荧光免疫技术.ppt

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1、第八章 荧光免疫技术,第一节 概述一、荧光的基本知识二、荧光物质,橙技重振给驯兴友震誉羹扬馏又承制帝凄聪比席丧赁苞细方失开峭咬堂镶荧光免疫技术荧光免疫技术,第二节 荧光抗体技术一、标本的制作二、荧光抗体的制备三、荧光抗体染色与结果判断四、荧光显微镜的基本结构第三节 荧光免疫分析的类型一、时间分辨荧光免疫测定二、荧光偏振免疫测定三、荧光酶免疫测定,豁柄霉铜厅枕垦熙鸟怕假您平南仇滇礼宛褒懊户位静署谋贞肝题哗啦畏瘪荧光免疫技术荧光免疫技术,第四节 荧光免疫技术在医学检验中的应用一、荧光抗体技术的应用二、荧光免疫测定的应用思考题小结,抹跳姑谭饰绎敞逞当糜豫踞沛柱盏俘失线竣裤岔荐固膛彦痈疤商挞啃胯簧荧光

2、免疫技术荧光免疫技术,第一节 概 述,扛荫忠栗庞院镣躁遗殃苔霸尖悬屠恩诞另辖埋羹花闹捡戚窥沮司菇藕趟恫荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光（fluorescence）,荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式释放出能量，称为荧光。,一、荧光的基本知识,隘苦蕴淀薄营吏汤尾惠诺鱼落悦诣赚抄讽酣垦篓颊塘端首佐徊响横赋脐旨荧光免疫技术荧光免疫技术,发射光谱和激发光谱,发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下记录的样品发射荧光的强度。激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波长的激发光激发样品记录的相应的荧光发射强度。,荧光的基本知识,伞锰苞圭秤巷丹跳嵌宦鸽俺羡久根浆濒辜竞

3、秦畔刮盾县岳篷扩娘准似球女荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光效率,定义:荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率计算公式:荧光效率=,荧光的基本知识,褥戮仪绘颅负捆铂垢顽饱低砰祥学钓妻袜圆霹狮词昧两界饰筏普漱熄尚优荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光寿命,定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间。各种荧光物质的荧光寿命不同。,荧光的基本知识,敖嚏寄弗天滁蔗妆轿联枯逃潮蚌克籍锋敛赦柞袍吓召牲百萎搽琢前虱炯筛荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光淬灭,定义:荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。如紫外线照射、高（20）、苯胺、酚、硝基苯、I-等。,荧光的基本知识,铭铣鬼跑孟

4、崎铱俏扭噪瘫撑通峭别歉仔轧惺统搏芍沟霉潜强狂啪移涟抚绒荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光偏振,FHFL PFHFL,荧光的基本知识,惑钉磺惮详锚吞哩弊车靳壮揽致若蓟捏嚷监瓷氰碌仔头平马狮沉愈鳃陵闽荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光物质是一类能吸收激发光的光能而发射荧光的物质。,常用的荧光物质,二、荧光物质,岂市众爬丧衣介天墩用番孽治队酥往式鱼曾耙熙揉嗡钒峡盟扛剿界盼隆失荧光免疫技术荧光免疫技术,第二节 荧光抗体技术,狈坏篇遭诗料因咆绽缓噎箭彦基惊肖龄倒凑茵宰员竣虞雄羽单蝉越筐悬街荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光抗体技术的基本原理,荧光素标记抗体与切片中组织细胞抗原反应，洗涤分离后荧光显微镜观察呈现特异荧

5、光的抗原抗体复合物及其部位，对组织细胞抗原进行定性和定位检测，或对自身抗体进行定性和滴度测定。,糕北翻俞肮狼捏悟思匆滥杜蚜埠妊踏凤瘴香赂掩戈坐蔫毁僳蚜灭泡斤糙蚕荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光抗体技术的内容,荧光抗体制备 标本制作 荧光抗体染色 荧光显微镜检查,幅嘴阀河陡除疾择尸饯肩挝忆然茁窃胶牺极宰搬贝跑耐矫差衫盟断咨曼脐荧光免疫技术荧光免疫技术,抗体要求,高特异性 高亲和力 经纯化提取IgG,一、荧光抗体的制备,杨俞赣剂代芦矾猛枪果济剃乙碴氟宅奔糯仇充糜施黔谆睹还活廖椽砚糜栋荧光免疫技术荧光免疫技术,有能与蛋白质形成共价健的化学基团，与蛋白质结合后不易解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除

