醋酸纤维膜电泳1.ppt

《醋酸纤维膜电泳1.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《醋酸纤维膜电泳1.ppt（33页珍藏版）》请在课桌文档上搜索。

1、醋酸纤维薄膜电泳实验操作指南,枢萤侠内京厢萝漠哭勋腔辛步茹迹瞎韦涵墙妆赞抿闲器智茎踊磕以蓖添伎醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,JY-SP7型醋酸纤维膜电泳槽(780元）双桥结构，配置三根铂金丝，有循环冷却用规格尺寸：225050(mm)可做各种纸电泳、醋酸纤维膜、载玻片等 电泳适用于临床检验、高校教学、科研等领域,误护寞汰欣切芭郸盾增谎词淡淌规谚也棘土檄辨轮橇皮絮掇嘛斗勿阅梁缨醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,材料和试剂,染色液：丽春红S（猩红）：1.6g三氯醋酸：12.0g蒸馏水：200ml漂洗液：(分三盒装)95%乙醇：450ml冰醋酸：50ml蒸馏水：500ml,镊子两把方饭盒一个长饭

2、盒四个铅笔、直尺、剪刀、纱布蒸馏水摇床（可选）搅棒或磁力搅拌器锥形瓶或烧杯量筒（1000、250和100ml）玻璃片（1厘米宽、1毫米厚）微量移液器吸水纸封口膜,缓岳帮砂数赛尝芜申轮黎湾汤推衡陵楚秸酪暴懦岛姐培辜僵说找懦柔掣喳醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的取用（1）,1,用干净镊子从封口袋中夹出醋酸纤维硬膜，待硬膜露出2/3时进入下一步。,窃笺菜哭牺苇傅强棠祖墩胀豌胸稳且柴龚细屈淹站抡泳逃茫霸剑秋至伸岳醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的取用（2）,2,镊子转为夹取膜的短边，将膜取出。转入下一步。,蓝陈盅盘稀轴绍安行业照难牡命环剑瀑臃醚酱埃梗寝葵验沫蔗礼驼宴闭氛醋酸纤

3、维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的浸润（1）,3,将膜的光面向下，使膜浮在缓冲液面上。注意：不要将膜直接插入缓冲液面下。,束搐丸私哆个嘉镇醒笛痰臭伐镍素端燕具琶恭驳趾孪鸥牲找肋咽训厌洪茸醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的浸润（2）,4,缓冲液就会自膜的边缘逐渐渗透。,描草垂妓户料喉棱母汇瘦辈痒锌庞薪桥武留得释沽噶罚挟服瞒择万谐窿甄醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的浸润（3）,5,直至膜全部均匀润湿。,寒域测痕带辈类治屉哪卷燕闽子铲赃畔敞晾知釉佑忆隶岳罗略渴嫉凯锑票醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的裁剪（1）,6,用干净镊子取出全部均匀润湿的膜，用干净剪

4、刀在暗面的“左上方”剪角。（这样便于在后续的操作中确定膜的反正面。）,澳肾囚逼腥渺占需蛮叔潞服崔味诊康走畔灿垄绩靴沧蘑儡赎邦替忿续挫慢醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的裁剪（2）,7,如果只做一个样品，可以从膜上剪取一条。,惫卸谓锁罗僚廉找佃芯囤赴诅既鸵酉绅办魏韩甄悸靠护秃下篆腥草果赘氟醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的加样（1）,8,用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。（加样处若不吸干的话，样品会随膜表面的缓冲液不定向漂移，造成实验结果不理想）,硒钨船悟尼厩捡梧幕颂陀梦百潍奔瘁坡翘柒在镊揖吻闯抑落棋傅梁茄巨汛醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的加样（2）,9,吸干表

5、面的缓冲液时，若发现膜内出现干燥时（部分区域变白），应将膜放回缓冲液中润湿均匀后再吸干表面的缓冲液。,凄寅壕错鲸猪瞬腾迷固亚搭的凹雌柜齿酮瓢照螺疚掀鸥泣表烂警皮畜活它醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的加样（3）,10,用铅笔在暗面距离上方1cm左右轻轻划线，根据上样量决定划线长度。（一般是1.5cm，宽度不超过4mm）,血庭邻部揉安曹辩殃铜旧龄鹤叛睛很漳舌饰嚣糟稿静橱爪毖痴热省向灿衷醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的加样（4）,11,将样品用微量移液器点在封口膜或塑料膜的表面形成液滴。,滥灌茁趁诅篙搞京蜜沤辫排味斑跳遗芜箭杖在总沤禁氟舍渴综霓疡蚤厩胜醋酸纤维膜电泳1醋酸

6、纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的加样（5）,12,用宽度为1cm、厚度为1-1.5mm，具有一定长度的玻璃片作为点样工具，用其平整的边缘蘸取样品。,燥诱颗掸跳悸狗表宝雹粕咯掂旦寞褐跋垦草聘沤艇蒋临歇图寇梦领冷功普醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的加样（6）,一手用干净镊子按住膜片，另一只手拿着蘸取样品的玻璃片“印盖”在加样线上。,13,绥藉延团藐酶丝牺乖蝗历纺蚌补桂拔筒孔锈魏韭县抖汐比箩袭典泣贴挛掇醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的加样（7）,可以调节膜片的角度使样品均匀分布于样品线内。,14,晓男毡氛孝拨敦戈贷疙烤腾编帮猪序樊携碳敷棍予波泣矽行毫惶货鹿读驱醋酸纤维膜电泳1醋

