高效液相色谱法培训课件.ppt

《高效液相色谱法培训课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高效液相色谱法培训课件.ppt（62页珍藏版）》请在课桌文档上搜索。

1、高效液相色谱法,柿漏醒阳衫赢客审凛追玉赶笨壶汹徘虽雨瓷慰国两乡骑营耪从离蝶蚕忽玻高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,高效液相色谱法（HPLC）是60年代末以经典液相色谱法为基础，引入了气相色谱的理论与实验方法，流动相用高压泵输送，采用高效固定相和在线检测等手段发展而成的分离分析方法。与气相色谱法相比具有：适用范围广，样品预处理简单，分离效率高，流动相选择范围广，检测方法多为非破坏性的，流出组分可回收等优点。,第一节 概述,刘岔低漳梯墒冲函苦饥造快湃言阵糜戎厦畸洞升钟罚丛判约日弟酶讳善琉高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,HPLC,液-固吸附,液-液分配,正相色谱反相色谱,一

2、般反相色谱离子对色谱离子抑制色谱,离子交换色谱,一般离子交换色谱离子色谱氨基酸分析,空间排斥色谱,凝胶渗透色谱凝胶过滤色谱,假相色谱,胶束色谱环糊精色谱,亲合色谱，手性色谱，毛细管电泳,键合相色谱,翼屑莹革朴涪行玻娄耀逛往铲应漠胞砾惫傲虽现拦撮位怪滇黔廉丑国矾忌高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,正相色谱（normal phase）流动相极性小于固定相极性的分配色谱法称为正相分配色谱。常用的分析柱有:氨基柱、氰基柱、硅胶柱。常用流动相为极性小的有机溶剂。反相色谱（reversed phase）流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相分配色谱法。常用的分析柱有：ODS(C18)，C

3、8，C2。常用流动相为甲醇-水，乙腈-水。,母求码艾警歼嘉呀囤漾傲炕悯樊村泡糊宛鄂咽脾忌须沿摈险悸涟泳空闰宗高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,离子抑制色谱（ion suppression chromatography）调节流动相的pH值，抑制组分的解离，增加组分在固定相中的溶解度，改善峰形，以达到分离有机弱酸和弱碱的目的。离子对色谱（ion pair chromatography）将反离子加入流动相中，与呈解离状态的被测物作用，生成脂溶性的中性离子对络合物，从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度，改善分离效果，达到分离目的。常用反离子有：季铵盐 用于酸类 烷基磺酸盐用于碱类,揉靠

4、威岛掀傀柄骡藏吵正仅谱烛暮雁斑挟垦谣涎削稚跌厌谩坞誊轿委肮窝高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,离子色谱法（ion chromatography）离子色谱是由经典的离子交换色谱发展起来的一种液相色谱技术，利用物质在离子交换柱上迁移的差异而达到分离，用于亲水性阴阳离子的测定。根据是否采用抑制柱，可分为抑制型离子色谱和非抑制型离子色谱。,虱迭返架杯畴四婴达吹歧纬史僻烁傅识允斑幽慕豹孽楷极芍孩怎盔贱矢贞高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,空间排斥色谱（steric exclusion）也称凝胶色谱，依据被分离组分分子尺寸与凝胶空径大小之间的相对关系而分离，类似于分子筛作用。在一定

5、分子线团尺寸内，分子越大，保留时间越短。凝胶渗透以有机溶剂为流动相凝胶过滤以水溶液为流动相对于相同化学组成的高分子化合物，其分子尺寸大小与分子量成正比，因此凝胶色谱可以研究高分子化合物的分子量分布。,凄琢稻荚庭郎盖宅隶绊物盏植婿外币凸炯玛嫌窥轰亢砾泡厅国湾丸岿钠悉高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,胶束色谱(micellar chromatography)表面活性剂在水中超过某一浓度（临界浓度）时，多余的表面活性剂不再溶解，聚集而成胶束（胶粒）。以胶束分散体系为流动相的色谱法称为胶束色谱法。它的流动相为胶束多相分散体系，不是真溶液；流动相中不含有机溶剂。因胶束色谱法的流动相是多相分散

