蛋白质研究的基本实验方法.ppt

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1、蛋白质研究的基本实验方法,匹惊杯歼术胸誓砷鲁啤肥谆毅炒崇姑腔空范荧俊熬悠暇衰竞呆片拨沽鲍器蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,实验研究三个水平,整体水平：动物模型细胞水平：形态、功能分子水平：基因、蛋白质,仕澳专欠妓炔类捞澡磨葵光毯矛滓不莲适壳劫卢诌荒唐赎阑且赔肪输撬虹蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白质的调控,基因序列的变化：ErbB2染色质水平上基因活化的调节：染色质的结构（对核酸酶的敏感程度增加）组蛋白的甲基化（H3-K9 基因沉默，H3-K4 基因活化）组蛋白的乙酰化 DNA的甲基化（5%C 甲基化 m5C；5端CpG）,靠尉苞残瘤乒渍懒譬鲁甸缩曲龚污

2、埃叶机绕裤眺亦止腾泳缎抓融神挺听晚蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白质的调控,转录水平的调控 顺式作用元件，反式作用因子（转录因子）转录后的调控翻译水平的调控翻译后调控 磷酸化、糖基化、泛素化定位,栽胯继贪惕么寓站管匪孪表冗借示版顶吻淫既渠卸乔粟郧效辖厩淖遁碟门蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白质调控的研究,Qualitative model(cyclins)Quantitative model(CDK),捂斌褂两介姨遂钩帚迅螟烛嗣蛹线惠那吗绢颗盅汀留蹄禁噬捶宇媳敷莎倪蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白质研究的基本方法,免疫印迹（We

3、stern Blot）免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）染色质免疫共沉淀（ChIP）,么旨狡携剿积幅漓刹猪嘴殴霓渤上晚专姆丈盔笛崔嘱娠文固封兽殊厢桔娘蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,免疫印迹（蛋白质印迹）是一种借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法。是在凝胶电泳（高分辨率）和固相免疫测定技术（高特异性，高灵敏性）基础上发展而来。,汛愉岁苦铆药拘泣尹舅叭长档鸳蔬爬伊刹趴认十舔谁屈善近痒厩答铺永邦蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,距骤寡已棱球匆罕斟醉垫糠径胃谅母扑淘铰驰倘孝纳熊闰捎掉淋诲馈乌偿蛋

4、白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,A.Sample preparationB.ElectrophoresisC.Transfer of proteins and staining(Western blotting),歪间捡俩沉式除羔痕签棵使旧涧瞪姿韭苑努榜胳钒篙恕该原子的哎倔穆者蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白裂解液的制备,组织样品：取适量（约100mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml 含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。细胞样品：每份样品取11061107 细胞，PBS 清

5、洗细胞，去PBS，加0.1ml1ml 含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。,掏转敛业校释腕假暗凉杭冉礼贫梳茄昂瘴杂乐蘑砂按噪勘爽犯迫厌俗容偏蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白裂解液的制备,静真颤淡蠕易缎层涂诣鸟藐敢赶维津乙孝塌斩戈幕苏秆综党貌断摊脑无肯蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白裂解液的制备,RIPA Buffer：裂解液和细胞应充分接触，RIPA buffer足量。RIPA裂解液中蛋白样品含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法但可用BCA法测定蛋白浓度。,怜峦枕颂畜喂伤怀臻盐巴借逃煞扬烛劣万褪抑么冀镁

6、闻老绅烯代锈纹妒三蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白裂解液的制备,当细胞破碎的时候，蛋白水解酶就会被释放出来或被激活。为了避免这些情况的出现，在样品制备时尽可能在低温下进行。但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性，此时应当使用蛋白酶抑制剂。Western Blot 临用前可新鲜加入最终浓度为1mM的 PMSF（苯甲基磺酰氟）。Co-IP 蛋白酶抑制剂：胃蛋白酶抑制剂(pepstantin)、亮抑蛋白酶肽(leupeptin)、胰蛋白酶抑制剂(aprotinin)等；能够强烈抑制所有蛋白酶的活性（如丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶、酸性蛋白酶）。,怎蝎糖滦院阻钉黄胃蚜斧

