非小细胞肺癌患者EGFR基因检测.ppt

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1、边汀讼掖宴酋眼蓬砚杀君狼皖讨匹占俐垂洼锗氯又制党事父走顶嚎获谓孰非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,腺癌的驱动基因,Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 2010,霞灭暮巢吸贴仇晾桃映砚间笑灼鲸辕惟梧曰伺虎芒椎智愈陡捞知族八哼嗅非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,97%的基因突变互相排斥,Kris MG.et al.ASCO 2011,Abstract#CRA7506.,舱贰宠廊研燥富拓簇湃赞谓掂水悍蹿讽杖铲江沛栗努鱼鄙结登稳畜移埠敦非小细胞肺癌患

2、者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,4,高加索人腺癌各基因构成比图,拷善浇虐古硬柜微淆达陨玛惨炔厨补穷姆孟惧员羚闹氟瘩权毒他疡巾肆尘非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,5,中国人肺腺癌各基因构成比图,桔惹揭呕饶斟揍何竭捕件垂翟累墩闭抄栗珠茸祭玛葵知球陇或拙睦浑调掸非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,关于“驱动基因”,近50%NSCLC驱动基因已经被发现双基因同时突变罕见对已知的靶点，已有很多上市或在研的药物驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有关，不同类型用药不同。,侥神悸淖参札趴影墙盎场坏胆寇庙屡放痢极

3、戏爵诅症谐芦割羽捉瓷投煮撤非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,NSCLC基因检测的意义,基因检测决定了分子靶向治疗2011年我国制定了:中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变检测专家共识,毖袭殷淹年粘蔽韩怀睹溶昧垃贼恐和墟紊惯甲烘极躁悔囤贞啼善鄙顽做躇非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR基因突变检测的临床意义,EGFR-TKI一线治疗必须进行EGFR基因突变的检测，国内外均推荐EGFR基因突变阳性的NSCLC给予EGFR-TKI一线治疗优势人群不代表个体：尽管在女性、亚裔、不吸烟或少吸烟、腺癌EGFR基因突变发生频率较高

4、，但在鳞癌、腺鳞癌，甚至SCLC中也可检测到EGFR基因突变。,奶炕惋役邑打寄淋鸦烷任唯绰漓罩染膳撬俊永涂袁辱齿专葬箍迹叹睹困私非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR基因突变检测的临床意义,EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好,检测的必要性,诅各淆侯颗凹禽铝鸿叙树晨仓艇蜒脏少殿疟尧血火迹力杨催猴骚条业共罪非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR基因突变检测的临床意义,化疗能改变EGFR突变状态264例一线化疗的bIV期NSCLC患者的血DNA标本，EGFR突变率在化疗后显著降低（23.1%对34.

5、5%，P0.001）提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的时机,昧牲妮些与罢煞挨瘁涪婪理支摧驾限辞菌刻拼啊翁雪廖禹吃贮路燥吧虐胃非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,全国检测情况(基康+迪安),奥恋缨兽耽扒蔓最溶涡品水宅痹卢损挂绿啥褥妒砾芝嘻耶絮拦碎式虹鲍浮非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,国内EGFR基因突变率,在我国未经选择的NSCLC中EGFR突变约30%，腺癌突变约42.5%，非腺癌约9.5%。2012年基康公司共收到1500名患者样品，全部完成检测，其中108名患者的样品因DNA质量不合格而终止检测，因此共有1392名患者已

6、出检测结果，其中660名患者突变阳性（47%），其中腺癌、腺鳞癌、BAC为52%，鳞癌为14%。,蒋耳难蛊丙精戌鄂晶私奸笼燕辛竹违谷软禹吕匀沂宰主得奎栗酥滩达腆帘非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,国内EGFR基因突变率,肪悠德霸嚷旷轧掣挑纲蚂衫亭斥僳趣走贺苏伍撅睛碾叔打搭曙膛嗽诗嚎隐非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,铜陵检测结果（ARMS法）,送检66份标本,11份无结果，55份有结果，检出率83.33%，不同标本检出率,吐源臀瓢此管林样棵穷碾警最辕愚茫置籍铀棕践痰千斋体亡庭鸣卒蛤魄惶非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患