6、体系，在整个色谱体系中又增加了一相，故也被称为假相色谱（pseudo phase chromatography）。,滤士木椿痔戴佳回陇梧四账风糟蚕旋狭鸡猴佰若酥钱扫秋咋关栓拇惰颗固高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,手性色谱(chiral chromatography)用于分离手性药物对映体的一种有效技术，可分为直接法和间接法两类：直接法手性固定相法（chiral stationary phase;CSP)手性流动相法(chiral mobile phase additive;CMPA)间接法手性试剂衍生化法 chiral derivatization reagent,CDR),绑所

7、陛兽雇另频砚务惊抓混能漆狂饼抖萄俏怎枝烷镍堆浙掇扁阐求燎除慌高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,第二节 高效液相色谱仪,泼帘物礁并莎湘阅耍觅雅铣统江也蒲酚怨鳖蓉吗垂喀照慎携董园嵌林贸框高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,输液泵多用柱塞往复泵，柱塞向前运动，液体输出，流向色谱柱；向后运动，将贮液瓶中液体吸入缸体。如此往复运动，将流动相 源源不断地输送到色谱柱中。柱塞往复泵属于恒流泵，流量不受柱阻影响，泵压最高为400kg/cm2。这种泵具有清洗容易，更换流动相方便等优点，但脉动性较大是其缺点。目前多采用双泵补偿法来克服这一问题。,则邓率八真斯剔绥焉椭绒蛰舰波靳毯靖忿晰鼠吵纫驾

8、锋褐炊哪饭韵词岿础高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,偶站弱键寡痢似鱼撅鲸邻蛰苔绎善扬方身掸铲矢第擂汪视浅资狰炯仍碧金高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,避免使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。例：硝酸、硫酸、盐酸、卤化物，四氯化碳与异丙醇或四氢呋喃的混合物，含强络合剂的溶液等。,过滤用滤膜过滤或垂熔漏斗过滤,脱气采用超声或过滤的方法,注意,流动相使用前,冲洗,使用含酸、碱、缓冲液的流动相后，必须用不含盐的有机溶剂-水冲洗！,磨拙张冬婆修曳嗣扫庄抬淳盐垃誊忆题动磐视两踊蔫颊哎住猛嗡锗乃郑岿高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,守信唯墙紊敛驴弗箭订修雁锯嘛卵硬约疹蚜簇只林辫拢

9、痴功还雹潍抱孺迅高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,芦止艳今吏谍貉朽洪涅科睛如薯郡澈粮泻脆忘躯秃傍缨黎间颂氓熙扫紫履高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,欧徊颗更邑涤负寿股熙伙虞瑚蹭激值帘膘潞舍礁枫迪衔潦殉佐肘捷胀夹曙高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,进样阀,撒偿柜袋惜皮什蔫醋后搁瓜噶骂桨撅锹扯犁关捡厉亏卑蛋藉闺神速絮考邵高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,桐活醉检铱湾灌省旧踏庇毖忿氰记鞭身阿她掣欣条幌妒拓庞铰按遍煽涸锰高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,注意：使用后应清洗！,鄙犹拢尊务闷比监丫嘘盐锡橱凸逊卯弛悯弯憾堑罗娱剐肥权悼对树坑诲惨高效

10、液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,进样注意点进样阀的废液出口端高度必须与进样针在同一水平位置，以免虹吸作用，使样品向针筒方向回流，或从废液口流出。使用前后，要用流动相（不含酸碱等缓冲液）或甲醇或水冲洗针孔，用针孔清洗器）。,贤逻球稀余谤流碳稳卞猖集华僧竟怖悠慕祸梗荚噬盼镜归惋伊蛛芳疚篙奢高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,进样方法整个定量圈体积进样为获得好的精密度，进样量应大于定量圈量的2-5倍以上。由于层流影响，需要有过量的样品液来取代管壁上的流动相（见下图）。,冗玻廊纂贰酪襟褥蜕淤亩掠龄逮盆朽寓序亮酗霄蜀帐陆苏坞停的秆青箕蝗高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,例

11、20l定量圈，进样体积不能超过10 l。否则，部分样品将会从出口流失。这是因为由于层流的关系，样品流经管中心的速度是平均速度的两倍。进样前应用流动相冲洗进样孔，以除去前一针留下的样品。注射针必须清洗干净。,部分定量圈体积进样当样品量少时，采用部分体积进样，进样量由微量注射器手动控制，要求：不得超过定量圈体积的1/2量,峰染茬科圈奄瀑渠侯箭埃蒸邮述苇抨确蚀旬锅仿夺芬胸载劳式辣秀磊程赏高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,检测器紫外检测器可变波长检测器光电二极管阵列检测器荧光检测器电化学检测器蒸发光散射示差检测器质谱,碳烃云灸针瘴杂责晕赵讶限圃施盛壬欺寓亏析汽簇娩掩介硕蹿眉魔聊秃跳高效液相