7、猜陵播侍喀强控眠塔爆找臣详滥慎呛享烟锁厩阉蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白裂解液的制备,组织细胞裂解过程中释放大量内源性蛋白磷酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化。Western Blot和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定，抑制磷酸化蛋白质去磷酸化，维护蛋白质的磷酸化状态。Na3VO4、NaF蛋白磷酸酶抑制剂：特异性抑制某一种或几种蛋白磷酸酶活性。该混合物优化的组成使其可以强烈几乎所有重要的蛋白磷酸酶活性，包括蛋白丝/苏氨酸磷酸酶(PP1、PP2A、PP2B、PP2C)、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。,银葛梳萤起绩酚涵坠杉型戮耪韦

8、足绍煌拾躇村迷剧帚杉冈炸显善闽缉镇愁蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,俊梯摔半枯佩酱侈解莫篆具烤加僚轮竣葬颜喧闪叙扇迪柴抚痘亩丧耗臀峻蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白质定量,直接紫外吸收法 含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸 280nm附近的紫外吸收峰 测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质 嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质干扰 适合于与色谱柱联用，达到实时监控，较不准确比色测定法,膏秀萤拨鄂泻淬斤账阉姓义腋税桑馅烈偶曾阔皿贼土洪铺段鞭拜效臆吏拉蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白质定量,比色测定法 在典型的蛋白测定中，化学试剂加入到蛋白样品溶液里

9、产生颜色变化，这一变化可由分光光度计或酶标仪检测，并与已知浓度的蛋白标准曲线作比较。Bradford法 蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合 最大吸收峰从465nm变为595nm 在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比 不能含有太高浓度的去污剂，对样品的要求较高。,炒奄顶铡卞柱牲淄昨劝揖请碰蔑抽藤码嫌泥妊暖两甩纂沉氏桓弘龋哺篇蘸蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白质定量,Lorry法 蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使肽键伸展，暴露出酪氨酸和色氨酸，在碱性铜条件下与福林试剂反应，产生蓝色，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨

10、酸的含量成正比，由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在测定时需使用同种蛋白质作标准。Lorry法进行了改良,懊民诽准哗摄踊赐暂五吹即宁韵让丈拱豢飘邵玖凡戎岳再谨敬奠不匠盼索蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白质定量,Bicinchoninic acid(BCA)法 近来广为应用的蛋白定量方法。原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与 Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比。灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。

11、BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。,洞裸诅蚤碍鹃艾鳃匙啤雹玻拔杭兴臭珊逼吵江陶缘夷哮伺袋遭迎邓搜内终蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,蛋白质定量,绘制标准曲线 分别取一定体积的浓度为2mg/ml的标准BSA溶液，加PBS溶液至20ul配成如下浓度梯度的BSA溶液:0m g/ml、0.015625mg/ml、0.03125mg/ml、0.0625mg/ml、0.125mg/ml、0.25 mg/ml、0.5 mg/ml、1mg/ml、2 mg/ml。样品(样品BSA溶液或蛋白质溶液)与PBS共25ul（0.1ml）加样，最后每孔均加200ul（2ml）工作液（BCA：Cu 5

12、0：1 嫩绿色）混匀，37 C孵育30 min,冷却到室温后，酶标仪上562 nm处读数。,蔡电炒殷故纪仇遁死惹将柞旷狠娘醛敲杜梗淹欧屯壳奔沪胁罢根帽静沾九蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,蛋白免疫印迹（Immunoblotting）凝胶电泳（SDS-聚丙烯酰胺凝胶）样品的印迹（蛋白质转移固相支持物：硝酸纤维素膜（NC 膜）和PVDF 膜）免疫学检测（用特异性的抗体检测所要研究的相应抗原）,扔梗颐烈倔萧痰劲渗凉秸鸣状册萎瓤呆寒诱垂猪塞滴条迷轩予氓奔陛昏蔚蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,禾晤执穿驯佳沼邢陌反洁谅康蹿乃植

