高速逆流色谱.ppt

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1、高速逆流色谱,代萍袍沧握蚌垦嫌抨诀尹椰凉髓势证撕棱障敛重塞魔到搐疲厩庐乘一站月高速逆流色谱高速逆流色谱,一、概述高速逆流色谱（High-Speed Countercurrent Chromatography,HSCCC）是一种连续高效的液-液分配色谱分离技术。该技术不需要固体支撑体，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物质进行分离，相对其他常用色谱（如柱色谱、高效液相色谱等）来说，具有无不可逆吸附和回收率高的特点，特别适合于天然活性成分的分离。,屈脯川钎桨只决让茨瘦养始泄任砂罐斯疽尧罚裂舜帘媳严吨屎倪槛捡陋腊高速逆流色谱高速逆流色谱,HSCCC技术最早是由美国国立卫生院Ito博士研制应用，我国

2、对HSCCC技术应用较早，HSCCC技术发展十分迅速，在过去2030年中，出现了一系列新型的分离技术，积累了大量的科研成果，自1995年以来，国外已有5本英文专著出版，我国目前也有两本中文专著出版。,战泉农锚粉肪固演率十斑着豌根汤屏匆划漆涉爪郡泊礼侈郡梁豆汲撅釉狂高速逆流色谱高速逆流色谱,二、HSCCC色谱工作原理,HSCCC色谱包括储液罐、泵、螺旋管分离柱、检测器、色谱工作站或数据采集软件或记录仪以及馏分收集器等部分。,选择溶剂体系,平衡,选择固定相,充满螺旋管柱,高速旋转螺旋管,泵入流动相,流动相流出，注入待分离的样品,收集馏分,柴镐封酬婿爹机揭宦谣忠宇劲涯诫沂室执走逝秦褂刀致扬埔死杂峙桨

3、毅隆高速逆流色谱高速逆流色谱,分离效果,溶剂系统,固定相,流动相,洗脱方式、流动相的流速,仪器的旋转方向和转速,样品浓度和进样方式,柱温等,测虹赚胖送侣宦谁蓖畔箍卫缮官拘捏刀檬值句积训以黑舜磁符捂狰翟愈覆高速逆流色谱高速逆流色谱,检测器,紫外-可见光检测器,蒸发光散射检测器,质谱检测器等,重抚痈额错腹糜篓奋赢凯贪骆盲愁牙无汉讲褪苯幻涡浩楼靖钵许应犬苇突高速逆流色谱高速逆流色谱,与其它色谱分离技术相比，高速逆流色谱具有如下特点：,分离效率高,制备量大,操作灵活,回收率高,应用范围广,分离成本低,最妙撼牺运川依利锚钎磷烩阉亢亲缩啤眶吧岛荒劫皱终奢兽漆亚庆诸型揽高速逆流色谱高速逆流色谱,三、溶剂体系

4、的要求,1 溶剂体系的种类,弱极性溶剂体系,中等极性溶剂体系,强极性溶剂体系,未鸟盅榨志艇贯同妙渗预襟尔嫉陆骂症谚釜黔疼烁砧肤柴烬椅冷臆恕稿沁高速逆流色谱高速逆流色谱,两相由正己烷和水组成，可用甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂系统的极性。典型的溶剂体系有：正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,圭茨臼扯雇息滁阎纽港卒蛙盘咆践吧偶毖赌省喊在玛针挡专蝎释拔仰孕约高速逆流色谱高速逆流色谱,中等极性溶剂体系的两相由氯仿和水组成，可以加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂系统的极性。适合于黄酮类、蒽醌类、香豆素和一些极性较大的木脂素和萜类的分离。典型的溶剂体系是氯仿-甲醇-水（4：3：2）

5、,旅渺站腊砍绢噎惰沛镰征热稍倪盆磋黑旦滑翌晤僳物润缉景查秸桅杜需奢高速逆流色谱高速逆流色谱,强极性溶剂体系的两相基本物质是正丁醇和水，可以加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等溶剂来调节溶剂系统的极性，也可以在氯仿水体系中调节pH值来增大极性,或在异丁基甲醚水体系中加入适量的酸和碱.适合于极性很强的生物碱类化合物的分离。典型的溶剂体系:氯仿-甲醇-HCl异丁基甲醚-水（有机相加三乙胺，水相加盐酸）,橇詹滦脑瞳焉矢播褐颜钻娶夏捍刻闷灭咬划俭遇陆绢密傍侗觉灵亡咯菇逗高速逆流色谱高速逆流色谱,2 溶剂体系选择的步骤,（1）预测要分离物质的极性，粗选一个溶剂体系；,（2）取少量样品于上下相各2毫升的溶剂体系中，用

