菌株，从而达到浓缩营养缺陷型的目的。,匀何喉

5、作均锥南础驼课喇行柬碾耿膊收瓮挣倒策整粪磐根剂噶麻氰妒徊吐营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,淘汰野生菌的方法,抗生素法是利用野生型菌株能在MM中生长，而缺陷型不能生长，于是将诱变处理液在MM中培养短时让野生型生长，处于活化阶段，而缺陷型无法生长，仍处于“休眠状态”，这时，加入一定量的抗生素，结果活化状态的野生型就被杀死，保存了缺陷型。在选择抗生素时，细菌可以用青霉素，酵母可用制霉菌素。,屿曲洼差连犁格架互羌蒜志除冶提拄兆撑匙驼蚁元浙奇劣陡撬什压诣熙寸营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,淘汰野生菌的方法,菌丝过滤法只适用于丝状真菌，其原理是在

6、基本培养基中，野生型的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型则不能。因此将诱变处理后的孢子在基本培养基中培养一段时间后，再进行过滤。如此重复数次后，就可以除去大部分野生型菌株，同样达到“浓缩”营养缺陷型的目的。,堆熊削赔迹来像九拉筒匿晃贼祁帖宵堪稚喻忠资罩八魁油捷恩故噶腆句卓营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,营养缺陷型的检出方法,具体方法：影印法、点种法、夹层法、限量补充培养法 夹层培养法 限量补充培养法 影印接种法 逐个检出法,顾雄赠男冻伐捂绿弥辗莎贤昭赣珐痘秘街砷躇纂命捅饰痈侩湘台柿伺望姬营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,）影印法,影印法是将

7、诱变处理后的细胞涂布在完全培养基表面上，经培养后长出菌落，然后用一小块直径比平皿稍小的圆柱形木块复盖于灭过菌的丝绒布上作为接种工具，将长出菌落的平皿倒转过来，在丝绒上轻轻按一下，转接到另一基本培养基平板上，经培养后，比较这两个平皿长出的菌落。如果发现前一平扳上某一部位长有菌落，而在后一培养基上的相应部位却没有，就说明这是一个营养缺陷型菌落。,宾票吏唁摸弘祟顽义戍嗣溺夜约翅涪牌枕任场吝魂螟款萨泞悸窟理籍钟身营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,）夹层培养法,夹层培养法是先在培养皿上倒一层基本培养基，冷凝后加上一层含菌液的基本培养基，凝固后再浇上一薄层的基本培养基。经培养后

8、，在皿底对首先出现的菌落做标记，然后再倒上一薄层完全培养基(或补充培养基)，再培养，这时再出现的新菌落，多数即为营养缺陷型。此法缺点是，结果有时不明确，而且将缺陷型菌落从夹层中挑出并不很容易。,细汉峪得赊模冲葫药水党瘫焙漓辐濒蔽椎爽锗媳巨蚜青怕霍盐守浓管牧枫营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,）逐个检出法,逐个检出法是将经过诱变处理的细胞涂布在完全培养基平板上，待长出单个菌落后，用接种针或牙签将这些单个菌落逐个依次地分别接种到基本培养基和另一完全培养基平板上。经培养后，如果在完全培养基上长出菌落，而在基本培养基上却不长菌落，说明这是一个营养缺陷型菌株。,熔渍庭烘盯军靴

9、结舒侯十痹衅素咏端综钡健障吃填碘涡驼株陈参撬卫距荫营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,）限量补充培养法,限量补充培养法是将诱变处理后的细胞接种在含有微量(0.01以下)蛋白胨的基本培养基上。野生型菌株就会迅速生长成较大的菌落，而营养缺陷型菌株只能形成生长缓慢的微小菌落，因而可以识别检出。如果想得到某一特定缺陷型菌株，则可直接在基本培养基上加入微量的相应物质。,阴庄艾洁翔瞳赖垃杀揖侥拒钦甚观等蓑侄藤蜜够捉生猜陛滩性奈帕铺蒙涟营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,营养缺陷型菌株的应用,其在研究和实践中都有极其重要的意义。它可作为研究代谢途径和杂交、转化、转导、原生质体融合、质粒和转座因子等遗传规律所不可缺少的标记菌种；也可作为氨基酸、维生素、碱基等物质生物测定的实验菌种；在生产中，可直接用作发酵生产核苷酸、氨基酸等代谢产物的生产菌株；也可作为菌种杂交、重组育种和利用基因工程进行育种时所不可缺少的带有特定基因标记的亲本菌株。,删琳翰溃硕厂郡稗没易赠黔就嗣保奠杨司男绸灌觅滤葱谨殖乞衡碳戈氓总营养缺陷型突变体的筛选及其应用营养缺陷型突变体的筛选及其应用,