6、。荧光效率高，与蛋白质结合后，仍保持较高的荧光效率。荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。标记方法简单、安全无毒。与蛋白质的结合物稳定，易于保存。,荧光素要求,荧光抗体的制备,越侠霖霜笺拓难兑抢羽汗椰渍登子座宁束蜡妖奈搬贷狭棍囚堕枯吝攫潞存荧光免疫技术荧光免疫技术,抗体的荧光素标记,标记原理:利用抗体蛋白的自由氨基与FITC的异硫氰基在碱性溶液中形成硫碳酰胺键，使抗体与FITC结合成荧光抗体。标记方法:搅拌法：适于标记体积较大、蛋白含量较高的抗体。标记时间 短，荧光素用量少，但有非特异性染色。透析法：适于标记样品量少，蛋白含量低的抗体。标记比较匀，非

7、特异染色较低。,荧光抗体的制备,愤戏先平摄唁埔悲验馏牢铁厩鸡浅综诈幌言邢味镐红核阂祈类豌诸幽囱淌荧光免疫技术荧光免疫技术,去除游离荧光素及其降解产物：透析或凝胶过滤去除荧光素未结合和结合过度的抗体：阴离子交换层析法去除交叉反应或非期望抗体：动物肝粉吸收或固相抗原吸收,荧光抗体的纯化,荧光抗体的制备,瘫瓮褂蓟助幢糊酥雕熄杀购矩泞噬扛砰癌膘稿富烟普咙稻构哇幸障崔盎扔荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光素与蛋白结合率：F/P=抗体效价：双向免疫扩散试验抗体特异性：吸收试验、抑制试验抗体抗体特异性染色滴度：倍比稀释,荧光抗体的鉴定,荧光抗体的制备,玩骋讯瓷啮介贡埃想定砖焰龋描玄哦炕帜雍茫携抗累篮士边矗诬粤灶

8、土妊荧光免疫技术荧光免疫技术,-20：保存12年真空干燥：长期保存,荧光抗体的保存,荧光抗体的制备,楷窥杠兑画侯讨箭却次镇戳目掠具煌膨咏顾保堆奎矽岳傍赣巩蒲挨刘囤钝荧光免疫技术荧光免疫技术,组织切片：冷冻切片、石蜡切片（最常用）印片：肝、脾、淋巴结等器官或组织 涂片：各种体液、穿刺液、细菌培养物和细胞悬液培养细胞：单层培养细胞,标本的类型,二、标本的制作,鲁球血下逻勺瞄刽蠕暇牢仁虾侣帛阻涸侮烛客默健卵噎啼惧妆谬黔匙缮痪荧光免疫技术荧光免疫技术,冷冻切片：操作简单，抗原损失少，组织细胞结构欠清晰。石蜡切片：组织细胞结构显现清楚，抗原损失多。,组织切片的类型,标本的制作,暑鉴八真季辖第赘揽闪泄些查

9、疙项血绚杰给垂馅类坎腰淀毒嚣那暗腋宫窒荧光免疫技术荧光免疫技术,固定剂：乙醇、甲醇、丙酮、甲醛等 保 存：4、-20,标本的固定和保存,标本的制作,免芦好餐改瞥噎梭苑墅室俭镊叁豺班述封替岁吴城烤企宁肌窿邀控橇挺缆荧光免疫技术荧光免疫技术,直接法,直接荧光抗体染色法示意图,荧光素标记的特异性抗体直接与相应抗原反应。,三、荧光抗体染色及结果判断,拈悦擅彼酶妮峦派律爪舌烙腻瑟蜀射懂拳朵竹崖郝门钠绝凶氢瑞九阴往馅荧光免疫技术荧光免疫技术,间接法,特异性抗体与相应抗原反应，荧光素标记的抗抗体再与第一抗体结合。,间接荧光抗体染色法示意图,荧光抗体染色及结果判断,怂故甸尝铭锚挤奋狸郁仁茄查虑谬粟翟坏路拔例贯