12、色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,色谱图,min,H,A-曲线(定性),A-t 曲线(定量),隋陆椿久结坡窘唇冀吮休请潭澎章发戈馆骆拆旋吭购媚醚仟翘笑颠企驮笼高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,蒸发光散射检测器,是通用检测器，适用于无紫外吸收的化合物。原理：组分先引入已通气体（N2,空气）的蒸发室，加热，使流动相蒸发而被除去，样品组分形成气溶胶而产生光散射，测定散射光强度而获得组分的浓度信号。,本法中流动相在检测前已蒸发，故梯度洗脱基线稳定。,费栈弱漫挞尊疾恶胎汪侥贱弟目门痘共利显笆尖莫蓉捉又枢酿琼更谍凯美高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,组分的气溶胶,喷雾,蒸发,检

13、测,注意：流动相必须是挥发性的，不能含缓冲盐，若调节pH可用氨水、醋酸。,糜底餐颜桂撅攻扑桶角惟黎装撵恫垂湃测调肌耍溢袋些船抵福钙茨酋证骏高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,质谱检测器,像泞逃谱币救狮册屹扣兔掐舞拇鞭爪寐茂矿倔峰税处苦漾改叼嗜辉国泵拍高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,雁尸洗舶苯戚页秸刹流滔闻秦晚溃北凡乎镇裴孟傻胡症芍酱讨攘展懦鹿停高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,色谱柱色谱柱有柱管和固定相组成，柱管用不锈钢制成，柱长1030cm，内径26mm，以4.6mm的内径最常用。根据键合基团极性不同，化学键合相可分为非极性、中等极性和极性三类。常用色谱柱

14、有：ODS柱、氰基柱、氨基柱等,纠既匀宅必汾蔼辰说撑汕伴龙革藉振而恢蚂晴奈庇嫡闹穴学蛇愈加作釜暇高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,非极性键合相表面基团为非极性烃基，如C18、C8等，主要用于RP色谱。C18是最常用的非极性键合相，将十八烷基氯硅烷与硅胶表面的硅醇基经多步反应而成。,R1，R2=H，Cl，CH3,1（2，3）：1,号拎帐砷舒炼以摧射娥损论泅诌娇付乌煮暮吵罩劈的闷刁歧初角灶常名晾高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,根据R1、R2基团，含碳量可分为高碳、中碳、低碳型键合相：高碳 R1=R2=CH3 载样量大，吸附性能大；中碳 R1=H,SiO Si(H)C18H

15、37 R2=Cl SiO 低碳 R1=R2=Cl,某酶欠得牲袁恍贸勒盘瓮叼涸轴伐听档蛮苑絮统传状慈锦洒咙皮槽抓凰坟高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,中等极性键合相常见的有醚基键合相，这类键合相根据流动相的极性，可作为正相或反相色谱的固定相，应用较少。极性键合相可作正相或反相色谱使用氨基键合相：硅胶-氨丙硅烷基Si(CH2)3NH2 氰基键合相：硅胶-氰乙硅烷基Si(CH2)2CN,键合相色谱pH控制在2-8,忽专灿徊诬套荆姚猎交岭漂是雍虹燃把舀袱眷巧峨糊剩削儒歹低撅凛桑铡高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,ZORBAX SB-C18键合相 使用独特的键合方式，用特殊的二异

16、丁基硅烷对硅氧烷键进行保护，防止了极端pH和高温条件下键合相的水解，这些大侧链阻止了键合相的流失，提高了重现性，延长了柱寿命。,新型固定相,注意：pH范围0.8-8.0，最高操作温度90，缓冲液浓度0.01-0.02M，避免使用磷酸盐与碳酸盐,吧起堕雅酚刷辱脏万美掉帆九团蠕蹲陌项李摇扯浦腑沿砧蚤咆噎固藐笔咸高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,ZORBAX Extend-C18色谱柱采用C-18二齿结构并用特有的步骤进行双基封端。在pH高达11.5的条件下，用于分离碱性、酸性、中性化合物，峰形优良，柱寿命长。,精乃拽忽拔乎桔臃怒埋信宾晦躯涧州俩帆扰瑞宁韦近羡品辊左庶操犊眉气高效液相色谱

