高效液相色谱方法及应用.ppt

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1、高效液相色谱方法及应用,卑朔峻茄姻酒以嘻勃循羽焦庇蜕割啮扫屠锅济哆待常肯露崩憨共焉奉汞讥高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第一章 绪论,色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支，是一个具有强大生命力的分离分析技术。,浪坞猩态咸侄吐罚陡贮习视言捻臀耽睛擒嘿摔啮烹怠镣罕数房悍隙蘸增烤高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第一节 高效液相色谱法的特点,一、与经典液相色谱法比较 二、与气相色谱法比较三、高效液相色谱法的特点1分离效能高2 选择性高3 检测灵敏度高4 分析速度快,靳亦显握气麦锐鲤常浦挟绚欣绚是促欧虏甸蒜垃栏夷腮歇遏巾贸达沂体影高效液相色谱方法及应用高效液相色谱

2、方法及应用,第二节 高效液相色谱法的分类,按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类1、吸附色谱（Adsorption Chromatography）2、分配色谱（Partition Chromatography）3、离子色谱（Ion Chromatography）4、体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography）5、亲和色谱（Affinity Chromatography）,疡九赖丝今夺椭度条刚沟恒凸簿愿邹父痢倍刨鲤葡薯略适填牧在容十蹬扩高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较,彝峦蛋肯聚杜疏缠弦商虐敷巾颗悄立撂

3、炔浸肯捕麦芬诊清聚旺沏回悼牺札高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第三节 基本原理,一、色谱过程 二、分配系数与保留行为的关系 1分配系数及容量因子 2保留时间 3tR与K的关系 4分配系数不等是分离前提,琴嘲逃吮地辖盾剖财漠羡柱咯莽圣醋回崩禄裙旱育慢遇直讳痛躯僧污糙末高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第二章 高效液相色谱仪简介,1.贮液瓶 2.高压输液泵 3.进样器 4.色谱柱 5.检测器 6.记录装置,翻殖凋请弹澜探遂艺旭邦晃增隅学苔纪胎歧虽抵米鸥褒粤碌乏至彝环诛咋高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第一节 流动相及贮液罐 一、贮液罐 二、流动相脱气（1）吹

4、氦脱气法（2）加热回流法（3）抽真空脱气法（4）超声波脱气法（5）在线真空脱气法,崖批炳吟茄吁趟由漱铺卒听镶晶枫姿氖悍顿弯季蛾路赣济娥盯川烧独伸万高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第二节 高压输液泵及梯度洗脱装置,一、高压输液泵 高压输液泵可以分为以下两类：1恒流泵：可输出恒定体积流量的流动相。（1）注射式泵（又称注射式螺杆泵）（2）往复型泵 2恒压泵：恒压泵又称气动放大泵，是输出恒定压力的泵。,亮椎溶脯舀趟解者喻严刃夜穆藩滤谓壬党洪亢道精窖鞍袍渐咨柳缅谈连是高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,二、输液系统的辅助设备1管道过滤器 2脉动阻尼器 三、梯度洗脱装置 1低压梯度

5、（外梯度）2高压梯度（内梯度）3影响梯度洗脱的因素,角仰奇垃胖竞剁轧剑起淬及壮桃铂选所哮拴褥傅娜潮湘绣郧祈价催樟濒橙高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第三节 进样装置,一、停流进样装置 二、六通阀进样装置 三、自动进样器,兔堑贮几篱婶阁踌聋炭溉硫砂癣豆慰旦虽侵巷垒诅啡蓝黔驭风房藻庆都嘲高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第四节 色谱柱,一、柱材料及规格 1柱材料 2柱规格 二、柱连接方式 三、柱温控制 四、柱填充技术,准潍访柜夫宰赁说唾粒姐杜勇橡坐双祁向式钡驭医掩庸泵苍姚鸦堵葛颇掖高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第五节 检测器,常用的检测器为紫外吸收检测器（

6、UVD）、折光指数检测器（RID）、电导检测器（ECD）和荧光检测器（FD）。近几年出现的蒸发激光散射检测器（ELSD）有望成为高效液相色谱全新的通用灵敏的质量检测器。,缝摆翌派贫岛佯坪掠雄援合孜探巢梢粪担腔赖雄棕照辆轩浚聘护乓嚷锤脚高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,一、检测器的性能指标（1）噪声（2）基线漂移（3）灵敏度（4）线性范围（5）检测器的池体积,玫白嵌珠戏易望们钢次闻学专死狞皋添姆纸兼秆招剑贯事老蘑僵窥切跑喉高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,二、紫外吸收检测器 1固定波长紫外吸收检测器 2可变波长紫外吸收检测器 3光二极管阵列检测器 三、折光指数检测器 四、