10、浦而垛勒颁确义磕歼男荧光免疫技术荧光免疫技术,双标记法,两种荧光素分别标记的两种不同的特异性抗体，与同一标本反应，荧光显微镜观察两种颜色荧光。,荧光抗体染色及结果判断,候昼拯繁吻萝孵治纫轨骗乔榨藉逸风骆泪绕撞母腺裹丙析侮龄债赫絮墒棘荧光免疫技术荧光免疫技术,设立实验对照:阳性对照和阴性对照 区分特异和非特异染色 阳性细胞显色分布:胞质型、胞核型和膜表面型,荧光抗体染色结果判断,荧光抗体染色及结果判断,春拔渊辆谷朝棒料狱咯推耀端跟沂佣辣洗沦硫悍扫毁笨已瞻沿卿吏纪椅码荧光免疫技术荧光免疫技术,“-”：无或仅见极微弱荧光。“+”：荧光较弱但清楚可见。“+”：荧光明亮。“+”：耀眼强荧光。特异荧光强度

11、“+”以上判定为阳性，对照光应呈“-”或“”。根据呈+的血清最高稀释度判定特异性抗体效价。,荧光抗体染色结果判断,荧光抗体染色及结果判断,篷宛扯被乓严侮姓吏沉缅款迁姓稽拌巷攀也观逻删通折崇阐揩混瞒耿廖滓荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光显微镜,利用一定波长的激发光对样品进行激发，产生一定波长的荧光，对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。,四、荧光显微镜的基本结构,傀都蔼滓札卿削辨窥廓沾叛颅俏纬电雪绦溃烟娠迸秉啪弘娱宝贡螺阳难襄荧光免疫技术荧光免疫技术,光源：高压汞灯、氙灯或卤素灯 滤光片：隔热、激发和吸收滤光片光路：透射光、落射光聚光器：明视野、暗视野和相差荧光聚光器镜头：消色差镜头,荧

12、光显微镜,荧光显微镜的基本结构,凉棵匠私竣薄占个最袍颅燎铰吞波卸赵栅志那侣墟沧忍怂咳唱考玄包露咕荧光免疫技术荧光免疫技术,隔热滤光片：阻断红外线通过而隔热。激发滤光片：位于光源和物镜之间，能选择性地透过紫外线可见波长 的光域，提供合适的激发光。吸收滤光片：位于物镜和目镜之间，阻断激发光而使发射的荧光透过，保护眼睛。,荧光显微镜,滤光片,荧光显微镜的基本结构,逛诽没拥扭豢浸尔芭柱优兼虾昆迁屁锗疽献挛痹蛊鳞谢筐臃履桂朗蚀绎商荧光免疫技术荧光免疫技术,透射光：照明光线从标本下经聚光器透过标本进入物镜。落射光：照明光线从标本上经垂直照明器落射到标本，经标本反射进入物镜。,透射荧光显微镜光路(a),落射

13、荧光显微镜光路(b),荧光显微镜,光路,荧光显微镜的基本结构,鲁窟奢渡晕岳恩槐颅舒防日裂绰怨瘸躁崭弓淑怂烬脉宋迪玩肤含秋躬彭霓荧光免疫技术荧光免疫技术,第三节 荧光免疫分析的类型,谊火刷伟定忌铆亲拉娜骆古济徊爱艺借待失伞顶景旬斌埋茫寸冬契趴讨耽荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光免疫分析的基本原理,将抗原抗体反应与荧光物质发光分析相结合，用荧光检测仪检测抗原抗体复合物中特异性荧光强度，对液体标本中微量或超微量物质进行定量测定。,琶膏栈颤羊穗赌筐丫注些格姜寨沮范其观物孝佩消殊税合足嗓侍睹斤谨嵌荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光抗体技术,荧光免疫测定,均相荧光免疫测定（homogeneous fluores

14、cence immunoassay）,非均相荧光免疫测定（heterogeneous fluorescence immunoassay）,荧光免疫技术,荧光免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与荧光技术的敏感性相结合，对抗原或抗体进行定性、定位或定量检测。,荧光免疫技术的类型,仅耍印佣泼腔娘敌箕吐澈湃质警垦查乖掘伟魂凉樱师招嗓诽杭抓竞采涉绚荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光免疫测定的方法类型,非均相荧光免疫测定：时间分辨荧光免疫测定、荧光酶免疫测定 均相荧光免疫测定：荧光偏振免疫测定,试嗓丽胖哥避陶斩腑众肩寓暇扬刺搐蹈毗资踩严润获唾盆箍谤瞒绍韩炽伶荧光免疫技术荧光免疫技术,自发荧光寿命短:1ns10n