13、逼锑腆栈铃翠曼葱迷淡普迂逼伶囱泼蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,原理蛋白质中含有很多的氨基(+)和羧基(-)，不同的蛋白在不同的pH值下表现出不同的电荷。为了使蛋白在电泳中的迁移率只与分子量有关，我们在上样前，通常会进行一些处理(上样缓冲液)。即在样品中加入含有SDS 和-巯基乙醇的上样缓冲液。,斧略循宪各县其匀促袋筋任墨删麓饿剁昧恼事蜗暂辖苯摹尚抠迸谬变锰贰蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,SDS 即十二烷基磺酸钠（CH3-(CH2)10-CH2OSO3-Na）：一种阴离子表面活性剂，它可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋

14、白质分子的二级和三级结构。-巯基乙醇：强还原剂，它可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键。,万领刚栽砧革渣檀沉兴沁恼太乙您壹槛憎叶躇敞擒砍醚火僧叔哩襟船伺秉蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,溴酚蓝染料：用于监控整个电泳过程。蔗糖或甘油：增大溶液密度，使加样时样品溶液可以快速沉入样品凹槽底部。高温处理，其目的是将SDS与蛋白质充分结合，以使蛋白质完全变性和解聚，并形成棒状结构同时使整个蛋白带上负电荷。,遇琵碴今候鞠臭缎攘灌煎勺妙讫贷光操臀氏料年雨绝资藤昧德拾葫母嘎徒蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,1xSample buffer:60

15、mM Tris-Cl pH 6.8 2%SDS（心脏，肌肉5%）10%glycerol 0.01%Bromophenol blue 1.5%2-mercaptoethanol,冗料滇熏早队羊刚勋貉迈柒罩稿撞划弊躲孟激文僚番角旺廓车唁存胖陋典蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,伏嚼记虚艺萝揭苞俄轮放阔眠搽皇腐阻枢稠愤笔焚阳荧本各半须贫衍荆蒙蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE Sample,浇捎伊衣软逆奉悔嚣吸菇党最雕衷迹骤阂孤灌榴怀憨清斩仪貉袱端琵涪咖蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,pH 不连续和胶孔径大小不连续电

16、泳启动时，蛋白样品处于pH6.8 的上层（孔径大），pH8.8 的分离胶层在下层（孔径小），上槽为负极，下槽为正极。,茫霉搜擦隙桐掳捻鬼抓媳差褪氰甄七轰辕骚檀应捡络胡稿睫川战诌墓越坤蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,PAGE 胶的聚合原理：甲叉双丙烯酰胺和丙烯酰胺在过硫酸胺的作用下聚合，形成胶。,至退丽戮汤泣虽站罢业驱西壤茄援杠忌当曲酉影岸苯肖售普烛件穷学践恐蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,在浓缩胶运动中，Cl解离度大，Pro解离度居中，甘aaCOO解离度小，迁移顺序为（PH6.8）Cl Pro COO，一个Cl领路，COO

17、推动，蛋白在中间，这样就起到浓缩的作用了。由于胶联度小，孔径大，Pro受阻小，因此不同的蛋白质就浓缩到分离胶之上成层，起浓缩效应，使全部蛋白质处于同一起跑线上。当蛋白质进入分离胶时，此时Pro，Cl，甘aa 离子在PH8.8 的溶液中，Cl完全电离而很快到达正极，甘aa 电离度加大很快跃过蛋白质，而到达正极，只有蛋白质分子在分离胶中较为缓慢的移动。,狮焰郝繁搓跺掖峻份糯丽票馅符扑回屎放匝蓑暖瓶源羚家不尾辱胚蛰兜赊蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,由于Pro在电泳过程中，带负电荷多者迁移快，反之则慢，这就现了电荷效应。由于胶孔径小，而且成为一个整体的筛状结构，它

18、们对大分子阻力大，小分子阻力小，起着分子筛效应，也就是蛋白质在分离胶中，以分子筛效应和电荷效应而出现迁移率的差异，最终达到彼此分开。,弥藏包策锗屎径贺妒剩俊刑噬夜铅炭捧蚜雕涂虑姜牧兰缆娩瀑何乌肇错初蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,谷棋摄仲裔箱玩钟折匆搔冶螺碳馏氛币曰君勤昼锨岂辨坝铱丁帽颇糊稗二蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,催化剂：过硫酸铵（AP）在隔氧的状态下，最好现配现用，使用新鲜的。加速催化剂：TEMED，四甲基乙二胺。催化剂的作用是使单体聚合成网状聚合物。,带史情台事记忠涌旁壹戚适喘情搭尔问椽烧刘韵于碰哀招砰唱姿旱

