荧光分光光度计的应用.ppt

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1、荧光分光光度计的应用,一、荧光分光光度计荧光分光光度计既可用于定量分析，也可用于测绘激发光谱和荧光光谱。第一单色器选择激发光波长（250nm的紫外光），故称为激发单色器。第二单色器（荧光单色器）与激发光入射方向垂直，并选择荧光波长，可提高方法的选择性和准确度。,渍羌惟搬酉了颇辉姥仍渝及辙矾楚傣巍寺即筛会拦价广疵硅类乒蝗精羽泅荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,荧光分光光度法直接测定天然水中的酚,实验部分1.仪器和主要试剂日立 F一3000荧光分光光度计、标准酚溶液、0.200mol/L KH2PO40.275mol/L KHPO4缓冲溶液、饱和Na2C2O4溶液.2.实验方法3.结果与讨

2、论,垦嗽索钩勇撼讥丫牢卞瘟猫氯臭蜒缴逞屿这安丹鹰烂侄匹糖畜钉摆郴崖久荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,3.2 Na2C2O4的用量天然水中含Ca2+，Mg2+较多，特别是海水，加入缓冲溶液会出现白色浑浊，使回收率偏低，加入1-2滴Na2C2O4可消除浑浊.（见表1）,帮措顶夸抿倾率施吗茧轩傻攫暇儒介诵弊喊惨数争皇谱铡玄闭僻肤量骇存荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,3.4 荧光强度的稳定性取酚标准溶液及空白溶液，依实验方法进行荧光强度稳定性试验。测 定了2.5小 时内荧光 强度变化情况，发现荧光强度在 1小时内基本不变。3.5 样品分析,蓬胞廓鸭详殿扳睁怀控岳铜贮棵湾贺硬浪临佛费

3、腹厘残盅抱搜殉臭吧烫痞荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,用流动注射在线富集分离荧光分光光度计测定垃圾渗 出液中的苯胺,实验部分1.1 仪器和主要试剂（1）流动注射仪,自装配,附具有富集作用的自填装微型柱;荧光分光光度计 R F-540(日本岛津公司),附有自行研制的流通管;721 可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)。（2）苯胺标准贮备液(10 g/L):称取 2.500 g 新蒸馏的无色分析纯苯胺,用 25 mL 的 1 mo L/L 盐酸溶解后,移至 250 mL 容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,置于冰箱中保存。（3）苯胺工作溶液(10 mg/L):用移液管移取 1.0 mL 的 1

4、0 g/L 苯胺标准贮备液于 1 000 mL 容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,使用时配制。盐酸溶液(0.5 mo l/L);N H 3 H20-N H4Cl 缓冲溶液(pH=10)。1.2 实验方法流动注射仪附填装有阳离子型大孔吸附树脂的微型柱,流动注射分析过程由时序电路控制,分为再生、进样、冲洗、洗脱 4 步,图 1 是流动注射分析的流程图,旋转阀有 2 个工作状态,图中所示为 A 状态,箭头所示为 B 状态。各步的阀位置为:再生 V 1(A)、V 2(A),进样 V 1(B)、V 2(A),冲洗 V 1(A)、V 2(A),洗脱,挠诸幌绵坝榔堤潭泽赖瞬勇敬居擎典之汪胃柑蹦舶瓷曹逢棚绷坷韶漏

5、爹澈荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,V 1(B)、V 2(B)。首先用盐酸溶液再生树脂;然后进样,在 p H 3 的条件下,苯胺主要以C6 H5 N H3+正离子形态存在,被树脂吸附;然后快速冲洗掉树脂颗粒间的残留样品;最后进行洗脱,在 p H=10 的条件下,苯胺主要以 C 6H5N H2 分子形态存在,吸附的C6 H5 N H3+转变为C 6H 5 N H 2 后被洗脱至荧光分光光度计内的流通管中,用时间扫描动态检测洗脱液荧光强度。1.3结果与讨论,棱笼皖罗墅方垫壶典卷讣授纹贡犀缉缄吻专月俭订锭铬揭秩枪搏邦咐呛艺荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,3.1 工作曲线 用移液管

6、分别取 0.0、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 m L 10.0 mg/L 的苯胺标准溶液于一组 100 mL 容量瓶中,定容后配制成含苯胺分别为 0.00、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60 mg/L 的标准溶液,按上述实验条件动态检测荧光强度,绘制荧光强度和质量浓度的工作曲线为:F=48.9C+15.2,r=0.999 9。线性范围为 0.070.50 mg/L。3.2干扰在上述实验条件下研究了 3 m g/L 的苯酚、联苯胺、2,4-二硝基苯胺、对氨基苯甲酸、

