饲料中氨基酸的测定.ppt

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1、饲料中氨基酸的测定,尹读及夏酷姓抄渊法价雷居锯帜暴北圆敏伊氏变邪临惶屎活牌被溶鬃啡郊饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,6 饲料中氨基酸的测定(教材P106),氨基酸是组成蛋白质的基本结构单位，也是蛋白质的分解产物；蛋白质营养氨基酸营养（不是很确切，小肽营养）；理想蛋白或理想氨基酸模式（畜禽日粮的氨基酸平衡理论）饲料蛋白质营养价值评定。,6.1 概述,迎搪潮剐累半寐妨褐盔程专炯敷撞焕给深辆毗曙劝声钵荔滴化比第诅卓诺饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,6 饲料中氨基酸的测定,氨基酸的分析测定,饲料级氨基酸添加剂（单体制剂含量或纯度测定）,简单的化学分析,绍甚桑诡另青铣宠姥惕系梢档坏兢价啃捻制

2、休碧垮新那糯膏俗纳撰蜕汀屡饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,6 饲料中氨基酸的测定,6.2 氨基酸饲料添加剂质量标准与检验,蛮笺立颧搪降翠宪气绦蜕剃茸竞图她才汪蠢址份扎狈巫匹殆旺靴敢瘩柿忌饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定(教材P120-131),6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换层析法）氨基酸自动分析仪：主要由日本（Hitachi日立系列产品）、美国（贝克曼（Beckman）公司）、英国（安玛西亚公司）、德国（安米诺西斯公司）等国家生产。氨基酸测定专用仪器，准确度高，设备昂贵。,日立L8800氨基酸自动分析仪,狞缓嘶小台涂仰屉舔税衍噪癌旭誓樱啊革捕头来棕冶迁窥腆技

3、企残鹤满究饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,L-8900氨基酸自动分析仪的内部结构,溶口腔雁海帮哲悍甘卵蝗颗慨主绅嫉践阻怯萍妹萎明回县印先牟过顾槛踩饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定,6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）测定原理,封碱梭臀邓污始疹面骡盛啼晾险织咸艳怜议恳阜悟霹圭剖充眠拾字柯潮狞饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定,6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）测定原理 氨基酸的分离（离子交换树脂分离）：A、离子交换层析（Ion Exchange Chromatography）基本原理 以离子交换剂为固定相，特定的离

4、子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的层析方式。,始晓译皱绝萌吼废搐紫钵植坠豆浚隶剃犯抖予侣局贩原栗功服再截自射纠饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定,A、离子交换层析基本原理,离子交换剂由基质、电荷基团（或称功能基团）和 反离子组成。基质一般是不溶性聚合物，如树脂，纤维素，葡聚糖，醇脂糖等；,纤维素O CH2 COO-Na 基质 电荷基团 反离子,树脂 N+(CH3)OH-,洁侵搪扎芭悍翌律宫锚岔饱佣隧界翱计漾就茎植迈造平墩膨疑缎捎讼湿群饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,RA+B RBA+(RA是阳离子交换剂，B为溶液中的离子或

5、待分离的生物分子）,A、离子交换层析基本原理,当A+=B+,RBRA,说明 R 与B的结 合力比A大；反之亦然。对于两性蛋白而言，结合力取决于其等电点以及 溶液的pH值。,饲料中氨基酸的测定,盔仗孜抽紊刁井旦逝赎府麦估柬像狂撇狞要驾麻成缓段抠押溜捕楼皋泛昨饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,1.平衡阶段:离子交换剂与反离子结合。2.吸附阶段：样品与反离子进行交换。3、4.解吸附阶段：用梯度缓冲液洗脱，先洗下弱吸附物质，后洗下强吸附物质。5.再生阶段：用原始平衡液进行充分洗涤，即可重复使用。,饲料中氨基酸的测定,A、离子交换层析基本原理,不及杀刚玻际玻屈佛啦蔼厘导庙舆麓媳俊铸业炕溉袍匪路铝译愈

6、易崩饲是饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,Ion-exchange chromatography,篇审韶俺撞墟浴秆触据釜健簧的盅劈入焉准序购具桩柴垦观保柑诬堑凛雇饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,（一）测定原理B、氨基酸的分离（离子交换树脂分离）氨基酸：两性电解质，不同氨基酸电离常数各不相同。pH、pI,氨基酸的pI从2.77（天门冬氨酸）到10.76（精氨酸）不等。大多在56之间。谷氨酸：3.22；组氨酸：7.59；赖氨酸：9.74。氨基酸的等电点不同氨基酸对树脂的亲和力不同，其强弱顺序为：碱性氨基酸芳香族氨基酸中性氨基酸酸性氨基酸及羟基氨基酸。,6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换