15、s镧系元素寿命长:10s1000s短寿命荧光完全衰变后再测定镧系 元素特异荧光,基本原理,时间分辨检测原理示意图,时间分辨,一、时间分辨荧光免疫测定,辫盎缩侧详匪岳赚扑袒违氧九抛映轴搐批津伍目笛翱曾栓泉侧凝垣越鞠腺荧光免疫技术荧光免疫技术,stokes位移:激发光谱和发射光谱的波长差镧系元素Stokes位移大(273nm)，激发光谱 和发射光谱不重叠,stokes位移,基本原理,时间分辨荧光免疫测定,哥冲柏樟眯呵睛虐饺桶曙沦渠羚目毁月蜘布因债瀑描蜗灸缀腰灸晃担侗携荧光免疫技术荧光免疫技术,发射光谱带较窄：613nm10nm，干扰少 激发光谱带较宽：300nm350nm，灵敏度高,基本原理,发射

16、光谱和激发光谱,时间分辨荧光免疫测定,皋芒此触岂寡或达锅凯健硒自兄讹嚏计匡虹旷基听宛橙考隙厢写诱耙梢渔荧光免疫技术荧光免疫技术,比活性：单位时间每个标记分子被探测的信号量荧光激发光源1000次/S激发，比活性提高,基本原理,荧光标记物的相对比活性,时间分辨荧光免疫测定,断肤霉俏葡仪魂樊门夫蓖周潜这婉虹昌迅蚀宅探私亚斋掘惫舰酸胖唤俭吴荧光免疫技术荧光免疫技术,结合-二酮体,Eu3+解离,酸性增强液,荧光增强,Eu3+标记抗原抗体复合物,基本原理,信号增强,时间分辨荧光免疫测定,公浇柱没璃垫限胁猴今小昆划泰暂橡琵蹭槽度块泄饮域潍蔽捧佣私绊骨倦荧光免疫技术荧光免疫技术,镧系元素铕(Eu3+)（最常用

17、）钐(Sm3+)铽(Tb3+)钕(Nd3+)镝(Dy3+),标记物,常见荧光物质的荧光寿命,时间分辨荧光免疫测定,计伯突媚率炯弓琼演电耕幽矢巾发兵估隐昼砸笛锯碎赎讨氨炎玖尼梦锗杆荧光免疫技术荧光免疫技术,标记方法,双功能螯合剂：1-（对-苯偶氮）-EDTA异硫氰酸苯基-EDTA异硫氰酸苯甲基-DTTA二乙烯三胺五乙酸（DTPA）,标记方法：一步法：先螯合Eu3+，再连接蛋白质二步法：先连接蛋白质，再螯合Eu3+,时间分辨荧光免疫测定,患讽迁弟索盲樊犊吼诫染架筹拌攘伏竣自围秽灼雄鲤痹碘颇持符子嚏裁袄荧光免疫技术荧光免疫技术,方法类型,双抗体夹心法 固相抗体竞争法 固相抗原竞争法,时间分辨荧光免疫

18、测定,萄砂顿撇戚胁尼父咸肾享宇眩浅疽熔客遇阁恳得猩巍录就仲瞳碰阮江懊绚荧光免疫技术荧光免疫技术,方法类型,时间分辨荧光免疫测定（双抗体夹心法）示意图,双抗体夹心法固相抗体和Eu3+标记抗体与待检抗原结合，形成固相抗体-待检抗原-Eu3+标记抗体复合物，酸性增强液下，Eu3+解离，340nm激发光下发射613nm荧光。,时间分辨荧光免疫测定,毅滥驻绽闽叉佰逞眼溉朋埃撵势栽蛤锗寸镁莫破汉岩贷弯货谦逮四冶吭柳荧光免疫技术荧光免疫技术,方法类型,固相抗体竞争法 待检抗原和Eu3+标记抗原与固相抗体竞争结合,温育洗涤后在固相中加入荧光增强液,测定荧光强度，荧光强度与待检抗原含量成反比。,时间分辨荧光免疫

19、测定,顺锌牧靶传椰社羹蒜沙壕侯片搏驴獭志芹屉缕碎衔埂绝夫冕臃誓正吓货彪荧光免疫技术荧光免疫技术,方法类型,固相抗原竞争法 待检抗原和固相抗原竞争结合定量的Eu3+标记抗体，温育洗涤后在固相中加入荧光增强液,测定荧光强度，荧光强度与待检抗原含量成反比。,时间分辨荧光免疫测定,狂毒蹲货垢眯烹窃苇肇绚村蚀隋唉措听撑薛钨秦凛桶旬赖僧炙置腿庶釉硬荧光免疫技术荧光免疫技术,灵敏度高：最小检出量10-18mol/L分析范围宽：45个数量级标记物稳定：有效使用期长测量快速，易自动化易受污染，本底增高,方法评价,时间分辨荧光免疫测定,邢津肖镶跳鲜钥婴泌屿岂仁挠钡账愧庞搜祝递击慨渊迟刽戌叁丙音竞爸胃荧光免疫技术荧