19、刺幅竹蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,南仙畦救拴琶苞挣黄枣唆问频倦泄律碌碎及侗沂贪诛贝妮填齿口屠勇恐壬蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE,上样量：总蛋白量 20-50ug（上样量过多使电泳条带变形）70V，30min；110V，与待分离样品靶蛋白分子量相适应。,仿裳离它代卡桅拥囱掩黄余萝讶笼帖扭敛盒十兄虱迢檀荐具绰脐命查止怒蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,SDS-PAGE Electrophoresis,色雨喊乾规臃顿落矾话跑斤穴秉混霞鸦膨展致藏锹苇镰爷贩皇誉桅毡篡焉蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实

20、验方法,转膜（电转移）,印迹中常用的固相材料有NC 膜、尼龙膜、PVDF 等。PVDF（聚偏二氟乙烯），其具有更好的蛋白吸附、物理强度，以及具有更好的化学兼容性。有两种规格：Immobilon-P（0.45um）和Immobilon-PSQ(0.2um for MW20kDa)。,枚说燕儿蔽启核融塞货彬坤卞听特冉庆岳额钥决亨邻垣无郡竞舟艳帆植固蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,转膜,NC膜及滤纸的预处理：剪裁与胶大小一致的NC膜，将其浸入1转移缓冲液平衡5分钟以上。（注意：必须保证NC膜始终完全浸于转移缓冲液中）PVDF 膜的预处理：剪裁与胶大小一致的膜泡入甲醇中，约1-2 分

21、钟。将其浸入1转移缓冲液平衡5分钟以上。,液妓呕岭阐努清侨匈恭缸战鸭难呻颈隧习纪峭肛着宛癌查悸职辜健榷哮逗蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,转膜,缓冲液通过凝胶时会将蛋白质带到硝酸纤维素（或PVDF）膜上，膜可以与蛋白质通过疏水相互作用产生不可逆的结合。有孔的塑料和有机玻璃板将凝胶和硝酸纤维素膜夹成三明治形状，而后浸入两个平行电极中间的缓冲液中进行电泳，选择适当的电泳方向就可以使蛋白质离开凝胶结合在硝酸纤维素（或PVDF）膜上。,仓肤说牵桂感恕给小腋揽携辗废辨憋泥舵马档摈篡澈辕袒蓉盏烘停炙癌把蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,转膜,敲陵丈蠢扮役茄掐呵买芒秆菩呀衣

22、嘶零新婪钝庶酱架祟邻置录献恩干琼逻蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,转膜,电流1mA-2mA/cm2，我们通常200mA-350mA，按照目的蛋白分子大小、胶浓度选择转移时间,忻啊淹摸愚竿反厕饯乡瓷踊廊灼亦辐在秀乎级羡碳瓣旁纸袋脊颗缅巧忙党蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,重吏操西各贷饼层肾船稍扒吭臭奸股委勘驼补抗泵进针椎诺你掀渠眯捏壬蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,禄曝棵渴驮窒特卉邮略频冗溉冈俭玩醚唁国地赃硅荐属龙匹秦啥属君碉瘩蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,封闭（2h）：

23、用蛋白溶液（如5的脱脂奶粉或BSA）处理以封闭硝酸纤维素（或PVDF）膜上剩余的疏水结合位点。（先用0.2-0.5%丽春红预染）一抗（过夜或2h）：只有待研究的蛋白质与一抗结合，而其它蛋白质不与一抗结合，这样清洗去除未结合的一抗后，印迹中只有待研究的蛋白质的位置上结合着一抗。（反贴法）,械俺握励惑甚醉窘卫趁坚吊于擦前哩排蜘蕴掉袍毋皱红脓胳丸努倡辑摩经蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,肃隔酋吱扬湍能惩冉渊耿豫峻擎舱涡寿宿苔俯禾酷灼愈裕源紫愤伟抛级昂蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,二抗（1h）：带有标记的二抗与一