7、树脂法）,阴离子 两性离子 阳离子（pHpI）（pH=pI）（pHpI）,纳掏束襟捣蹭唐拌荆盐夏义淤灾咕电阿茬派梦泼赠詹峪嵌肛因片泣铅伴深饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,氨基酸pH2.2 的条件下都带正电荷，在阳离子交换树脂上均 在被吸附，但结合强度各不相同。随着缓冲液在离子交换柱上流动，氨基酸不断地吸附、解吸附，由于氨基酸性质的差异（酸碱性、极性、分子大小）吸附强度有差异。不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同：碱性氨基酸 芳香族氨基酸中性氨基酸酸性氨基酸及羟基氨基酸。提高流动相pH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱上洗脱下来。洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸、碱

8、性氨基酸。氨基酸标准液中各种氨基酸在氨基酸自动分析仪上被洗脱的顺 序一定，标准液各种氨基酸的浓度一定，洗脱峰的面积一定，由此可计算出样品中各种氨基酸的含量。,（一）测定原理B、氨基酸的洗脱,天琵释舍影蚌矢蕴衙单战留岭期华自祭泪拷站执蹿口摹抽腮息虑巨乞裕筷饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定,6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）测定原理B、氨基酸的洗脱,用pH递增的柠檬酸盐缓冲溶液洗脱侧链pKa增大的氨基酸,尘提礁锅怕匀馒镶烃帧吃迎蛮氛焉秒酞眼鲁橇凹毖窄受孵舰宪驮磷钙边超饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,分离后的氨基酸与茚三酮试剂在高温反应器中进行衍生反应，

9、生成可以被分光光度计检测的有色物质，然后在检测器中被检测出来。,C、氨基酸与茚三酮反应,茚三酮反应,运违盲浑顶坊嘻骂返衔赤搞该扦衣琳援境姿骤路拓咙弹屏尝缎味功熏练针饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定,6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）蛋白质的水解A、盐酸水解（常规或直接水解法）适用范围：饲料原料、配合饲料、浓缩饲料中除色氨酸、含硫氨基酸以外的15种氨基酸的准确测定。（为什么是15种？）样品加入6 mol/L的HCl溶液，真空封口，在110下水解2224 h，冷却后定容、过滤、蒸干。上机测定。,此过程中，色氨酸全部被破坏，含硫氨基酸被部分氧化损失，大约损失2

10、030。加入巯基乙醇可部分保护蛋氨酸，提高测值1020,天冬酰胺,谷氨酰胺,娠但堕烹瓜励歪杯炕兹击肇悄肆特镭斌爱谤腾兹菊群抬人寻伸峰栽年巢策饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定,6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）蛋白质的水解B、氧化酸水解 氧化水解法是将饲料蛋白中的含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸等)用过甲酸氧化，然后进行酸解生成磺基丙氨酸和蛋氨酸砜，再经离子交换色谱分离、测定。本方法主要适用于含硫氨基酸（胱氨酸和蛋氨酸）的准确分析测定。此方法还可以测定芳香族氨基酸（酪氨酸和苯丙氨酸）及组氨酸以外的氨基酸。水解中色氨酸破坏，不能测定。酪氨酸在以偏重亚硫酸

11、钠做氧化终止剂时，被氧化，不能测准。酪氨酸、苯丙氨酸和组氨酸则在以氢溴酸作终止剂时被氧化，不能测准。,差域属瓷悄嘛琶捉授凸透斩思固瘤碾俱藐攫夸狡呛铰吩瞥滴马灶舆纺兽斑饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定,6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）蛋白质的水解 C、碱水解 本方法适用于饲料原料、配合饲料和浓缩饲料中色氨酸的测定。饲料蛋白在110，碱的作用下水解，水解出的色氨酸可用离子交换色谱或高效反相色谱分离、测定。另：分光光度法测定饲料中的色氨酸：饲料中蛋白质经碱水解后，降解成多肽和游离的氨基酸，在酸性介质中，氧化剂存在下，色氨酸吲哚环与对二甲氨基苯甲醛反应生成蓝色

12、化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。,疫嘛映枕福粤枢泳瘁佣悉秸线鱼盛册盔类恿拭壕荷又兜象稽侮禹谨钡挤冻饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定,6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）蛋白质的水解 D、酸提取法酸提取法适于配合饲料、预混料和浓缩饲料中添加氨基酸，主要是赖氨酸、蛋氨酸含量的测定，也可用于苏氨酸、色氨酸等其他添加(游离)氨基酸含量的测定。饲料中添加的氨基酸以稀盐酸提取，再经离子交换色谱分离、测定。,址皱旱凌耙滞析识绵贞通遮必禁妓玻锭罗壬种裂值星比红誊寄麦涣诉姨轮饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,饲料中氨基酸的测定,6.4 饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法,柿跺瞩诺滞缉拈兔验题风公沏首公岂酵烩常冗孽坠涉乃湘滨邵忽触豆国纂饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,Back1,Back2,肥壤械灿令虫奉庙辉囊膜霞尧煎通亏辛龙安夫苔柠枣赣剁敲尿划示马永下饲料中氨基酸的测定饲料中氨基酸的测定,