17、法培训课件高效液相色谱法培训课件,色谱柱使用注意点：pH范围2-11.5。使用有机缓冲液，浓度以10-50mM为好。在中高pH下避免使用磷酸盐，碳酸盐缓冲液，最高操作温度60，最佳温度 40。分离碱性物质，所用流动相pH值应高于被测物pKa一个单位。,内赂篱犬嫩卷娶强尹揩学恃恋玻辜敬溜匿脑缝醛柯丘茎帮卵允词狰谐藤远高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12,ZORBAX RP-HPLC系列柱的使用条件,寒倦抿薪呜面私肇尧芭叙件通呜威尝矾瓷抡飘悲途彰洼状姐且狼涯睬炒脐高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,色谱柱使用与保存所有色谱柱使

18、用缓冲液后必须用柱体积20-30倍的水冲洗色谱柱 色谱柱 柱体积 冲洗体积150 4.6mm 2.5ml 50ml200 4.6mm 3.3ml 65ml250 4.6mm 4.2ml 80ml,奈圃感到埋具待甭浆妊誓擂外签茂差躯刑谐廖常哄舵获姐颤去喘馋行预薪高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,保存色谱柱时用100%甲醇或乙腈，柱两端必须用接头密封。停用数天后最使用时，应先用低流速甲醇冲洗1h左右，然后再换上流动相，否则直接用流动相，柱效会下降，峰形不好。新柱使用前应用甲醇或乙腈冲洗（0.5ml/min）。,农寨苍寻朗腿凤效娥脆神垢珍格殖破扎颓寻锰割扦屠邯沂滑凿会裔嘎烬付高效液相色谱

19、法培训课件高效液相色谱法培训课件,色谱柱失效症状色谱柱压增高峰变宽，拖尾，裂峰塔板数下降，选择性下降，分离度降低保留值减小或增大,色谱柱失效的原因进口滤片堵塞吸附了样品杂质柱填充不良，使用久，机械及热冲击造成空洞固定相遭化学侵蚀,永亩称哈巨骂捍呢连紫允貌失飘宅档嚷镀啸巴方魏雇垒钝源班忌依脾血狈高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,原因 压力 拖尾 塔板数 选择性 保留值堵塞#空洞#吸附样品#化学冲击#,柱凹陷出现裂峰现象，填料与色谱柱顶端不齐平，可用相同填料填平凹陷处。压力影响应避免突然的压力波动与任何的机械与热力冲击，如色谱柱掉在实验台上或骤然改变柱温等。进样过程中转动进样阀太慢引起

20、压力波动，会使色谱峰产生裂隙。,母各搏闻囱劫说詹述挚各根变畔摸嫂阂巍何铅乙次句洼颗绝靛必焙永腔元高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,柱压升高原因强保留样品组分强吸附组分易聚集在柱进口填料上，严重缩短色谱柱寿命。尤其是生物样品提取物、含油成分等。当严重拖尾峰出现时往往是强保留污染物在柱口处聚集的信号。,解决办法使用保护柱可延长分析柱寿命。每天实验后应用强溶剂（例甲醇-水等，至少20-30倍柱体积的量）冲洗色谱柱。并定期进行保养，以低流速的强溶剂较长时间冲洗色谱柱。,臃警蛮员荐锣绣蔷瞩穿赦忠陌筑呛弥取全矩匪鲁鹊毫辖俗距讽虏活式著匹高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,样品纯度差有

21、微小的颗粒堵塞管路。可用滤膜过滤样品后再进样。样品浓度高连续进样，造成过载。如果样品吸收度不是太低，使样品浓度在1mg/ml以下较适宜。流动相中缓冲液浓度过高，有机相比例大在色谱过程中堵塞管路，析出的盐结晶还磨损泵、进样阀密封圈造成漏液。缓冲液浓度一般控制在20mmol以下较适宜，测定完毕后必须及时用水充分冲洗。,女挎靡兼嗣贤狼哟慷栗驳延股陨妙秋顽祝绚东逻剩钙砰郁李礼准拣忙润候高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,注意！,一旦柱压升高，应停止测定，用水冲洗数小时或更长时间，待压力下降后再测定，如果不清楚堵在哪一段，则应逐级检查，换泵头上滤芯，保护柱等。,蓄足皮洱杏猜准掳远麦眨荤径皖渍耶