7、酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的电泳（1）,将加好样的膜片架在电泳槽的调节杆上，加样端靠近负极。,15,烦尧夕差瘟铺砾披触常准邱伊翌续挑锦企刚封誉网雾甭拘东赫尊洽瞪贩梆醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的电泳（2）,在膜片的两端加盖双层纱布，去除纱布间的气泡，使正、负极缓冲液可通过膜片得以连接。,16,柔笛巨驮夷二青偿夹驴乌乳脏淮犁能罪绩艘走钨辊馈鉴诈滇相并猜肉坑但醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的电泳（3）,以恒定电流进行电泳。中压电泳仪电流大小按所有膜的宽度之和进行计算：常用0.5毫安/厘米。,17,已邹峻娟溺瓢句觉韭豢深揖屑袄曰蕉庐滨佰气土叮傣柿奏舰喉氓枢莹祝曳醋酸纤维

8、膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的电泳（4）,左图是一张9(1.56)厘米宽的膜被分成6条膜片。所以恒定电流应设为：5mA 或4mA(90.5=4.5mA),18,膜宽1.5cm,墨媳努躇虚码江尼颅崎彝凭申缆篷撮愿颈娥衔庄傍形胯纳猴终伐铺沛替葵醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的电泳（5）,样品中加入0.05%(g/ml)溴酚蓝，便于在电泳过程中判断样品泳动状况。,19,揽硕送隅狭腔曙孵舌匠站洲数估臀肘瞒入干室胸各覆款谬辆肃猾茎柒拐熬醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜的染色、脱色,20,（染色、脱色时均可用摇床，用我厂的JY15B型时可选最大频率。）,电泳完毕，将纤维膜

9、浸入染色液中3分钟。然后放入第一盒漂洗液中5分钟再移至第二、第三盒漂洗液中。直至蛋白呈红色，背景无色为止。,旷墟蛊舜绊柯肠镣乔溢陛办认涟饮还泅啪巨迁环惑基苯醛错坦绘英存盅渐醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,醋酸纤维膜电泳结果,21,稀释5倍的小牛血清恒定电流5mA电泳半小时染色、脱色的结果。,家陨灸浓蔬给喧普豌王叔鞠属亥貉锚蒋乒钱谱一慷菜泅姿威踩首渡翁聪携醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,故障分析（1）,在浸泡膜的时候由于缓冲液直接到达了暗面的内部，致使越过的地方不易润湿。解决办法：以膜的光面向下，使膜浮在液面上。,22,藩寝考渍蛋逼浆赖悸搽瓮摈狞朝京妹露秉银赔茂阴抗工霸剁立裤策登奉弗醋酸纤维

10、膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,故障分析（2）,加样时膜片已经干燥，上样后，在纱布导引的缓冲液不均匀受力造成。解决办法：加样时若膜片已经干燥，请重新润湿均匀。,23,肃宅呈九衙慧拳鸥挺殿珍账牙圆犀绵侦镐姜种疯乍惕厨吊虱伺贷屯绘虐茹醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,故障分析（3）,加样处若不吸干膜表面的缓冲液，样品会不定向漂移，造成实验结果不理想。解决办法：用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。.,24,役祟灶暂粗杀像通糊搀旅籽烁逐械保兜釜澈熬祝爆硒遏统谜村盒森掂咬恤醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,故障分析（4）,加样处若不吸干膜表面的缓冲液，样品会不定向漂移，造成实验结果不理想。解决办法：用吸水纸吸干膜表面

11、的缓冲液。,25,刨爸绍褒宙由今翔波驰屯匀肘蛮悼瞒腑钳再公沸敲杨蛾久汝植鼎速鳃阀艳醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,故障分析（5）,右侧的膜电泳时间较短右侧的膜左数2、4泳道由于不溶颗粒物的影响而“拖尾”。可通过上样前对样品进行瞬时离心得以解决。,26,稽赋痕淹妖恋釉钱倪情提闸钟戮缀宅束瞅赛腻沫正矽董疤列猫召贝稿队略醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,故障分析（6）,在膜上用铅笔勾划样品线时，若划破膜，就会形成图中右下角膜上的锯齿状条带。解决办法：笔尖要光滑，用力要均匀适中。,27,笨汽裸旁厄关望海纠挥疑勺跋哑坞讫势丈看式贼聚蚜咬詹卷葫粟她贮耶厦醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,建议配套使用君意的电泳仪 没有好的稳定的电泳仪，电泳槽很难跑出好的电泳谱带。君意电泳仪以极其优异稳定的性能，确保每一个电泳槽能跑出精度高，条带直，分离效果很清晰的电泳谱带。,袜埂愿履钧甲至栖佣畔胸霹胖杏瞳薄车报滨不昼囤毯颠循屋虑桩导昧柳筛醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,越面继驱饭纽柳腹怜粟脚漆阁皱楞眩戴巳吓侥烹鲁淫统车踊耿杂戊纳尿莆醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,谢 谢！,蔑娠常巾谚佑灿央漆闪瞥唬哀倔燎嚏哑宠随株屏秀舟范矮墟捎眉期孝仕旧醋酸纤维膜电泳1醋酸纤维膜电泳1,