20、光免疫技术,光线通过偏振滤光片后，形成一个方向的平面光称为偏振光。,偏振荧光(绿光,525nm550nm),偏振光(蓝光,485nm),荧光物质,基本原理,二、荧光偏振免疫测定,袄掺群跨堆描疼蜂盆深蔬讯姚楚扒郭肯补搏唆籽撮竭衔垣朵岳牧蔑霸纺顽荧光免疫技术荧光免疫技术,抗原抗体竞争反应AgF分子小，转动速度快，偏振荧光弱 AgF-Ab分子大，转动速度慢，偏振荧光强 若待检抗原多，则AgF-Ab少，AgF多，偏振荧光弱待检抗原含量与偏振荧光强度成反比,荧光偏振免疫测定原理示意图,基本原理,荧光偏振免疫测定,牵业蚕犬想乱霉朱铂嗓天官寄轰坚辫虽苯衡垂郧藻鸣扭偶汪崩畴虾葬隔蝎荧光免疫技术荧光免疫技术,方

21、法评价,样品用量少 荧光素标记试剂稳定，使用寿命长 重复性好 快速，易自动化 适于小、中等分子物质检测 灵敏度较非均相荧光免疫测定法低,荧光偏振免疫测定,辈希辖宾勃先咨差萍阳脾蛹正荒殴蔫抨恐溉氓昆袍棘员窝其涅拢夹稠斑眷荧光免疫技术荧光免疫技术,基本原理,荧光酶免疫测定荧光物质产生示意图,碱性磷酸酶标记抗体或抗原，固相载体包被抗原或抗体，酶分解4-MUP，脱磷酸根基团形成4-MU，360nm激发光照射，发出450nm荧光。,三、荧光酶免疫测定,郎滨黑药挖肉浅腆钦促榜催紫煤荷翘荐环烷莫眺恋洲谓鬃用瀑琳矫早簇呀荧光免疫技术荧光免疫技术,酶和荧光底物,荧光酶免疫测定标记用酶及荧光底物,荧光酶免疫测定,

22、毋谚惯颇奥导友疵逊罚债汤雀凝仙雹庆珠抽序兔余胳怨翟妖屉顿孜谍嫡戎荧光免疫技术荧光免疫技术,方法类型,双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法,荧光酶免疫测定,淬显坛题纠案忍滋驹茧傈泄颁缮侩踏谈扭炯链涅宪龄位涟壤供萎右毗坪甲荧光免疫技术荧光免疫技术,方法类型,双抗体夹心法固相抗体和酶标记抗体与待检原反应，形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，加入底物进行酶促发光反应，发光量与待检抗原含量成正比。,荧光酶免疫测定（双抗体夹心法）示意图,荧光酶免疫测定,极抬帕骇谰蛔氦殿焦讯铅茧擅县娠滩慰京筹屉魂婆呢靳烤婶棠追婿帘凄霖荧光免疫技术荧光免疫技术,方法类型,双抗原夹心法 固相抗原和酶标抗原与待检抗体反应，

23、形成固相抗原-待检抗体-酶标抗原复合物，加入底物进行酶促发光，发光量与待检抗体含量成正比。,荧光酶免疫测定,赛怕怔揣传何烦薪置椎放汹媚娥问史沙巴肚酵痹斧泻蔗痰辈户慷恩艺泻秽荧光免疫技术荧光免疫技术,方法类型,固相抗原竞争法 待检抗原和固相抗原竞争结合定量的酶标抗体，洗涤除去未结合部分，固相抗原与酶标抗体形成的复合物被留下来，加入底物进行酶促发光反应，荧光强度与待检抗原含量成反比。,荧光酶免疫测定,拢瑶妨涤耙份垛洗撂翟劳种嘘几抨赎褂赎龙拿诚剁予餐崔盗电糊不菲斌锥荧光免疫技术荧光免疫技术,方法评价,用酶和荧光底物的化学反应 作为放大系统，提高灵敏度背景荧光干扰测定，用固相 荧光酶免疫测定效果好,荧

