质谱测试分析.ppt

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2、词徒拴打茹岭绊扳秘质谱测试分析质谱测试分析,质谱分析,ABI MALDI-TOF/TOF 4800 质谱仪先用MS反射模式得到一级图谱一级质谱激光总shots:800次选择5-10个母离子做MS/MS分析二级MS/MS激光总shots:2000次，碰撞能量1KV,CID on,囊伦冯扔阁腮烽赠靛访坛复磨萍埠汪贞疟窖葫坍臃亨胚莹屎墨铱脊箔菇蛮质谱测试分析质谱测试分析,数据库检索,采用GPS Explore(V3.6，ABI)软件进行分析使用MASCOT（V2.1,Matrix Science,London,U.K）搜库软件对本地数据库进行检索检索数据库为NCBInr，切割的酶为trypsin，允

3、许最大的未被酶切位点数为1,可变修饰为半胱氨酸乙酰胺化和甲硫氨酸氧化，没有固定修饰，母离子质量容差为50 ppm，片段离子质量容差为0.25Da,靛捌瑰芹路首键诛聂俐韧绢源舀颅似戍囱虱涟盲泻良袄级嚷酝竭静茫已防质谱测试分析质谱测试分析,肽指纹图谱（PMF）鉴定,PMF（Peptide Mass Fingerprinting）是根据一级质谱（MS）所测酶解片段的精确分子质量鉴定蛋白质的一种方法 一般采用MALDI-TOF进行鉴定。因为MALDI质谱图中的离子一般只带一个电荷，比较容易计算其原理就是利用了蛋白序列数据库中的多肽质量的信息与实际测得的质量信息进行对比而实现鉴定,鹊铀条滑扮腋整时怨待衬

4、筒毫陀萤疟吱鄂观伎桑值簿尿痪唇氓品免仿惰锅质谱测试分析质谱测试分析,优点与缺点,优点：是用一级质谱鉴定蛋白质的经典方法，算法简单，速度快缺点：质量相近的多肽增加匹配难度无法实现混合蛋白的鉴定,膏或祥战针溅姥爹阳怪椎琐镍涝历扼息澳稗惨快踞诵旋聘藕尼铸酌掘九育质谱测试分析质谱测试分析,二级质谱鉴定,质谱仪选择一级质谱中的一个峰，让这些峰所代表的离子高速撞击质谱仪中的惰性气体，使其肽键断裂，并对库搜索鉴定蛋白质常用MALDI-TOFTOF仪器进行,韧磺蔫员袖凡摇浮瓷装刘惊并寇怀二悦驳盖码搅蚂瞄袋堵硒裤棋床较净盂质谱测试分析质谱测试分析,优点与缺点,优点：鉴定准确度更高，可以得到蛋白的序列可以实现多个

5、蛋白的鉴定缺点：增加了一步操作算法更复杂，而且需要更多的操作经验,挪盒政镶殖穴猎燃匀蛮练却辛常昌力嘛航内北僻殖游恢钎曲喧方钎速隅牲质谱测试分析质谱测试分析,串联质谱结果质谱图,从一级质谱图里选出部分峰做二级质谱,一级质谱图,二级质谱图,仔院状缕汞桐藻皂杂驮憎娘拉擎贴铁咱钮澡感赢疮倚侩樊昆秋报哀羽儒私质谱测试分析质谱测试分析,蛋白点编号,蛋白名称,蛋白GI号,串联质谱匹配的序列,理论等电点,理论分子量,串联质谱离子得分,可信度,串联质谱结果报告单,蛋白得分,伍融唤霞炕韭呵娇惨立客剐生烫允活窿莲疫患航埔穷辈堂琶稼羌墨掷强岿质谱测试分析质谱测试分析,蛋白的选择,一般以protein score C.

6、I.%大于95或者单个肽段的Total Ion C.I.%大于95作为蛋白成功的标准对于一个样品点鉴定得到多个成功鉴定的结果，以蛋白得分（protein score）最高的最为可信一般而言，多个成功鉴定的不同蛋白之间相似性也是非常高的，也可以通过这个特点来判定结果的可靠性,鞠箭慎戚傅己栅越睹亡功捉兵珊礼貌租轴旨氨撂塞行雅杜仆济徒宁珍换孤质谱测试分析质谱测试分析,蛋白信息查询,首先根据蛋白名称可以了解该蛋白的大致功能使用该蛋白的GI号码可以到NCBI数据库进一步查询该蛋白的信息对于未知蛋白，可以采用BLAST或者其它功能预测软件预测该蛋白的功能,领痘夫辕椒疏新尊挽耪胚京撬别恿影马苔姜强构汤坊贿除错翻侮璃绥薛糊质谱测试分析质谱测试分析,Thank you!,死挪享纪园肿椰停嗅铭损郑废琳盔遭藩苍肋肃钞耽瓜噎粘坡抑筋垦准跨昌质谱测试分析质谱测试分析,