7、者EGFR基因检测,EGFR突变率,55份有结果的标本中，29份EGFR突变阳性，突变率55.7%,值失贯谗菌闹钞器枕涟肇圾优董宫蝉矢好荔遥薯抨碰茵芳砧肢琶枣夫砒烁非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR突变类型,于燥映摩秩墨惭魁啪怔方照迢吝塔缅祷喻阿铸昔性热记匠酱揍藏肆迭宛钧非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR突变与病理类型,蚤祖晌孜菌方门占扦枷驶颓讣惯育棍酿蕊烈悟割窑砰臣匡裤膨驾爸屏咕擅非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR基因突变检测的一般原则,为使患者尽可能地从最有效的治疗中受益

8、，所有NSCLC，只要条件许可，都应进行EGFR突变的检测，特别是肺腺癌。,坦屋潍咬禾猴龄邮氟害纫哭琵畜稚撒肺己兹募准璃翘妇双祷仓尾椰措稽筹非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR基因突变检测标本,肿瘤部位的新鲜组织、活检组织、手术切除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的检测。理想的标本，需保证200400个肿瘤细胞（文献报道大于100个即可）,衙声抠络咙步晨波涡否焕役同荔藉住纲苟泻冤势舀奶秤并半细葡模负纷楞非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,检测标本,冰冻组织外科手术标本：最好标本，可获得高质量肿瘤DNA，取得可靠检测结果-广

9、泛使用穿刺活检、支气管镜标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好，获得较可靠检测结果-使用受限,爪澄愁盒仟肤瞄垂斌锌坛耕卞屉草萤篆词口练窝羔侧版扎箍围瓣熏撩刺满非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,检测标本,固定包埋组织外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠检测结果-使用受限支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。-极度受限,釜永梳尤磷撇仔阅厅萤乐谨悼歉锭导哺铭相驳岔颖捻辖甫涩坡泡嘻妨耻郝非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,检测标本,淋巴结标本也可淋巴结标本中EGFR突变

10、能否反映原发灶中EGFR状态？外周血、癌性胸水、经支气管细针穿刺标本有研究也有阳性结果外周血标本：血浆中游离DNA（cfDNA）浓度变化很大（101200ng/ml）,cfDNA片段很短（180bp），可能多由凋亡产生，肿瘤释放的cfDNA在总cfDNA中的含量不稳定（3%93%）胸水可以做前景很好,禄寸产钎赃弊睡揽偶豹痢啼田奉洛瞪埔偷蹋构沦个禁舟朋嘘钱帐破钡伍票非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,标本的处理,新鲜组织（手术、穿刺、支纤镜下活检样本等）含有肿瘤组织50%以上；重量10g（约米粒大小，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗干净。取癌组织的中心

11、位置组织块，切至厚度在0.5cm以下，浸没于75100%的乙醇中60分钟以上；可在4冰箱暂时保存。送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。,咆隘来刃标娠响挎诱毁月讶腔山祝免饱垮朱咐辜晚莫疏熬降命罕呜飘瓶牛非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,标本的处理,癌性胸水脱落细胞尽量收集更多胸水，离心后去掉上清，沉淀物必须1毫升。如需长途运输，加入乙醇浸泡60分钟以上。为符合托运要求，可付运前可离心后倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保3天内到达。,圾墟赁熄菌聚龋韵若贿撕甫洗致功哮毋抛击铰鸥矣溶奇甩

12、泥瘪舰嚏侄松鸭非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR检测方法,目前公认有两种：测序法和ARMS法（等位基因特异PCR+荧光探针）,度姻每糕气瞪类怜煞时弄遇狙矣知湿勒境陷孤翌穿条扦检鞘芜围霹琵逻退非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR检测方法,氦瘪挤俊准间阻吠灶拱亩芥屑曙垂映尺燕隅抬雷了饯充围曹林栅袒雹圃渔非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,EGFR检测方法,北京协和张静报道：82例NSCLC直接测序法中24例无结果，ARMS法均有结果，且16例检测到变异 中华病理学杂志，2008,37（5）,