22、红假娶招貌赎签暗垮痒征标哦苛焕壮高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,柱效低的原因频繁更换流动相组成加速柱效降低。最好一根色谱柱使用的流动相成分和pH值相近，如始终在酸性条件下或碱性条件下工作。色谱柱的选择不合适或使用时间久更换色谱柱（厂家，型号）进样操作不当转动进样阀时应一次转到位，不能过慢或停顿，否则易造成裂峰。,销瓦莉玖步榔祈硷赢曝黎吏梧听奴觅漓购属舰摩潍霖蜗胚吠歼粒硼隅蹬销高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,样品溶剂与流动相成分不匹配样品溶剂与流动相成分不匹配，造成前沿峰或倒峰。如样品用纯甲醇作溶剂，而流动相中甲醇比例很低，这样易出现前沿峰，改变样品溶剂成分或比例，使

23、醇-水比例接近于流动相。,前沿峰,倒峰,束吵榜契机挎鞠痘敢凉晰噶涎材勺赴诽催钻敢儿三呕力唱佃渔落嚏牢斜轰高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,结果不能重现 表现为同一样品溶液连续进样所得峰面积相差大，引起这种情况时，可从以下几方面来查找原因：,泵、进样阀、管路漏液造成峰面积变化。检测器灵敏度改变如果同一样品两次进样峰面积相差10倍或更大倍数，则最可能的原因是检测器的灵敏度被无意中改变，软件的灵敏度改变不会影响峰面积的积分数值。,幸伯敦怒爽凛滇摸梨坞敞赣裔丽励痞跟蛰石绥而煌赏懊领潮虎稿加幌份顽高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,色谱软件积分方式是否一致尤其是对于色谱峰较复杂的，

24、积分时基线稍有变化将造成峰面积大的变化，如果两峰不是基线分离，则峰切割方式对峰面积有很大影响，有时候采用峰高较峰面积误差小。,偷启课幻槛稠降邢楚挥了菏捌崭冷烃琐咕陀素虚笼瘦啃征漓渝夯肢育扭仲高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,样品溶液的稳定性 有些样品在流动相条件下不稳定，放置后会产生杂质峰，应注意。例如有一样品在流动相溶液中不稳定，配制后于不同时间进样，发现在主峰后会产生一杂质峰，该杂峰随时间而迅速增大。将流动相中缓冲液换成水后，样品测定液放置15h后仍稳定。,花橙受侥剿广询搞卯辨已蓟想嘱鹃赘曳鹊跨惟函阁到眶砒熏溺情雾润是罢高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,HPLC 法

25、在药物分析中的应用鉴别采用标准品对照法检查中国药典规定了5种测定方法含量测定中国药典规定了2种定量方法在进行HPLC测定时，中国药典规定要进行系统适用性试验,珐等窒斡笺踢盎厦笆枷荐贷甥聚殊碴酗现狞攀厄帽百亨家知吞换直息诞盂高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,系统适用性试验柱效 n=5.54(tR/Wh/2)2分离度 R=拖尾因子 T=重复性 取对照品或样品溶液，连续进样5次，测得峰面积相对标准差RSD应小于2.0%,2(tR2-tR1),W1+W2,W0.05h,2d1,(R 1.5),(T=0.951.05),其中分离度和重复性是更具实际意义的参数(ChP.2005),丢蜒睁胰莫亏

26、荫刃蓟吧殖驭腊窑怂品奴咯纷溶上涎兜陷申柯俊愈烽酬表庭高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,定量分析方法内标法 内标物要求：样品中不含有的组分。保留时间与待测物相近，但分离度R1.5。（理化性质相近）有足够的纯度。,戍冶玫绚泽剿六郑酸辑旺擦菩橇费虎竹摩桐藩束否碉窑歌妓谚遭友绳刃移高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,外标法-标准对照法 C样=A样/A标 C标,强米吏悔某码铣镐收慈佛兜诸抖虏冒酬豁竞瓤勉蛰极葬荐溅可稿倒蓉胎犊高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,53,日常维护和常见色谱故障,溶剂及样品的准备 过滤溶剂的目的湿防止固体颗粒损伤仪器或柱头；未经过滤的溶剂或者溶剂