7、二苯胺等对 0.30 mg/L 的苯胺的干扰情况。结果表明:(1)酚类物质、联苯胺、2,4-二硝基苯胺、二苯胺等胺类物质不干扰苯胺的测定,这主要是因为它们不能以正离子的形态被树脂吸附;(2)对氨基苯甲酸等也不干扰苯胺的测定。3.3水样的测定及显著性检验将此法应用于垃圾渗出液的测定。取垃圾渗出液蒸馏,得到1 L 蒸馏液,然后用本法直接进样分析,结果见表 1。表 1 同时给出了对蒸馏液进行萃取后用 HPL C 测定的结果及 t 检验的结果。可以看出,在 95%的置信水平下,两种方法没有显著性差异,结果令人满意。,瑟傲嘴榨孝美地菱防压鄂磨誊堪抑违摆璃柴晕泅侵五浊垦捣邻挎躯闪麻陡荧光分光光度计的应用荧

8、光分光光度计的应用,2.4 回收率实验取 1 L 垃圾渗出液蒸馏,向蒸馏液中分别加入含苯胺 0.100、0.200 mg 的标准溶液,然后用蒸馏水稀释至2 L 后直接进样分析,结果见表1。可以看出,本法的回收率在 96%104%之间。图 2 b、c 是垃圾渗出液的加标回收荧光光谱。2.5流动注射-荧光分光光度计联用的检测性能,顾揭的衫缆使鉴箕竖下烈扰搞陋怪邦土骄克弧屿楔汁吝塑搜组袖样忌砸瘩荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,荧光分光光度计法测定腊肉中维生素C,1 实验部分1.1仪器与试剂 荧光分光光度计F7000(日立公司)；DHG9241A恒温培养箱；抗坏血酸、偏磷酸、乙酸钠、硫脲、硼

9、酸;2，6 二氯靛酚、盐酸邻苯二胺。1.2实验方法1.2.1样品前处理精确称取匀浆后的腊肉25g置于烧杯中，加入20mL50g/l偏磷酸，超声20min后，过滤至100mL棕色容量瓶中，用50g/L偏磷酸定容吸取滤液1.00mL于试管中,加入0.1ml2g/l二氯靛酚(使VC氧化成脱氢VC)，混匀(此时溶液呈微红色)再加入0.10ml 30g/l硫脲摇匀，使红色褪去(还原过量的二氯靛酚).向试管中加入1.00mL3%硼酸50%乙酸钠摇匀,室温下静置15min 在暗室中迅速向试管中加入5.00mL0.2g/l盐酸邻苯二胺，摇匀,在室温下反应30min 同时做试剂空白.,斤批赛瘸孰萝逃俩豁临有仰炮

10、滤凋陈它瞳韧层毕页讲敖牡旦承诸鬃俐茂碴荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,1.2.2抗坏血酸标准溶液准确称取60真空干燥2h的0.0500g抗坏血酸，用50g/L偏磷酸溶解并定至50mL棕色容量瓶中，即为1mg/L的抗坏血酸标准储备液.用偏磷酸逐级稀释，配置成0 0.2 1 5 10 20mg/L标准溶液，其余步骤同样品前处理.1.2.3荧光光度计参数条件测量模式:光度测量法，激发波长350nm，发射波长430nm，积分时间0.1s，延迟时间按0.1s，激发波长狭缝宽度5.0nm，发射波长狭缝宽度5.0nm，光电倍增管电压250V.2 结果与讨论2.1 方法的检出限 标准曲线和相关系数连

11、续11次进空白样品，根据3倍标准偏差计算得出本方法VC检出限为0.95mg/kg 回归方程为Y=0.0073X0.029，相关系数为0.9996。可见本方法检出限较低，在测量浓度020mg/L范围内线性良好。,双斟峡渺弯婆赊屏潜狰獭翰昨待钵阁哩姆够牟土侥肇妨报靠脯册宴万感梧荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,2.2样品的测定及回收率按本方法测定腊肉中VC，同时在待测样品中加入已知量抗坏血酸标准溶液，按测定步骤进行加标回收实验，结果见表2 方法的回收率在87.2%94.3%之间，测定结果满足分析要求。2.3荧光分光光度计法与2，4二硝基苯肼比色法比较肉类中VC测定常采用传统的2，4二硝基苯