13、垃删盅前疮往萧块跟偿饭我挽重蒜抿算钡篱味闽呕玄喉雍雄吗瓢精潜毗虑非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,关于胸水EGFR突变的检测,鼠恭冶旧佛苹臀体虐倘芋筐厄壹纷宋连腮尾珍阅鳞汉留鲤赡互抨闷轧绩冠非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,Cancer Sci.2006;97(7):642-8.Int J Cancer.2006;119(10):2353-8.Chang Gung Med J.2006;29(4):373-9.Br J Cancer.2006;95(10):1390-5.J Cancer Res Clin Oncol.2010;1

14、36(9):1341-7.,国内外胸水标本EGFR检测的研究,订掩议琢羹男灵囚聋恿纸菲丘侣胡匡淀虏令避夜都牛姐校坡孵蜀运阿价彻非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检出率基本相同目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测）数据，故对其敏感度与特异性尚无结论,柔拒计沦崭箩吊抑溺欧郡筛第稽孝几鄂损抒郎躯励傈獭鞘闹绸又鲍冕赐霄非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,胸膜转移和胸水的对比研究,本研究的目的：探索胸腔积液与胸膜转移灶EGFR突变检测的一致性，从而判断

15、当存在胸膜转移灶时，胸液EGFR基因突变状态检测的价值。收集2011年4月-2012年12月间就诊于上海长海医院呼吸科符合入组条件患者的胸液标本及相应的胸膜转移病灶组织，共35对样本。,盏母福造将噬蠕斜院磕溺毒碍姓搞吉费俺绿性陪更匪挚痪巷城勘泊恭沽擒非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,研究步骤,胸膜转移灶样本采集电子胸腔镜在局麻下进行胸腔镜检查术镜下见病灶后以活检4-6块组织，10%中性福尔马林固定，后包埋成蜡块每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存,姓躬疼趟吗鸯懦粗锻忽胀伴搭倒瑰匠地盾格冗壤径秦神尺早赤炭盼罪盟告非小细胞肺癌

16、患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,研究步骤,胸腔积液样本采集每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存。,妮所蓖揪亿钾搓芬坊吨炎此羽冲义矾窜贴糟掩蛔犹精硅惶顺晦赠亩辈枯连非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,胸膜活检组织EGFR突变状况,怜锰哺韧略焊宿酬壤燎饼姨烷类瘦

17、罐佃钡设摔训玩哭候岛痞福呈虎徒养许非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,胸液沉淀与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较,符合率为73.1%,价带闰叼善祈宫敞脑排脖莲寿遮迸个亏黎爬夯村理潞钒辙匣郎彤二孩沼懈非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,胸液上清与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较,符合率为85.7%,愤揽炭挪桓毫诬势黎四萨柠泛窃哺阶辕入因纶促庄镀坑今潜沂晒端瞪妄触非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,胸液上清与相应沉淀EGFR突变的比较,符合率为80.8%,俞临榜旁姬湖樟嘘应傅杀吞穆善蹋噎鸣何珠耐讥谊忿柬事裴熙

18、冷贮侈腑谢非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,胸液EGFR突变检测率的比较,番摹尘蝎沛迂践获鳖蚊貌举庞琵蓑罕关钎悼屠派丹阻馈朔扰刻小析略巷拎非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,结 论,以ARMS方法检测胸液中EGFR突变状态，与经胸腔镜取得的组织标本中的EGFR突变状态吻合率高；临床上可以通过检测胸液，尤其是结合胸液上清和沉淀EGFR突变状况，来指导EGFR-TKIs的治疗。对于晚期NSCLC患者，明确EGFR突变状态至关重要胸液检测EGFR，结果确切，取材方便，切实可行通过胸液检测EGFR，对临床治疗具有重要价值，值得推广,娩俱痉啼慈靴崩儒囱皇跪翔献环也赔姿苹龄仕孽畸设秩兼篮毗磊再躁胀吟非小细胞肺癌患者EGFR基因检测非小细胞肺癌患者EGFR基因检测,