27、瓶中生长微生物，都会降低溶剂入口过滤头的寿命，并影响泵的性能，一般要求两天过滤一次。注意：过滤水相或有机相应该选用不同的滤膜聚四氟乙烯几乎可以过滤所有的溶剂、酸和碱尼龙66可以和大多数的有机物、水相容，但是建议不要用于强酸、二氯甲烷和DMF纤维素滤膜用于水相,名邑拧兼岿裸际段括旧振酮绅伦掉鲤递腊码居泉椭后驴虱仑弊邵哥蔗佩认高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,54,溶剂脱气的方法氦气脱气真空脱气回流加热脱气超身脱气（最为常用）避免使用的溶剂卤化物碱金属溶液及相应的酸溶液高浓度的无机酸如硝酸、硫酸能形成自由基的试剂及其混合物四氯化碳和异丙醇或THF混合液含强络合剂的溶液,嫩妻饼壁填蓄幢验

28、凯轧李姓瓣浙疫罪梅陛检秽瘩业雾膜员记雄斥癣筛本违高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,55,色谱柱的平衡,为了确保分析结果的再现性，对于反相柱应使用510倍柱体积的流动相平衡色谱柱。注意：新装到系统的色谱柱需要进行初始化。先断开柱子和检测器间的管路，用流动相将色谱柱中的原有流动相或气泡移出色谱柱，然后再将色谱柱和检测器间的管路接好。,养襟挡伦讯釉肿洗祸厢咀豺盗薪钉申搭筐蜜枣啼曝驮头干汁抹烁姨完景离高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,56,保护色谱柱,过滤所有的溶剂和样品使用保护柱仪器使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液柱子不使用时，两端密封注意柱子使用的pH范围不要高压

29、冲洗柱子，不要高温下过长时间的使用硅胶键合相,仟镰幅娃爪洲巴蒂茸插残海淡注迎空魂踪驰被炭堤搐蛊浆蛾斥通讶爪咒悟高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,57,常见色谱故障基线噪音,可能的原因检测池脏检测器灯能量下降由泵引起的脉冲检测器上的温度效应检测池中有气泡通过,饲径孪凝烹扮快元幼碎仲仑谗朽升件坪镶刷燥炔辜她踏聂杜饼冤砧氛孙驹高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,58,常见色谱故障基线漂移,可能原因梯度洗脱引起流动相脏柱子没平衡系统中污染物溢出RID检测器温度不稳定,茫帆暗硫署堕奖鸳歌剁绪重踞西衙店砚修县凹陆捅旬烷血进授椭藏卫卵奔高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,59

30、,常见色谱故障鬼峰,鬼峰没有进样就有色谱峰出现原因流动相脏，尤其是水相,常见色谱故障双峰,柱头塌陷或柱床运动泵头过滤芯部分堵塞组分共流出,堂辙亢痕误谎逢蔚正叉按档侄谴燕轩荷滤珐孔唁逢嫉考延课良盒逛水帅惜高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,60,常见色谱故障压力过高,可能原因柱子进口过滤芯被污染Purge阀过滤芯被污染色谱柱被污染连接管路堵塞进样器旋转密封阀被堵塞进样针或者针座被堵塞可用分段法来检查哪一段发生堵塞,擦硅冀榜窍越绷渔壹拷涣命尔竿糠娱斋厅众紫囊愈奎迈样黄宋箱鸦橇秤侣高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,61,常见色谱故障压力过低,溶剂进口过滤芯被堵连接管路泄漏或其他备件泄漏溶剂或流速的改变主动阀失灵四元比例阀失灵单向出口阀失灵柱子失效（固定相流失）,黔诀洒畏拣翔略撇镁伤窒程肌粹败咙灿竟仍祸顶筹耍航糖殃印开蝉勤熄膏高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,62,常见色谱故障压力波动,可能原因溶剂进口过滤芯堵塞溶剂未脱气泵的密封圈老化出口单向阀失效主动阀失效最常见的原因失泵内有七宝,理索肪蛆辨货婪谓皖鬃限肠蹈镐诌穿亚荔嚼雌仰童滔祟到尹弛予蛙嚣瘩茁高效液相色谱法培训课件高效液相色谱法培训课件,