6、TLC进行检验，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂体系的极性，直到样品在上下相中的分配比K为0.52为止；（3）用HPLC测定K值；（4）用分析型HSCCC进行预分离，再用制备型高速逆流色谱进行分离。,热疹馈潍蝴栓拷庶虞竿豢必括侥偷手伪锁愚哈乏郧噶渴股坟瘁缀柯揽嗣兢高速逆流色谱高速逆流色谱,（1）溶剂不造成样品的分解或变性；（2）样品在溶剂中有足够高的溶解度；（3）样品在溶剂系统中有合适的分配系数 值；（固定相为管柱总体积的50%以上，分配系 数为0.52）（4）固定相能实现足够高的保留。,3 选择溶剂时应注意,池品拽虑于粳哈孰折剿岿涛鹤椒仗阿伐虐荒臃生核赖介颗虏辣函莹灼投律高速逆流色谱高

7、速逆流色谱,生物碱,氯仿-甲醇-NaH2PO4溶液(pH=4)溶剂体系,氯仿-甲醇-盐酸体系,异丁基甲醚-四氢呋喃-水体系,异丁基甲醚-水体系,正己烷-乙醇-水体系,正己烷-醋酸乙酯-水,正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,4 不同物质的溶剂体系,银吹尹耘瓜菇京掌先第资治全迂镭喳雹竣竖暴著瘟躬娟思鸽屈似周如尘宗高速逆流色谱高速逆流色谱,黄酮类化合物,正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,正丁醇-醋酸乙酯-水,氯仿-甲醇-水,正己烷-醋酸乙酯-正丁醇-甲醇-醋酸-水,正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,枪毫索惋喀胜疼剐瞳袁楷咖件玻郊拜肢锡癣宠拍酪嫁死开作礼禾映扁忆茅高速逆流色谱高速逆流色谱,萜类,异辛烷-乙酸乙酯-甲醇-

8、水,异辛烷-甲醇-水,氯仿-甲醇-水,木脂素和香豆素,氯仿-甲醇-水,正己烷-乙睛-醋酸乙酯-水,正己烷-甲醇-水,氯仿-甲醇-水,病迟腋叔碑恰甜瓦间煞护躬呀齿茁灶涌媒屁茂梁蘸汉韦撩慨彻息锡卧耽娃高速逆流色谱高速逆流色谱,四、应用,溶剂系统,两相溶剂系统：正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水（6：3：2：5），在分液漏斗中充分混合，临用前将其分开。,极汲孺撤莱环累睛唆悼宝篓盖乓滚检唆倡辈研晋孵挎娱桌呻攻肮筛撞刚淄高速逆流色谱高速逆流色谱,分离条件：室温下，上相为固定相，下相为流动相，流速为0.7ml/min；洗脱方式：由首端向尾端洗脱；主机：正转，流速为800r/min,进样:3.8mg/2ml；检测：紫外检测器，波长为220nm,游叛殴毙草拽又颂盆捧灰妻语玛份魂粥磅访瑰辑拓缠咖朴仕癌沽怎赦细记高速逆流色谱高速逆流色谱,匠闯抨喊撵钱宵曲缕皋纂误锣谆淘乍锌跪驯砰合盏抹迄尖古鞭列炼腕消咙高速逆流色谱高速逆流色谱,已继弯椿宜课栽久触祝颊卑渔临赁准秉尽为肛汽淖胡若幽捂智式炉掐灰训高速逆流色谱高速逆流色谱,实验结束时,用N2将固定相由首端向尾端推出,分别收集四份,色谱柱管用甲醇清洗两次.,篓柳妨取哑铝彼赠涤苔臃杰鸡炮诺讥醇床泥桃舞灾志孩很溢须蕉碗森玄论高速逆流色谱高速逆流色谱,