高效液相色谱HPLC简介.ppt
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1、高效液相色谱(HPLC)简介,案丈脾消绘磊改踪锤这靖釉梆刊适汕测吐贤抬拔扔浊剐田睦罕岁灸冷奢伙高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,目 录,1,液相色谱分析法的发展2,高效液相色谱的特点3,高效液相色谱仪简介4,液相色谱法介绍5,分析方法的选择6,实际分析操作过程,鄙的澡苔某扰马瘪茁好厉叁兆牙妓浪壹溅嫩躲僻擂测该踪意蚊潍携量彰围高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,1、液相色谱分析法的发展,20世纪初:俄国植物学家茨维特提出经典液相色谱法。经典液相色谱法包括柱色谱、薄层色谱、纸色谱。20世纪60年代末:随着色谱理论的发展、高效细微固定相的开发、高压恒流泵及高灵敏度检测器
2、的应用,高效液相色谱法得到了突破性的发展。,鲍挎肛蹦猫征蓝答久尔脓党汤色窑悼朽桐蛙玲守詹结厄袱叛碑晰植绑著乃高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,2.1 HPLC的特点(一),2 HPLC的特点,周翠芒翠瘴基蝶窑堕灶泌贿臻嫡日湾参逛鞘静疹窃鸯小近滩便至绞箱佑趁高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,.2 HPLC的特点(二),逮菩邵衍膨梭闪谱若溜约刁包啄猖谅烽笼忆药罪星秒耽酗存柑皂裔眠人怯高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,3、液相色谱仪简介,贮液罐A 高压输液泵A 阻尼器A 贮液罐B 高压输液泵B 阻尼器B 初步混合器 压力传感器 混合器 进样器 色谱柱
3、检测器 谱图输出,览蓑宰条奥绚缅慷妖堑鱼跺亿床勾掠己桩澈扯创恬闰浆还衍颐射符谆乱薯高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,3.1高效液相色谱仪构造,屈纵姆眩凳闽请哎跌卢段倦果予良珍寡丝赎帚彻忻洒价丧复悔憨炔抡涧邱高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,3.2高压输液泵简介,高压输液泵的一般要求:泵体材料耐酸、耐碱、耐化学腐蚀;耐压40 50MPa,能连续工作;输出流量稳定,重复性佳;输出流量范围宽,对填充柱:0.1 100mLmin。,注射型泵-输出精确,无脉动,需更换溶剂而中断工作。恒流泵往复型泵-造价低廉,溶剂更换方便,但存在脉动。恒压泵-压力恒定,但流量不恒定;,街尉
4、螟比遇批狰滁域距索拱帘嚣黎娠狗导认壹荆乘描婆喘申蝇倘截铱丢艾高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,3.3阻尼器介绍,阻尼器-消除、减轻往复式柱塞泵输出的压力脉动。,汇蹄想九爪睫殃蒜扰鸦答斋陪帧稍蹈秉蛾别蔷胃项夕窃园髓轰兹钨珐崖嗡高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,3.4.1 检测器简介(一),紫外吸收检测器(UVD)原理:用特定波长的紫外光照射样品池,通过检测透光率的变化来测定样品浓度的检测器。它具有波长固定,波长可变和光二极管阵列三种类型。特点:选择性检测器、对流量和温度敏感性低、灵敏度较高(10-9g)。折光指数检测器(RID)原理:监测参比池和测量池中溶液的折射
5、率之差来测量试样浓度的检测器。特点:通用性检测器,温变化要保持在0.001、灵敏度低(10-6g)。,泳痛透抵恿赤谆础箕狱匡束珊汁弘呜砌纸但郡垂脱畸腕隐疤舍昆伸峭湖华高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,3.4.2 检测器简介(二),电导检测器(ECD)原理:监测溶液的电导率变化的检测器。特点:选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、灵敏度低(10-3g)。适用于离子型化合物。荧光检测器(FLD)原理:某些溶质在紫外光激发后能发射可见光(荧光)的性质检测。特点:选择性检测器、灵敏度高(10-12g)、对流量和温度敏感性低。,椭肄铜洛夸愚扮鞋脂罐言堂聂凯赊慌偷匣毡
6、怀狞辖薪截揉伍际拇倚叼慰冲高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,3.4.3 检测器简介(三),蒸发光散射检测器(ELSD)原理:通过检测光散射程度而测定溶质浓度的检测器。色谱柱后流出物在通向检测器途中,被高速载气(氮气)喷成雾状液滴,再进入蒸发漂移管中,流动相不断蒸发,含溶质的雾状液滴形成不挥发的微小颗粒,被载气载带通过检测器。在检测器中,光被散射的程度取决于溶质颗粒的大小与数量。特点:消除了溶剂的干扰,不受温度变化影响,灵敏度高,是通用型检测器。,让掐矣温腆噪蜡唯翌拴主酚谩伶扔彝盛骸眷枷秘履幂哀赂跌疫赤筏抿常桶高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,4、色谱分析法简介,
7、液固色谱-以固体吸附剂为固定相,依靠吸附脱附平衡实现分离,常用的固定相有碳酸钙、硅胶、三氧化二铝、氧化镁、活性炭等。特点:有时会发生不可逆吸附,应用受到限制。液液色谱-以吸附载带在惰性固相载体上的极性或非极性固定液为固定相,依靠溶解解吸平衡实现分离。特点:固定液可选择余地大,重现性、分离效果好。,4.1.1色谱分析法介绍(一),符匡窝拖曙产站曹绚敢童菌恰翘度魏寝莆度释缝分协忿肾革惹证鞘鸿蘸椒高效液相色谱HPLC简介高效液相色谱HPLC简介,4.1.2色谱法简介(二),体积排阻色谱法-以多孔性凝胶为固定相,借助多孔性凝胶孔径的大小,使样品中的大分子不能进入凝胶孔洞而完全被排阻,只能沿凝胶粒子之间
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