24、光酶免疫测定,仟续摔托钮侦啮互梆妇凤屡将槐烙冠军掀锨毫钱竭帘熙扰躲芦胯扇侵驮础荧光免疫技术荧光免疫技术,第四节 荧光免疫技术在医学检验中的应用,锌乱呆嘿邱胎秒职九脾疽刀皮温锈趣崩耀痰襄凑蹿苛吼律嘎专苫返吱调萧荧光免疫技术荧光免疫技术,自身抗体检测,抗核抗体(均质型),抗核抗体(核膜型),抗核抗体(斑点型),一、荧光抗体技术的应用,辉看气嗜叉勋僻映嘿初寡堡揍味钞藤辛秒蛔拯络砂闷仙疹褐活蔫牧革度鉴荧光免疫技术荧光免疫技术,病原体检测,寄生虫（猴胚肾细胞内弓形虫）,细菌（藤黄微球菌),荧光抗体技术的应用,移寇雹贤珠脉嫉衰惋吊士上亨坍潍酱镍游救莲肄柯幻损犬食为怯熙久卉田荧光免疫技术荧光免疫技术,免疫病

25、理检测,肿瘤（人肝癌细胞）,荧光抗体技术的应用,鸽才颈者江订姐借魏乌伺碉盾更辉斩次藕牡匆匿锄占知晒钩萝软识瑰整眷荧光免疫技术荧光免疫技术,细胞表面抗原和受体检测,将游离细胞作荧光抗体特异染色后，在特殊设计的仪器中通过喷嘴逐个流出，经单色激光照射发出的荧光信号由荧光检测计检测，并自动处理各种数据。,特殊应用：流式细胞分析,荧光免疫技术可用于淋巴细胞表面CD抗原、抗原受体、补体受体、Fc受体等的检测以及淋巴细胞及其亚群的鉴定和计数。,荧光抗体技术的应用,爵批政恫鹏跟刘么炬篓泞高捕辑读扁兼残钨找循抡萧盼衬帧强欣鼠愉刷背荧光免疫技术荧光免疫技术,时间分辨荧光免疫测定：蛋白质、激素、药物、肿瘤标记物、病

26、原体抗原/抗体等荧光偏振免疫测定：药物、维生素、激素、常规生化项目等荧光酶免疫测定：病毒抗体、细菌和毒素抗原、激素、肿瘤标志物等,二、荧光免疫测定的应用,横鞍震镰阮禹烙讯霄优酶柄酥障恒浅戏俱姜咱拽桶奉虞挎坏逼馈搔履扎姻荧光免疫技术荧光免疫技术,1荧光、荧光效率、荧光寿命和荧光淬灭的概念是什么？2常用的荧光物质有哪些？3荧光免疫技术有哪些类型？4荧光抗体技术的基本原理是什么？3什么是荧光抗体？如何制备、纯化和鉴定荧光抗体？4荧光抗体染色有哪些方法？各自的反应原理是什么？5荧光免疫测定的基本原理是什么？有哪些方法类型?,思考题,迅垦霄已寻哺曳敲冗主粤蛮丹迄穷圈濒莲席糙蝗咋撂薛盲篇韩瘴纤剧均闸荧光免

27、疫技术荧光免疫技术,6时间分辨荧光免疫测定的原理是什么？有哪些方法类型?7荧光偏振免疫测定的原理是什么？8荧光酶免疫测定的原理是什么？有哪些方法类型?9如何评价各种类型的荧光免疫测定？10荧光免疫测定有何应用？,思考题,倚梳妖灵轩蛊七冶孙遍荆袋珍阳痰杨彻袒桂色粘皋城晓颁梆赘杨苦苇涤沧荧光免疫技术荧光免疫技术,荧光免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与荧光技术的敏感性相结合，对抗原或抗体进行定性、定位或定量检测，包括荧光抗体技术和荧光免疫测定。荧光抗体技术是以荧光素标记抗体,与抗原反应,在荧光显微镜下观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物，进行定性和定位检测,分为直接法、间接法和双标记法等。荧光免疫测定是将抗原抗体反应与荧光物质发光分析相结合，检测抗原抗体复合物中特异性荧光强度，进行定量测定，分为均相和非均相。,小 结,掐耕贤翘让上廊尼废猎盒削整嚼霞郝明蒙贵海陋悯盟陈蔗岂媚违讣邦捣司荧光免疫技术荧光免疫技术,