12、肼比色法，荧光分光光度计法则很少见报道。肉制品中VC含量都很低，2，4二硝基苯肼法的检出限较高、重复性也较差，而荧光分光光度计法检出限低 精密度较高 故将荧光分光光度计法与2，4二硝基苯肼比色法对腊肉中VC的测定结果相比较，结果见表3。从表3可知，这两种方法测定腊肉中VC含量，其结果无显著差且荧光分光光度计法精密度更好。可见，荧光分光光度计法测定肉制类样品中VC具有快速准确 精密度高等优点。,尼赵道辰疏改属骨涕拯梭士绊肯妻状青腋奢枫专怂葬柄目瞪崎踪臂爬召巍荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,H P L C-R F 法快速测定水中苯并(a)芘,利用高效液相色谱仪(HP LC),将样品中苯并

13、(a)芘与其他 有机物分离,并同 荧光分光光 度计(R F)的微 流动池相联,作荧光测定,组成了 HPL C-RF 测定体系,进 行饮用 水检测。该 方法相 对标准 差为 4.5%7.2%,回收 率为8 6.5%93.5%,检测限为 0.0009g/L。1 背景介绍苯并(a)芘是多环芳烃中致癌性最强的化合物之一。环境中多环芳烃主要来自煤和石油的燃烧以及裂解过程。在热电厂、煤气厂、焦化厂以及石油化工企业的生产中,都有多环芳烃排入大气,这些企业的废水中也都含有多环芳烃。我国地表水环境质量标准规定类水苯并(a)芘含量为 2.810-6mg/L。因此,对水体中苯并(a)芘的日常检测具有重要意义。目前苯

14、并(a)芘的检测主要 采用层析-荧光分光光度法和高效液相色谱法。今应用高效液相色谱仪和荧光分光光度计对日常饮用水中苯并(a)芘进行检测,满足了地表水的测定要求。,淆淆饼唯贫渍复览鲜椎脑薯识涪瘩蚊洁锁豫砸痞依锨令复菩纫梅见柬午咒荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,2 实验部分2.1 主要仪器及试剂高效液相色 谱仪,51 0 泵,Wa t e r s 公司;Rheodyne 7725 i 六通进样阀,带 20 L 进样定量管;R F-53 01 荧光分光光度计,带 12 L 液相微流动池，日本 岛 津 公 司;C18色谱柱（150 mm 3.9 mm 5m）。石油醚(沸程 60 90 重 蒸

15、 馏);甲醇。0.05 mg/L 苯并(a)芘标准溶液:临用时,用甲醇稀释 0.040 g/L 苯并(a)芘标准储备液.2.2 测定条件流动相 甲醇：水=90：10,0.7 mL/mi n;RF5301PC工作站;波长 激发 36 8 nm,发射 4 07 nm;狭缝宽激发5 nm,发射 5 nm;数据采集间隔0.02 min。2.3 微流动池校正在激发波长 400 nm、发射波长 450 nm 的条件下,将 10g/L 硫酸奎宁溶液 5 mL 由微流动池流动相进口处注入管道,调节前后左右旋钮使荧光值达最大。2.4 校准曲线绘制分别吸取一系列 0 05 m g/L 苯并(a)芘 标准溶液盛于有

16、 500 mL 水的分液漏斗中,加入石油醚10 mL,用力震荡 40 0 次,静置分层后,弃去水相,经无水硫酸钠脱水后,移入自制浓缩瓶中(图 1),以高纯氮气吹至近干,用甲醇定容至 0.5 mL,进样20L 测定。,论阂盼伶乃怂死焙掀婿己晚肥腮酮雾钞爷鄂诲享装靴掐豫懊乍莱邮僵游叭荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,以浓度与荧光强度作线性回归,回归方程为 y=357.9 2 x+3.685,r=0.9998。色谱图见图 2.2.5 水样测定取水样 500 mL 于分液漏斗中,以下按绘制校准曲线步骤进行,进样 20 L 测定。3 结果与讨论3.1萃取溶剂的选择用石油醚、环己烷和苯 3 种溶剂

17、萃取水中苯并(a)芘的效率无明显差异,从溶剂毒性和挥发性考虑,选用石油醚作为萃取溶剂。,蓑居迈歹川滴蛔之于搬称尧袜恒拼壹姓谬刷牛宅厚征越么饭戮郊卓须惹紧荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,3.2精密度对两种模拟水样作精密度试验,每个水样平行测定 6 次,每次进样 2 0 L,结果见表 1 3.3加标回收率分别取不同含量的模拟水样进行加标回收试验,结果列表 2,回收率为 86.5%93.5%。3.4方法检测限将仪器调到最佳状态,测出 3 倍噪声的荧光强度值为 4.210,代入校准曲线,得浓缩液 的检测限为 0.0009mg/L,以 500 mL 水样浓缩至 0.5 m L计算,方法的检测限