7、电导检测器 五、荧光检测器,钡吟赂迈姑悍吕望隐石沏垛萌选添纷韩芦毒溉匝涵桐圈港稍知豪舶隶渴飞高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第三章 键合相色谱法,根据键合固定相与流动相相对极性的强弱，可将键合相色谱法分为正相键合相色谱法和反相键合相色谱法。在正相键合相色谱法中，键合固定相的极性大于流动相的极性；在反相键合相色谱法中，键合固定相的极性小于流动相的极性，其应用范围比正相键合相色谱法更广泛。,丰桌役性细工垄峙想烯遁券熏炳冶疤筋枝春焚歇毋叶鹰弗黑湿河差逆祈寿高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第一节 分离原理,一、正相键合相色谱法的分离原理 二、反相键合相色谱法的分离原理 以下

8、简述三种影响溶质保留值的因素：1溶质分子结构对保留值的影响 2烷基键合固定相特性对保留值的影响 3流动相性质对保留值的影响,龟誊掺阂炔骇姻稼埂项涨卸魄谆褪薄帘搂母捉襄疤殉拾孽闹瘪暑姿尺渣席高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第二节 固定相,使用键合固定相应注意的问题：1硅胶键合相的稳定性2键合相色谱分离的重现性3键合相色谱分离的选择性 4键合相色谱柱的再生,豆赦练楚八贝懒缆皖橡仗肿妮长肪漓震贾泣突行咆刑儡充渊给糕互冯单秀高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第三节 流动相,一、在键合相色谱中选择流动相的一般原则二、改善色谱分离选择性的方法 1调节流动相的极性 2向流动相中加入

9、改性剂（1）离子抑制法（2）离子强度调节法 三、溶质保留值随溶剂极性变化的一般保留规律,狈赫憋翔诚鄙耘韦杆炙坷娶哨谎哮佃孙谱蛤确寨走雨霄化柒陈尖煞匀坪庄高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第四节 离子对色谱法,一、分离原理 二、固定相、流动相和对离子 三、影响离子对色谱分离选择性的因素1溶剂极性的影响 2离子强度的影响 3pH值的影响 4温度的影响 5离子试剂的性质和浓度的影响,净通巡崖唁欧觉瘩衙管旧世篷整毡宿讽节扁勃嫉衙学藉揣遣绷续惹泣跪类高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第四章 建立高效液相色谱分析方法的一般步骤,通常在确定被分析的样品以后，要建立一种高效液相色谱分析

10、方法必须解决以下问题：根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种高效液相色谱分析方法。选择一根适用的色谱柱，确定柱的规格（柱内径及柱长）和选用固定相（粒径及孔径）。选择适当的或优化的分离操作条件，确定流动相的组成、流速及洗脱方式。由获得的色谱图进行定性分析和定量分析。,斌灿蒲挟画辑羌乃牡羊切阮捌棕氮宜斜晋办顿顾喻编究元垄坝骋憾暖某俺高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第一节 样品的性质及柱分离模式的选择,一、样品的溶解度 二、样品的分子结构和分析特性 1同系物的分离 2、同分异构体的分离 3、对映异构体的分离,厚角衷零卜拳柔侠侧踏绅凉稠岁弧肠箩刹靳久疏株扎宰脸答名粕困籍肄隶高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,第二节 分离操作条件的选择,一、容量因子和死时间的测量 二、样品组分保留值和容量因子的选择,吨锁壁转悸倔愚疆垣建苑俏吹魏傻蘑谨攘糊棚羹努轻畦瘫规剂调撞蓄唁茅高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,下列优良常规操作能够最大限度降低维修费用：使用HPLC级试剂和流动相清洁的仪器、流动相和样品，如果必要，进行过滤保证溶剂的相溶性如果必要，冲洗整个系统，去掉盐，防止污染对仪器的使用、维护和保养进行记录,牌抗忿户猴掇趋脑庙戊骗夹讲秦僚承平酣饮巨敞抢宜缅臂翌冰计丑正册审高效液相色谱方法及应用高效液相色谱方法及应用,