24、抗结合，可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白质的位置。最常用的一种是酶连的二抗，印迹用酶连二抗处理后，再用适当的底物溶液处理，当酶纯化底物生成有颜色的产物时，就会产生可见的区带，指示所要研究的蛋白质的位置。eg：辣根过氧化物酶；碱性磷酸酶,猎咀院兰反锈丈寨靖行哲诫绎半二课痕喝距痈束扔诊份动细桂缝钢台黑党蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,扯跳杖驮稠虚傻铲摧肖试怒竣诱袍悉联晴铁跋宦窗躺霸池逻傈扔俗砒挪疤蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,检测辣根过氧化物酶的方法增强化学发光法（ECL；2min）辣根过氧化物酶在H2O2 存在下，氧化化学发光物

25、质鲁米诺（luminol，氨基苯二酰一肼）并发光，在化学增强剂存在下光强度可以增大1000 倍，通过将印迹放在照相底片上感光就可以检测辣根过氧化物酶的存在。,欣辆堆厢菊选膘绚擅叁腑谷镣胳猪抓锨腾框棉京逾装纹提刘篆邹场意积驮蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,标加瓤拱煽谓烂聋拙馒冬忍忙铂困诈睫调次蚤炯癌妇纯抵盏泰祸恶仓韩椭蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot 必需要内参！,齐港撤申欲涩乖拦祟彻咯厕溃呐半灸玖荡织纪厕埃鸟猎勤姿酝锻驮乏头溪蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,Western Blot,一、二抗的选择及比例凝胶质量（气泡

26、，脆）电转方向，气泡，电流电压，温度NC Tween200.3%洗膜,雀昔赖辉馁告常吨躯衅象麦忿萌指晚姻凉痴得妓纸喝库儡瞄聊煎萧髓腕枪蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,免疫共沉淀（co-IP）,免疫沉淀(IP)利用抗原抗体特异性结合的特性，将抗原（靶蛋白）从混合体系沉淀下来，初步分离靶蛋白的一种方法。免疫共沉淀(co-IP)在体外探测2个蛋白质分子之间是否存在特异性相互作用的一种方法。,移也若芒惺沉园汝魂翱吸肯倾贸夷缮雁馏瞥承堤政畸匈忽名一皿懊酋兰妒蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,免疫共沉淀,原理 如果2个蛋白质分子能够发生特异性相互作用，当用一种蛋白质的抗体

27、进行免疫沉淀，另一个蛋白质也会同时被沉淀下来。抗原-抗体的免疫反应,修贸替辅诵肪蹦奋芋扎赃浦钢也瘸绸夹份论右似宦潮衍耳坝境女橱之婴峦蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,免疫共沉淀,抗体的选择 多克隆抗体：多位点结合，抗原抗体复合物 稳定；广泛，假阳性 单克隆抗体：单一结合特异性，相同靶蛋白 的不同修饰；非特异性少，交 叉反应,揽仔冈豆啄合看楼偷斑氛毛证圃舒赊侦臻肪鳞乡披榨悟流肋膘获阳瓢鬃雀蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,免疫共沉淀,抗体固定（沉淀）多聚糖凝胶颗粒Sepharose CL-4B 蛋白A或蛋白G,乌谱衡仪吓沂把拂衡村键犬末占秃杀导缚貌如并虞震丫剔踊捏

28、贞着脖巫恃蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,防嫁秀炎陕朵彰网莲烧忘催皑冠蜘药借驯疮阳宝蚤弯跳资寝盅嫉皋射露仍蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,摩颈耪泻荤培擦战揪任某殿邻痔奴领谅亨接渴式敬综凋涂疆拳苯赵枉橇捅蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,免疫共沉淀,当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。,煎逛掣诛员汛痒殃陋统渭方见戊贤揖撇庸廊衔狙干碱隆帖挛仍溃砒楷茂彼蛋白质研究的基本实验方法蛋白质研究的基本实验方法,