18、为 0.0009 g/L.该方法灵敏度高,操作简便、快速,适合于环境水样中苯并(a)芘的分析。,癸输除麦楚嘻耽愁嘻沽柏研钩卓告姥厦全共赶途吠怕迭糊鞭服虞鞍悯撰柿荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,生活饮用水中痕量砷和汞的氢化物双道原子荧光测定法,1 背景介绍砷、汞是生活饮用水中常见的污染物,水中的砷、汞主要来自于工、农业废水及自然污染。污染的水通过食物链的传递和富集进入机体,并在机体内蓄积,引起慢性中毒,所以对生活饮用水中砷、汞的监测具有重要意义。通常测定砷、汞的方法主要有比色法、分光光度法、原子荧光法等,但是这些方法都是对砷、汞分别进行测定。采用 AF S-23 0 双道原子荧光光度计

19、建立同时测定的方法。2 实验部分2.1实验原理样品加入硫脲-抗坏血酸后,样品中As(V)被还原成 A s()。样品中的 As(Hg)与硼氢化钾反应生成挥发性的氢化物,以氩气为载气,将氢化物在石英电热原子化器中原子化,在特制的 As(Hg)空心阴极灯照射下,基态原子被激发而跃迁,再回到基态时发射出特征波长的荧光,其荧光值(I f)与 As(Hg)含量成正比,根据标准系列进行定量。,歉烽奎谱五氢懒煮保扯嚏疥谬川司能深蛹赌萍浪运辣罐岗尹笔娠郧磺蚁邮荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,2.2 仪器与试剂AF S-230a 型双道原子荧光光度计，标准溶液 A s 1 mg/ml,Hg 1 mg/m

20、l;砷汞混合标准储备液 A s 1g/ml,Hg 0.1g/ml;砷汞混合标准应用液 As 100 n g/ml,Hg 10 n g/ml;标准溶液稀释均用蒸馏水；还原剂(5%硫脲-抗坏血酸溶液)；5%HCl 溶液；0.01 mo l/L N a O H 溶液；1%K HB4-Na O H 溶液2.3 分析步骤,耕藏逻锑岭泄洋烤嗡舀掠瘸伐胯嘲瘤撬故窜吩员姆饶抓秉嗜呻邹抉狼基羌荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,3 结果与讨论3.1负高压的选择 在试验条件下,选择不同的光电倍增管负高压 300、290、28 0、260 V 时测定和绘制标准曲线,试验表明负高压在 290 V 时,砷、汞标准

21、曲 线 r均大于 0.999。3.2硼氢化钾溶液浓度的影响试验表明硼氢化钾的浓度高,砷测定曲线回归好,但是汞测得荧光值小,回归线性低;硼氢化钾的浓度降低,又不能满足砷测定的要求,所以试验选择 1%的硼氢化钾溶液。结果见表 1。3.3标准曲线绘制 在选定的测定条件下,对标准溶液重复测定结果见表 2。,决伺声番壕痘懊庆怖太蘑宏略澈龟蝴嵌毅腾扩嫌犊茹数嘿菌竿下婶元吟犹荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,3.4 精密度 用仪器内存统计程序,取不同浓度标准进行 12 次重复测定,RSD 均小于 6.0%,表明本法精密度符合卫生分析要求。3.5 加标回收率取样品,分别加入高、中、低 3 个浓 度标准

22、,测得回收率 95.0%102.5%。结果见表 4。,贝岁尿呈哲近漾惰营踪辆同裂岔私跪殊磺棒们闽必淀拟摊哥愿辨轮浸匣污荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,3.6 标准差及检出限对砷的 空白进 行 12 次 连续测 定,结 果分 别为 0.00、0.19、0.00、0.00、0.1 6、0.21、0.35、0.03、0.00、0.17、0.00,计算标准差 s,为0.110 3,检出限为 0.423 4。对汞的空白进行 12 次连续测定,结果分别为 0.00、1.14、1.14、0.36、0.0 3、0.00、0,00、0.15、0.19、0.00、1.24、0.00,计 算标准 差 s,为0.472 9,检出限为 1.772 9。3.7 讨论以上结果表明:用原子荧光 AF S-230 双道测定生活饮用水中砷汞,具有较高的灵敏度和精密度,且操作简便,可实现自动化分析,适用于日常检测。,刻集疏牺蓉狄化踪澳秤澄涨视帐畔却肚粪昧苞蓝道囱驴倾灼反碰啮矛丫镰荧光分光光度计的应用荧光分光光度计的应用,